第六章芳酸与其酯类药物分析(2)

第六章芳酸及其酯类药物的分析 第一节典型药物分类与性质一 分类 根据结构分为 苯甲酸类 水杨酸类 其它芳酸 1 苯甲酸类代表药物 苯甲酸 钠 丙磺舒 甲芬那酸 2 水杨酸类代表药物有 阿司匹林 水杨酸 钠 对氨基水杨酸 钠 3 其它芳酸代表药物 氯贝丁酯 布洛芬 二 结构分析 包括 芳酸 芳酸酯 芳酸盐 共同点 苯环 羧基 不同点 不同的取代基 如酚羟基 芳伯氨基等 三 性质1 性状 大多数是结晶性固体少数为液体 水杨酸甲酯 苯甲酸苄酯 2 溶解性 游离芳酸类药物 几乎不溶于水 易溶于有机溶剂芳酸碱金属盐易溶于水 3 酸性 芳酸类药物分子中具有 COOH 所以显酸性药用芳酸pKa在3 6之间 具有酸性 可以与碱成盐 4 紫外吸收 具有苯环 所以具有紫外吸收 一FeCl3反应 紫色 第二节鉴别试验 1 水杨酸及其盐 阿司匹林 2 苯甲酸的碱性水溶液或中性溶液与三氯化铁试液生成碱式苯甲酸铁盐的赭色沉淀 苯甲酸钠 FeCl3 H2O赭色沉淀 NaCl 2Cl 3 丙磺舒加少量的氢氧化钠试液使生成钠盐后 在PH约 0 6 0水溶液中与三氯化铁试液反应 即生成米黄色沉淀 布洛芬的无水乙醇溶液 加入高氯酸羟胺 无水乙醇试液及N N 双环己基羧二亚胺 DCC 无水乙醇试液 混合后 在温水中加热20分钟 冷却后 加高氯酸铁 无水乙醇溶液 即呈紫色 JP 15 的方法 二 重氮化 偶合反应具有芳伯氨基结构的药物 如对氨基水杨酸钠等 在盐酸酸性溶液中 与亚硝酸钠试液发生重氮化反应 生成重氮盐 与碱性 萘酚偶合产生橙红色沉淀 这一反应称为重氮化 偶合反应 具芳伯氨基或潜在芳伯氨基的药物 直接 对氨基水杨酸钠 盐酸普鲁卡因 苯佐卡因 盐酸普鲁卡因胺间接 贝诺酯 对乙酰氨基酚 扑热息痛 醋氨苯砜 甲酚那酸加硫酸溶解后 与重铬酸钾试液反应 即呈黄色 随即变成棕绿色 甲酚那酸溶于硫酸后 加热 则溶液呈黄色 并产生绿色荧光 JP 15 方法 三 氧化反应 四 水解反应 五 分解产物的反应 苯甲酸盐 五 紫外光谱法丙磺舒 225nm和249nm下有最大吸收 甲酚那酸 279nm和350nm处有最大吸收 二氟尼柳贝诺酯布洛芬氯贝丁酯 六 红外光谱法苯甲酸 丙磺舒 甲酚那酸水杨酸 阿司匹林 对氨基水杨酸钠等布洛芬 氯贝丁酯七 薄层层析法八 高效液相色谱法阿司匹林 第三节特殊杂质检查 一 阿司匹林中特殊杂质的检查1 炽灼残渣2 重金属3 溶液的澄清度检查碳酸钠试液中不溶物 主要有 酚类 如苯酚 醋酸苯酯 水杨酸苯酯 乙酰水杨酸苯酯原理 杂质在碳酸钠试液中不溶 而阿司匹林溶于碳酸钠试液 4 水杨酸来源 生产过程中乙酰化不完全或贮藏过程中水解产生 原理 阿司匹林无酚羟基 不与高铁反应 水杨酸有酚羟基 与高铁反应生成紫堇色5 易碳化物 二 对氨基水杨酸钠中特殊杂质的检查 杂质来源 未反应完全的原料间氨基酚 遇热受潮生成间氨基酚 再被氧化成二苯醌型化合物 检查方法 双相滴定法 ChP2005 P140 HPLC USP29 间氨基酚不仅导致变色 且有毒性 不超过0 25 三 二氟尼柳中有关物质的检查中国药典2005 薄层色谱法和反相高效液相色谱法美国USP 29 薄层色谱法检查单个杂质不能超过0 2 同时检查 有机挥发性杂质 和 残留溶剂 四 甲芬那酸中特殊杂质的检查1 干燥失重 2 灼烧残渣 3 铜盐 检查 分光光度法 原子吸收分光光度法 4 有关物质检查 薄层色谱法 五 氯贝丁酯中特殊杂质的检查氯贝丁酯以对氯酚为原料 同时 分解也可以产生对氯酚 对氯酚毒性极大 各国药典均检查对氯酚 检查方法 1 气相色谱法2 高效液相色谱法 第四节含量测定 一 酸碱滴定法 一 直接滴定法 原理 阿司匹林具有游离羧基 呈酸性 以标准碱滴定液直接滴定 方法 取本品约0 4g 精密称定 加中性乙醇 对酚酞指示液显中性 20ml溶解后 加酚酞指示液3滴 用氢氧化钠滴定液 0 1mol L 滴定 每1ml的氢氧化钠滴定液 0 1mol L 相当于18 02的C9H8O4 1 测定方法及计算Ka 3 27 10 4反应摩尔比为1 1 2 讨论 中性乙醇溶解阿司匹林且防止酯键水解 中性 是对中和法所用的指示剂而言 优点 简便 快速缺点 酯键水解干扰 不断搅拌 快速滴定 酸性杂质干扰 如水杨酸 适用范围 不能用于含水杨酸过高或制剂分析 只能用于合格原料药的含量测定 二 水解后剩余滴定法原理 阿司匹林酯结构在碱性溶液中易于水解 加入定量过量的氢氧化钠滴定 加热使酯水解 剩余的碱用酸回滴 需做空白试验校正 目的 NaOH在加热时易吸收CO2用酸回滴定会消耗酸 影响结果 USP 29 方法 取本品约1 5g 精密称定 加入氢氧化钠滴定液 0 5mo1 L 50 0m1 混合 缓缓煮沸10min 放冷 加酚酞指示液 用硫酸滴定液 0 25mo1 L 滴定剩余的氢氧化钠 并将滴定结果用空白试验校正 每1ml的氢氧化钠滴定液 0 5mol l 相当于45 04mg的C9H8O4 2NaOH 过量 H2SO4 Na2SO4 2H2O 剩余滴定 水解 反应摩尔比为1 2优点 消除了酯键水解的干扰缺点 酸性杂质干扰 羟苯乙酯含量测定亦可用此法 三 两步滴定法 适用于阿司匹林片剂片剂稳定剂 酒石酸或枸橼酸分解产物 水杨酸和醋酸第一步 中和第二步 水解与测定 取本品10片 精密称定 研细 精密称取适量 约相当于阿司匹林0 3g 置锥形瓶中 加中性乙醇 对酚酞指示液显中性 溶解后 振摇使阿司匹林溶解 加酚酞指示液3滴 滴加氢氧化钠滴定液 0 1mol L 至溶液显粉红色 再精密加氢氧化钠滴定液 0 1mol L 40m1 置水浴上加热15分钟并时时振摇 迅速放冷至室温 用硫酸滴定液 0 05mol L 滴定 并将滴定的结果用空白试验校正 每lml的氢氧化钠滴定液 0 1mo1 L 相当于18 02mg的C9H8O4 第一步中和 第二步水解后剩余滴定 水解 2NaOH 过量 H2SO4 Na2SO4 2H2O反应摩尔比为1 1本法消除了酸性杂质的干扰 降低了酯键水解的干扰 剩余滴定 也适合于氯贝丁酯 消除供试品中共存的酸性杂质 片剂含量测定结果的计算 剩余滴定法 二 亚硝酸钠滴定法对氨基水杨酸钠具有芳伯氨基 能在盐酸存在下与亚硝酸钠定量地发生重氮化 生成重氮盐 三 双相滴定法 苯甲酸钠ChP 2005 溶剂 水 乙醚 取本品1 5g 精密称定 置分液漏斗中 加水25m1 乙醚50ml及甲基指示液2滴 用盐酸滴定液 0 5mo1 L 滴定 随滴随振摇 至水层显橙红色 分取水层 置具塞锥形瓶中 乙醚层用水5ml洗涤 洗液并入锥形瓶中 加乙醚20m1 继续用盐酸滴定液0 5mo1 L 滴定 随滴定随振摇 至水层显持续的橙红色 每1ml的盐酸滴定液 0 5mol L 相当于72 06mg的C7H5NaO2 乙醚的作用 萃取反应生成的苯甲酸 使水相中的中和反应进行到底 滴定中要强力振摇 随着滴定不断进行 苯甲酸不断被萃取入有机溶剂层 使滴定反应完全 终点清晰 优点 消除了反应产物的干扰 四 紫外分光光度法1 直接紫外分光光度法酚磺乙胺注射液ChP 2005 精密量取本品适量 约相当于酚磺乙胺0 25g 置200ml量瓶中 用乙醇稀释至刻度 摇匀 精密量取2m1 置100ml量瓶中 用乙醇稀释至刻度 摇匀 在1cm吸收池中 以溶剂为空白 于305nm的波长处测定吸收度 按C10H17NO5S的吸收系数 为159计算含量 注射液含量测定结果的计算 紫外分光光度法吸收系数法 2 过滤后的紫外分光光度法丙磺舒片 取本品10片 精密称定 研细 精密称取适量 约相当于丙磺舒60mg 置200m1量瓶中 加乙醇150ml与盐酸溶液 9 100 4m1 置70 水浴上加热30min 放冷 用乙醇稀释至刻度 摇匀 滤过 弃去初滤液 精密量取续滤液5ml 置100ml量瓶中 加盐酸溶液 9 100 2m1 用乙醇稀释至刻度 摇匀 于1cm吸收池中 以溶剂为空白 在249nm的波长处测定吸收度 按C13H19NO4S的吸收系数 为338计算 紫外分光光度法吸收系数法 二 离子交换 紫外分光光度法氯贝丁酯强碱性阴离子交换树脂吸附酸性杂质后 对照法定量测定氯贝丁酯含量 USP29 P150 三 柱分配色谱 紫外分光光度法USP 29 阿司匹林胶囊可同时定量测定阿司匹林和水杨酸 1 水杨酸的限量测定固定相 FeCl3SA保留 冰醋酸洗脱 306nm测水杨酸的量 2 阿司匹林含量测定固定相 NaHCO3AAS SA保留冰醋酸洗脱 280nm测总量 原料药对照法 五 高效液相色谱法阿司匹林胶囊 泡腾片 栓剂的含量测定ChP 2005 离子抑制色谱法内标法定量色谱条件 填充剂C18 流动相 甲醇 1 冰醋酸 检测波长280nm系统适应性实验 测定法 第五节体内药物分析一 血清中阿司匹林和水杨酸的高效液相反相液相色谱法色谱条件 色谱柱C18 流动相 检测波长 内标物系统适应性试验 回归方程 线性范围 回收率 二 尿中丙磺舒的固相萃取 反相液相色谱法分离色谱条件 色谱柱 LiChrospher100RP18 流动相 检测波长 内标物 依他尼酸 适应性试验 回归方程 线性关系和回收率 三 血浆中布