血清葡萄糖的测定(GOD-POD法)ppt课件

血清葡萄糖的测定 GOD POD法 血清测定是临床生物化学检验中的常规检测项目之一 2020 4 17 2 实验分为以下部分 实验目的实验原理实验试剂实验操作数据分析注意事项临床意义 2020 4 17 3 实验目的 掌握酶法血清葡萄糖浓度的原理掌握血糖变化的临床意义 2020 4 17 4 实验原理 血清葡萄糖是用以过氧化物酶的偶联酶反应定量法测定的 葡萄糖氧化酶 GOD 利用氧将葡萄糖氧化为葡萄糖酸 同时释放过氧化氢 过氧化物酶 POD 催化过氧化氢氧化色素原 如4 氨基安替比林和苯酚 并使色素原氧化成色素 即Trinder反应 红色醌类化合物的生成量与葡萄糖的含量成正比 葡萄糖 GOD 红色醌类化合物 POD 2020 4 17 5 实验试剂 器材5ml移液管 50或100ul微量可调式移液管 721E型分光光度计 1比色皿 37度恒温水浴锅 试剂0 1磷酸盐缓冲液 Ph 7 0 称取无水磷酸二氢钾5 3g 溶于蒸馏水800ml中 调节pH 7 0 定容至1L酶试剂取过氧化物酶1200U 4 氨基安替比林10mg 叠氮化钠100mg 溶入磷酸盐缓冲液80ml中 调节pH值至7 0 用磷酸盐缓冲液定容至100ml 置于4度保存 可稳定存在3个月 酚溶液称取重蒸馏酚100mg 溶入蒸馏水100ml中 用棕色瓶储存 酶 酚混合试剂将酶试剂及酚溶液等量混合 4度可放一个月 2020 4 17 6 实验试剂 12mmol苯甲酸钠溶液称取苯甲酸钠1 6g 于800ml蒸馏水中加温助溶 冷却后加蒸馏水定容至1L 葡萄糖标准储存液 100mmol L 称取已干燥至恒重的无水葡萄糖1 082g 溶入约70ml12mmol L苯甲酸钠溶液中定容至100ml 2h以后方可使用 葡萄糖标准工作液 5mmol L 吸取葡萄糖标准储存液5 00ml 置入100ml容量瓶中 用12mmol L 苯甲酸钠溶液稀释至刻度 混匀 2020 4 17 7 实验操作 混匀 置于37 C水浴中 保温25min 在波长510nm处比色 以空白管调零 读取标准管和测定管的吸光度 血清葡萄糖的含量 5mmol dL 参考值 3 89 6 11mmol L 2020 4 17 8 注意事项 葡萄糖氧化酶法可直接用于测定脑脊液葡萄糖含量 但不能直接测定尿液葡萄糖含量 因为尿液中尿酸等干扰性物质浓度过高 可干扰氧化酶反应 造成结果假性偏低 因红细胞的酵解将导致测定结果偏低 建议测定样品以草酸钾 氟化钠为抗凝剂以抑制糖酵解 严重黄疸 溶血及乳糜样血清应先制备无蛋白血滤液 然后在进行测定 2020 4 17 9 临床意义 生理性高血糖 可见于摄入高糖食物后 或紧张情绪肾上腺素分泌增加时 病理学高血糖 1 糖尿病 病理性高血糖常见于胰岛素绝对或相对不足的糖尿病患者 2 内分泌腺功能障碍 甲状腺功能亢进 肾上腺皮质功能及髓质功能亢进 引起各种对抗胰岛素的激素分泌过多 或升高血糖的激素增多引起的高血糖 现已归入特异性糖尿病中 3 颅内压增高刺激血糖中枢 如颅外伤 颅内出血 脑膜炎等 引起血糖增高 4 脱水引起的高血糖 如呕吐 腹泻和高热等也可使血糖轻度增高 生理性低血糖 见于饥饿和剧烈运动时病理性低血糖 特