药物含量测定方法.doc

药物含量测定方法一、巴比妥类药物1、 银量法根据巴比妥类药物在适当的碱性溶液中，易与重金属离子反应，并可定量的形成盐的化学性质，可采用银量法进行本类药物及其制剂的含量测定。在滴定过程中，巴比妥类药物首先形成可溶性的一银盐，当被测供试品完全形成一银盐后，继续用硝酸银滴定液滴定，稍过量的银离子就与巴比妥类药物形成难溶性的二银盐沉淀，使溶液变浑浊，以此指定滴定终点。为了减少误差，曾用丙酮作为介质来克服滴定过程中温度变化的影响和改善终点的观察，结果不能令人满意。中国药典改用甲醇及3%无水碳酸钠溶剂系统，采用银-玻璃电极系统电位法指示终点，使本法获得显著改善。测定异戊巴比妥的方法：取本品约0.2g，精密称定，加甲醇40ml使溶解，再加新鲜配制的3%无水碳酸钠溶液15ml，照电位滴定法，用硝酸银滴定液（0.1mol/L）滴定，即得。每1ml硝酸银滴定液（0.1mol/L）相当于22.63mg的C11H18N2O3。2、 酸碱滴定法 巴比妥类药物成弱酸性，可作为一元酸以标准碱液直接滴定。 在水-乙醇混合溶剂中的滴定：由于巴比妥类药物在水中的溶解度较小，生成的弱酸盐易于水解，影响滴定终点的观察，故滴定时多在醇溶液或含水的醇溶液中进行。以麝香草酚酞为指示剂，滴定至淡蓝色为终点。 测定方法：取本品约0.5g，精密称定，加乙醇20ml溶解后，加麝香草酚酞指示剂6滴，用氢氧化钠滴定液（0.1mol/L）滴定，并将测定结果用空白试验校正，即得。每1ml氢氧化钠滴定液（0.1mol/L）相当于22.63mg的C11H18N2O3。 本法操作简便，但终点较难判断，采用空白对照可帮助终点的确定。由于操作过程中易吸收空气中的二氧化碳，而使终点的淡蓝色褪去，采用空白对照亦难以取得满意的结果，因此可采用电位法指示终点。3、 紫外分光光度法巴比妥类药物在酸性介质中几乎不电离，无明显的紫外吸收，但在碱性介质中电离为具有紫外吸收特征的结构，因此可采用紫外分光光度法测定其含量。本法专属性强、灵敏度高，被广泛用于巴比妥类药物及其制剂的测定，以及固体制剂的溶出度和含量均匀度的检查，也常用于体内巴比妥类药物的检测。直接测定的紫外分光光度法：本法是将供试品溶解后，根据供试品溶液的pH值，选用其相应的max处，直接测定对照品溶液和供试品溶液的吸光度，在计算药物的含量。测定方法：取装量差异项下的内容物，混合均匀，精密称取适量（约相当于硫喷妥钠0.25g），置500ml量瓶中，加水使溶解并稀释至刻度，摇匀，精密量取适量，用0.4%氢氧化钠溶液并定量稀释成每1ml中约含5g的溶液；另取硫酸苯妥对照品，精密称定，用0.4%氢氧化钠溶液并定量稀释制成每1ml中约含有5g的溶液。照分光光度法，在304nm的波长处测定吸光度。根据每支的平均装量计算。每1mg硫喷妥相当于1.091mg的C11H17N2NaS。供试品中硫喷妥钠的量按下式计算： 硫喷妥钠（mg）=1.091*Cs*Au/As*D*10-3 硫喷妥钠标示量（%）=硫喷妥钠的量（mg）*平均装量/供试品量*100%二、芳酸及其酯类药物以ASA及其制剂为例 苯甲酸pKa 4.20 水杨酸pKa 2.98酸性较强羧酸邻位-OH，吸电子基团，使酸性增加；并有氢键，更增加了其极性，因此，可采取直接滴定法（一）酸碱滴定法1、 直接滴定法pKa 36 的药物溶于中性醇,可直接用NaOH滴定pKa 69 的药物要用非水溶液滴定法乙醇作用：溶解ASA；防止ASA在水溶液中滴定过程易水解中性乙醇：对指示剂(酚酞)而言为中性，可消除滴定误差滴定方法：取本品约0.4g，精密称定，加中性乙醇（对酚酞指示液显中性）20ml溶解后，加酚酞指示液3滴，用氢氧化钠滴定液（0.1mol/L）滴定。每1ml的氢氧化钠滴定液（0.1mol/L）相当于18.02mg的C9H8O4。丙磺舒(Ch.P. BP. JP等) 苯甲酸(Ch.P等)均采用本法2、 水解后剩余滴定法 USP23方法：取本品约1.5g，精密称定，准确加NaOH液(0.5mol/L)50.0ml，水浴上煮沸15min，放冷，以酚酞为指示剂，用H2SO4液(0.25mol/L)滴定剩余的NaOH，并将滴定结果用空白试验校正。每1ml的NaOH液(0.5ml/L)相当于45.04mg的C9H9O43、 两步滴定法 用于Aspirin片测定，片剂中有稳定剂 水解产物水杨酸SAHAc为了避免这些酸类的干扰，采用两步滴定法第一步：NaOH滴定所有的酸：ASA，CA，TA，SA，HAc第二步（二）双相滴定法 Ch.P 2005用于苯甲酸钠的测定苯甲酸钠为芳酸碱金属盐，易溶于水；苯甲酸不溶于水，不利于终点的正确判断。因此，利用苯甲酸能溶于有机溶剂的性质，采用双相滴定法。滴定方法：取本品约1.5g，精密称定，置分液漏斗中，加水25ml、乙醚50ml及甲基橙指示液2滴，用盐酸滴定液（0.5mol/L）滴定，边滴边振摇，至水层显橙红色；分取水层，置具塞锥形瓶中，乙醚层用水5ml洗涤，洗液并入锥形瓶中，加乙醚20ml，继续用盐酸滴定液（0.5mol/L）滴定边滴边振摇，至水层显持续的橙红色。每1ml盐酸滴定液（0.5mol/L）相当于72.06mg的C7H5NaO2。（三）柱分配色谱-紫外分光光度法ASA capsule 等制剂除用上述两步滴定法外，最好用色谱法，可以分离酸性杂质和辅料以及稳定剂等，经分离后同时测定ASA与SA 如USP用柱分配色谱-UV测定ASA Capsule（四）HPLC阿司匹林测定方法：取装量差异项下内容物，研细，精密称取适量（约相当于阿司匹林0.1g），置100ml量瓶中，用1%冰醋酸无水甲醇溶液溶解并稀释至刻度，摇匀，滤过，精密量取续滤液5ml,置100ml量瓶中，用1%冰醋酸无水甲醇溶液稀释至刻度，摇匀，精密量取20l,注入液相色谱仪，记录色谱图；另取阿司匹林对照适量，用1%冰醋酸无水甲醇溶液溶解并定量稀释成每1ml中约含50g的溶液，同法测定。三、芳香胺类药物1、亚硝酸钠滴定法原理：条件：（1）加入适量溴化钾加快反应 （2）加入过量盐酸1:2.56（3）室温10 30 （4）滴定管尖端插入液面下滴定终点指示方法：（1）永停法（2）外指示剂法（碘化钾淀粉）2、非水溶液滴定法注：滴定前滴加醋酸汞溶液，以除去氢卤酸的干扰盐酸丁卡因加醋酐以突出终点；例：盐酸利多卡因的非水滴定反应过程：3、分光光度法 对乙酰氨基酚在257nm波长处有最大吸收，中国药典2005版采用百分吸收系数（ ）法，测定对乙酰氨基酚的含量。例：对乙酰氨基酚、片剂、咀嚼片、注射液、栓剂、胶囊、颗粒剂【含量测定】 取本品约40mg，精密称定，置250ml量瓶中，加0.4%氢氧化钠溶液50ml溶解后，加水至刻度，摇匀，精密量取5ml，至100ml量瓶中，加0.4%氢氧化钠溶液10ml，加水至刻度，摇匀，照紫外可见分光广度法（药典Chp2005版附录A），在257nm的波长处测定吸光度，按C8H9NO2的吸收系数（ ）为715计算，即得。4、 比色法芳伯氨基的重氮化偶合反应生成有色偶氮染料，专属性差盐酸普鲁卡因与1,2-萘醌-4-磺酸钠溶液反应生成棕红色化合物，适用于盐酸普鲁卡因及其制剂的常规分析5、快速荧光测定盐酸普鲁卡因胺结构中的芳伯氨基与荧胺反应，生成荧光物，可在400nm、485nm波长处测定荧光强度，较重氮化法灵敏、简便，适用于普鲁卡因胺制剂的测定。6、高效液相色谱法 ( HPLC )以苯甲酸为内标，可以同时测定盐酸普鲁卡因注射液中的普鲁卡因及其降解产物对氨基苯甲酸（PABA），不需分离提取，准确简便。色谱条件（色谱柱、流动相、检测器）测定方法（供试品溶液、对照品溶液的制备，进样量，计算方法）应用示例：对乙酰氨基酚急性中毒的血药浓度测定色谱条件：Nova-PackC18柱（4m, 150mm3.9mm），Nova-PackC18预柱柱温：25，流动相为甲醇水（50:50）流速：0.8ml/min二极管阵列检测器，检测波长254nm血浆样品制备：取静脉血34ml，置含肝素抗凝剂的离心管中，离心分离5min (3000rpm)，上清液为待测血浆。吸取上述血浆1ml，加饱和硫酸锌溶液1ml，沉淀蛋白后，加入乙醚5ml涡旋混合1min，离心20min(3000rpm)。精密吸取乙醚液3.0ml于50 氮气流吹干，冷至室温，以蒸馏水500l溶解残渣，取10l进样。对照品溶液的制备：配制对乙酰氨基酚甲醇溶液（10mg/ml），并用甲醇逐级稀释成浓度为0.01mg/ml5mg/ml的对照品溶液，4 冰箱存放备用。四、苯乙胺类药物1、非水溶液滴定法弱碱性冰醋酸为溶剂、醋酸汞消除氢卤酸的干扰、结晶紫为指示剂（盐酸甲氧明的指示剂为萘酚苯甲醇，也可电位法指示终点）、若碱性较弱则加醋酐使突跃明显。2、溴量法基本原理：测定方法：取本品约0.1g，精密称定，置碘瓶中，加水20ml使溶解，精密加溴 滴定液(0.1mol/L)50ml，再加盐酸5ml,立即密塞，放置15分钟并时时振摇，注意微开瓶 塞，加碘化钾试液10ml ，立即密塞，振摇后，用硫代硫酸钠滴定液(0.1mol/L)滴定，至 近终点时，加淀粉指示液，继续滴定至蓝色消失，并将滴定的结果用空白试验校正。每 1ml溴滴定液(0.1mol/L)相当于3.395mg 的C9H13NO2HCl。 3、比色法基本原理：注意：由于偶合剂（N-(1-萘基)-乙二胺）与亚硝酸也能显色干扰测定，所以在重氮化后，应加入氨基磺酸铵分解剩余的亚硝酸。4、提取酸碱滴定法原理：溶解性盐酸盐或硫酸盐可溶于水，游离碱不溶于水，溶于有机溶剂。方法：供试品溶于水或矿酸，加入适量碱性试剂使药物游离，用适当的有机溶剂提取，将提取液蒸干，残渣中加中性乙醇溶解，用标准酸滴定液直接滴定（或在提取液中加定量过量的标准酸滴定液，蒸去有机溶剂后，再用标准碱滴定液回滴定）。例：硫酸苯丙胺加水溶解加氢氧化钠试液8ml 加氯化钠使饱和乙醚多次提取合并乙醚液精密加硫酸滴定液（0.05mol/L）25ml振摇低温蒸去乙醚放冷至室温加甲基红指示液2滴用氢氧化钠（0.1mol/L）滴定。每1ml硫酸滴定液（0.05mol/L）相当于18.42mg的C18H26N2.H2SO4。5、荧光分光光度法 基本原理：肾上腺素含有的邻苯二酚结构，被弱氧化剂氧化，生成肾上腺素红，发生转位为N-甲基-3,5,6-三羟基吲哚（THI）。(Tri- Hydroxyl- Indole-)本法还可用于测定微量儿茶酚胺类药物。6、高效液相色谱法高效分离，高灵敏度和高选择性可用于制剂常规分析，临床药物监测和体内药物动力学研究。例1：重酒石酸去甲肾上腺素注射液分析色谱条件：色谱柱：ODS流动相：0.14%庚烷基磺酸钠溶液甲醇(65:35)，用磷酸调pH至3.00.1，流速：1.0ml/min检测波长：280nm测定方法：精密量取本品适量（约相当于重酒石酸去甲肾上腺素4mg），置25ml量瓶中， 加醋酸溶液（125）稀释至刻度，摇匀，取2l注入液相色谱仪，记录色谱图；另取重酒石 酸去甲肾腺素对照品适量，精密称定，加醋酸溶液（125）制成每1ml中含0.16mg的溶液， 同法测定。按外标法以峰面积计算，即得。 7、衍生化气相色谱法例：盐酸芬氟拉明 (fenfluramine hydrochloride)由于结构中的仲胺基极性极强，使得气相色谱法测定值波动较大，因此将样品溶解后经碱化乙酸乙酯提取，加入内标，提取液用三氟乙酸酐进行酰化衍生化，将衍生化产物在5%SE-30的色谱柱上分析，用FID检测器检测。五、杂环类药物1、非水溶液滴定法原理：一般方法：冰醋酸作为溶剂，若滴定氢卤酸盐，则加5%醋酸汞的冰醋酸溶液，用高氯酸(0.1mol/L)滴定，并用空白试验校正。问题讨论：适用范围：Kb10-8的有机碱盐酸根影响：高氯酸氢溴酸硫酸盐酸硝酸滴定剂稳定性：温度、贮藏条件都有影响终点指示方法：结晶紫指示剂，电位法应用实例：游离弱碱性药物：地西泮、尼克刹米或氯氮卓，基于氮原子的弱碱性可以结晶紫为指示剂，非水溶液直接滴定，终点颜色绿色蓝绿色蓝色不等。氢卤酸盐类药物：加入过量的醋酸汞冰醋酸溶液，使其形成难电离的卤化汞，再用高氯酸滴定，可用结晶紫、橙黄作为指示剂，或用电位法指示终点。硫酸盐类药物：硫酸为二元酸，但在非水介质中只显示一元酸解离为HSO4-2、铈量法原理：氧化还原适用范围：硝苯地平邻二氮菲指示剂吩噻嗪类药物自身颜色的变化3、 比色法（1）酸性染料比色法原理：在适当的介质中，碱性药物(B) 可与氢离子结合成(BH+)，而一些酸性染料可解离为(In-)，两者定量结合成有色络合物(BH+ In-)离子对，可被有机溶剂定量提取，在一定波长处测定其吸收，即可算出碱性药物的含量。例：硫酸阿托品片的含量测定对照品溶液的制备 精密称取在120干燥至恒重的硫酸阿托品对照品25mg，置25ml量瓶中，加水溶解并稀释至刻度，摇匀，精密量取5ml，置100ml量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，即得。 供试品溶液的制备 取本品20片，精密称定，研细，精密称取适量（约相当于硫酸阿托品2.5mg ），置50ml量瓶中，加水振摇使硫酸阿托品溶解并稀释至刻度，用干燥滤纸滤过，收集续滤液，即得。测定方法 精密量取对照品溶液与供试品溶液各2ml，分别置预先精密加入氯仿10ml的分液漏斗中，各加溴甲酚绿溶液取溴甲酚绿50mg与邻苯二甲酸氢钾1.021g，加0.2mol/L氢氧化钠溶液6.0ml使溶解，再加水稀释至100ml，摇匀，必要时滤过2.0ml，振摇提取2min后，静置使分层，分取澄清的氯仿液，照分光光度法（附录 B），在420nm的波长处分别测定吸收度，计算，并将结果与1.027 相乘，即得供试量中含有(C17H23N O3)2H2SO4H2O的重量。 影响因素：水性最佳pH值：使得BH+和In-最多酸性染料及其浓度：定量结合，产物溶解性好；可稍过量有机溶剂的选择：提取效率高，氯仿最理想水分的影响：影响结果，脱水剂或滤纸除去水分（2）钯离子比色法原理：吩噻嗪类药物的二价硫在pH20.1缓冲液中可与钯离子(Pb2+)形成红色络合物，10min呈色完全，可稳定2hour，在500nm波长附近有最大吸收，最适宜范围50g 250g4、 紫外分光光度法（1）直接分光光度法对照品溶液同时测定百分吸收系数（ ）例：奥沙西泮含量测定取本品约15mg，精密称定，置200ml 量瓶中，加乙醇150ml，于温水浴中加热，并时时振摇，使奥沙西泮溶解，放冷，用乙醇稀释至刻度，摇匀，精密量取5ml ，置100ml量瓶中，用乙醇稀释至刻度，摇匀，照分光光度法（附录 A），在229nm 的波长处测定吸收度；另精密称取奥沙西泮对照品约15mg，同法操作并测定；计算，即得。 （2） 萃取后分光光度法碱化，有机溶剂萃取游离型碱，使其与制剂辅料分离，再用分光光度法测定（3） 萃取双波长分光光度法碱化，有机溶剂萃取，在254nm、277nm波长处测定吸收，用吸收度之差计算含量，以消除抗氧剂的干扰。（4） 二阶导数分光光度法5、 气相色谱法分离效能好、灵敏度高、选择性好、用量少、分析速度快有机碱或其盐类均可直接GC分析，但盐解离的酸对色谱柱和检测器会损害，因此一般将生物碱盐的水溶液先碱化，用有机溶剂提取游离碱后再分析。6、高效液相色谱法（1）反相高效液相色谱法用于杂环类药物分析一般加入扫尾剂二乙胺或三乙胺例：盐酸环丙沙星滴眼液色谱条件与系统适用性试验 用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；0.05mol/L枸橼酸溶液-乙腈(82:18)用三乙胺调节pH值至3.5为流动相；检测波长为277nm。理论板数按盐酸环丙沙星峰计算应不低于 2000，盐酸环丙沙星峰与相邻杂质峰的分离度应符合规定。 测定法 精密量取本品2ml(约相当于环丙沙星6mg)，置50ml量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，精密量取5ml，置50ml量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶液。另精密称取在105干燥至恒重的盐酸环丙沙星对照品适量(约相当于环丙沙星20mg)，置50ml量瓶中，加水适量使溶解，并稀释至刻度，摇匀，精密量取2ml，置50ml量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，作为对照品溶液。分别取供试品溶液与对照品溶液各10l 注入液相色谱仪，记录色谱图，按外标法以峰面积计算。 （2） 离子对色谱法原理：将待测组份的反离子加入流动相中，与呈离解状态的药物作用，生成可逆的离子对化合物。测定杂环类药物中吡啶类、喹啉类等药物时，主要采用烷基磺酸盐（如戊烷磺酸钠、庚烷磺酸钠）或其他盐类。影响条件：流动相一般呈酸性，以利于生物碱的离解；离子对试剂的非极性部分越大，形成的离子对分配系数越大，保留时间越长（十二烷基磺酸钠庚烷磺酸钠戊烷磺酸钠）。六、维生素类药物维生素C1、 碘量法NaHSO3RCH(CH3)ORCH(CH3)OHSO3Na 白色溶于水2、2,6-二氯靛酚法七、甾体激素类药物1、UV法2,3,5-Triphenyltatrazolium chloride TTC 甲潜(Formazan)Red tatrazoline RT 深红色 max 480490nm2、异烟肼法3、Kober反应比色法硫酸亚铁铵加水溶解 + 浓H2SO4 + H2O混匀与苯酚八、抗生素类药物1、碘量法原理：青霉素与头孢菌素本身不与碘反应，但其碱性降解产物可消耗碘反应分两步进行水解反应氧化-还原反应 (无定量关系，受温度、pH值和时间等因素影响，应严格控制反应条件并采用标准品平行对照测定)空白试验：因样品中杂质会消耗碘，故应作空白试验。试验条件:（I2氧化）弱酸性（pH4.5） 碱 I2 IO3- + I- 酸 某些药物与碘生成复盐沉淀温度