第10章胺类药物分析

第十章 胺类药物的分析 学习目标 掌握 胺类典型药物的结构特征 性质及鉴别试验 熟悉 胺类典型药物的含量测定方法 化学分析测定方法 了解 胺类典型药物的仪器分析鉴别法 仪器分析含量测定方法 特殊杂质检查等 授课内容 第一节苯乙胺类药物分析第二节芳胺类药物分析第三节氨基醚衍生物类药物分析第四节磺胺类药物分析 第一节苯乙胺类药物分析 一 典型药物结构二 性质三 鉴别试验四 杂质检查五 含量测定 一 典型药物结构 肾上腺素重酒石酸去甲肾上腺素盐酸异丙肾上腺素 盐酸多巴胺盐酸去氧肾上腺素 一 典型药物结构 重酒石酸间羟胺硫酸沙丁胺醇盐酸麻黄碱 盐酸克仑特罗盐酸甲氧明 二 性质 碱性本类药物分子结构中具有烃氨基侧链 其氮为肿胺氮 因此显弱碱性 其游离碱难溶于水 易溶于有机溶剂 其盐可溶于水中 金属离子络合反应本类药物分子结构中具有邻苯二酚 或苯酚 结构 可与重金属离子发生络合反应而显色 如可与三氯化铁 硫酸铜等试液反应显色 可用于该类药物的鉴别 还原性由于本类药物分子结构中具有邻苯二酚 或苯酚 结构 具有还原性 露置空气中或遇光 热易氧化 颜色渐变深 在碱性溶液中更易氧化变色 可用此性质进行该类药物的含量测定 光学活性多数药物分子结构中具有手性碳原子 具有旋光性 紫外及红外吸收的性质本类药物结构中具有苯环及取代基 存在共轭体系 在一定波长处具有紫外和红外吸收特征 可利用此性质进行定性或定量分析 其他性质药物分子结构中的苯环上有其他特征官能团 如盐酸克仑特罗具有芳香第一胺结构 各具有特征反应 均可供分析用 一 三氯化铁反应 三 鉴别试验 肾上腺素 重酒石酸去甲肾上腺素 盐酸异丙肾上腺素和盐酸去氧肾上腺素等药物的分子结构中具有酚羟基 与Fe3 离子络合显色 加入碱性溶液 随即被高铁离子氧化而显紫色或紫红色 示例 中国药典 2010年版 肾上腺素药物的鉴别试验 取肾上腺素约2mg 加盐酸溶液 9 1000 2 3滴溶解后 加水2ml与三氯化铁试液1滴 即显翠绿色 再加氨试验1滴 即变紫色 最后变成紫红色 二 氧化反应 本类药物分子结构中多数具有酚羟基 具有较强还原性 易被过氧化氢 碘 铁氰化钾等氧化剂氧化而呈现不同的颜色 肾上腺素在中性或酸性条件下 被碘或过氧化氢氧化后 生成肾上腺素红 放置可变为棕色多聚体 盐酸异丙肾上腺素在偏酸性条件下被碘迅速氧化 生成异丙肾上腺素红 加硫代硫酸钠使碘的棕色消退 溶液显淡红色 重酒石酸去甲肾上腺素在上述条件下比较稳定 几乎不被碘氧化 二 氧化反应 示例重酒石酸去甲肾上腺素鉴别 1 中国药典 2010年版 规定本品加酒石酸氢钾饱和溶液 pH3 56 10ml溶解 加碘试液1ml 放置5分钟后 加硫代硫酸钠试液2ml 溶液为无色或仅显微红色或淡紫色 2 在此条件下肾上腺素和盐酸异丙肾上腺素可被氧化产生明显的红棕色或紫色 在pH6 5的缓冲液中 这三种药物均可被碘氧化产生红色 故在pH6 5条件下加碘试液 无法区别这三种药物 三 与硫酸铜试液反应 盐酸麻黄碱分子结构中芳环侧链具有氨基醇结构 可与硫酸铜试液反应生成蓝紫色配合物 无水配位化合物及含有2分子水的配位化合物易溶于乙醚显紫红色 具有4分子水的配位化合物则溶于水层显蓝色 因此加乙醚振摇后 放置 乙醚层即显紫红色 水层变成蓝色 示例 中国药典 2010年版 盐酸去氧肾上腺素与硫酸铜试液反应如下 取盐酸去氧肾上腺素10mg 加水1ml溶解后 加硫酸铜试液1滴与氢氧化钠试液1ml 摇匀 即显紫色 加乙醚1ml振摇 乙醚层应不显色 四 与亚硝酸铁氰化钠反应 rimini试验 重酒石酸间羟胺分子中具有脂肪伯氨基 加水溶解后 加亚硝基铁氰化钠试液 丙铜数滴与碳酸氢钠少量 在60 水浴上加热后即显红紫色 此为有脂肪族伯胺的专属反应 该反应中所用的丙酮必须不含甲醛 五 酸根离子鉴别反应 由于本类药物分子结构中具有烃氨基侧链 显弱碱性 其游离碱难溶于水 易溶于有机溶剂 其盐可溶于水中 在临床应用上本类药物多数都与某酸成盐 因此某些酸根离子 如盐酸根离子 硫酸根离子也可用来鉴别 如在 中国药典 2010年版 中盐酸去氧肾上腺素应用氯化物鉴别试验 硫酸沙丁胺醇应用硫酸盐鉴别试验来鉴别药物 六 紫外吸收光谱法 本类药物在紫外光区有较强的紫外吸收 中国药典 2010年版 采用紫外吸收光谱法鉴别的药物有盐酸异丙肾上腺素 重酒石酸间羟胺 盐酸多巴胺 硫酸沙丁胺醇 盐酸克仑特罗等 示例重酒石酸间羟胺的鉴别取重酒石酸间羟胺 加水制成每1ml约含0 1mg的溶液 照紫外 可见分光光度法测定 在272nm的波长处有最大吸收 七 红外吸收光谱法 红外吸收光谱法是药物鉴别常用的方法 中国药典 2010年版 收载的盐酸去氧肾上腺素 重酒石酸间羟胺 盐酸异丙肾上腺素 盐酸多巴胺 硫酸沙丁胺醇 盐酸甲氧明 盐酸麻黄碱 盐酸克仑特罗等均采用此法进行鉴别 四 杂质检查 一 酮体检查 1 来源这些药物在生产中均由其酮体氢化还原制得 如果氢化不完全 易引入酮体杂质 2 方法酮体在紫外光区310nm波长处有最大吸收 而药物本身在此波长处几乎无吸收 利用此光谱性质的差异即可进行检查 典型药物的酮体检查条件及要求 二 有关物质 1 薄层色谱法 中国药典 2010年版 规定盐酸去氧肾上腺素用此法进行有关物质检查 方法 避光操作 取本品 加甲醇溶解并定量稀释制成每1ml中约含20mg的溶液 作为供试品溶液 精密量取适量 加甲醇稀释成每1ml中约含0 10mg的溶液 作为对照溶液 照薄层色谱法试验 吸取上述两种溶液各10 l 分别点于同一硅胶 薄层板上 以异丙醇 三氯甲烷 浓氨溶液 80 5 15 为展开剂 展开 晾干 喷以重氮苯磺酸试液使显色 供试品溶液如显杂质斑点 与对照溶液的主斑点比较 颜色不得更深 0 5 2 高效液相色谱法在所列举的典型药物中 中国药典 2010年版 规定盐酸异丙肾上腺素 肾上腺素 盐酸麻黄碱 重酒石酸去甲肾上腺素 盐酸多巴胺 硫酸沙丁胺醇 盐酸甲氧明采用此法进行有关物质检查 示例硫酸沙丁胺醇的有关物质检查方法 1 色谱条件及系统适用性试验用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂 以磷酸盐缓冲液 取0 08mol L磷酸二氢钠溶液 用磷酸调节pH值至3 10 0 05 甲醇 85 15 为流动相 检测波长为220nm 硫酸沙丁胺醇峰与相邻杂质峰的分离度应符合要求 2 溶液制备取本品适量 用水溶解并稀释制成每1ml中约含2mg的溶液 作为供试品溶液 精密量取1ml 置100ml量瓶中 加水稀释至刻度 摇匀 作为对照溶液 3 检查方法照高效液相色谱法试验 取对照溶液20 l 注入液相色谱仪 调节检测灵敏度 使主成分色谱峰的峰高约为满量程的20 再精密量取供试品溶液与对照溶液各20 l 分别注入液相色谱仪 记录色谱图至主成分峰保留时间的12倍 供试品溶液色谱图中如有杂质峰 单个杂质峰面积不得大于对照溶液主峰面积的0 5倍 0 5 各杂质峰面积的和不得大于对照溶液主峰面积 1 0 五 含量测定 一 非水溶液滴定法 1 常用测试条件 2 注意 高氯酸为滴定液 冰醋酸为溶剂 加入醋酸汞试液以消除氢卤酸的干扰 并用结晶紫指示液指示终点等 但也有部分药物例外 如盐酸甲氧明测定中以萘酚苯甲醇指示终点 如碱性较弱 终点不明显可加入醋酐 提高其碱性 使终点突跃明显 加醋酐时应注意防止氨基被乙酰化 乙酰化物碱性很弱 如为伯氨基的乙酰化物 以结晶紫为指示剂时不能被滴定 用电位滴定法尚可测定 但突跃很小 这样就会使滴定结果偏低 仲氨基的乙酰化物 以指示剂法和电位滴定法都不能被滴定 但在低温时可防止乙酰化 所以加冰醋酸溶解样品后 应在放冷的条件下再加醋酐 二 亚硝酸钠滴定法 示例取盐酸克仑特罗约0 25g 精密称定 置100ml烧杯中 加盐酸溶液 1 2 25ml使溶解 再加水25ml 照永停滴定法 用亚硝酸钠滴定液 0 05mol L 滴定 每1ml亚硝酸钠滴定液 0 05mol L 相当于15 68mg的盐酸克仑特罗 盐酸克仑特罗结构中具有芳伯氨基 在酸性溶液中可与亚硝酸钠反应 可用亚硝酸钠滴定法测定其含量 三 溴量法 在 中国药典 2010年版 中 重酒石酸间羟胺 盐酸去氧肾上腺素及其注射液均采用溴量法测定含量 1 原理药物分子中的苯酚结构 在酸性溶液中酚羟基的邻 对位活泼氢能与过量的溴定量地发生溴代反应 再以碘量法测定剩余的溴 根据消耗的硫代硫酸钠滴定液的量 即可计算供试品的含量 2 实例解析重酒石酸间羟胺的含量测定 1 基本原理 示例重酒石酸间羟胺的含量测定取本品约0 1g 精密称定 置碘瓶中 用水40ml使溶解 精密加溴滴定液 0 05mol L 40ml 再加盐酸8ml 立即密塞 放置15分钟 注意微开瓶塞 加碘化钾试液8ml 立即密塞 振摇 用少量水冲洗碘瓶的瓶塞和瓶颈 加三氯甲烷1ml 振摇 用硫代硫酸钠滴定液 0 1mol L 滴定 至近终点时 加淀粉指示液 继续滴定至蓝色消失 并将滴定结果用空白试验校正 每1ml溴滴定液 0 05mol L 相当于5 288mg的C9H13NO2 C4H6O6 2 测定方法 四 紫外 可见分光光度法 在 中国药典 2010年版 中盐酸克仑特罗栓应用紫外 可见分光光度法进行含量测定 示例方法 取本品20粒 精密称定 切成小片 精密称取适量 约相当于盐酸克仑特罗0 36mg 置分液漏斗中 加温热的三氯甲烷20ml使溶解 用盐酸溶液 9 100 振摇提取3次 20ml 15ml 10ml 分取酸提取液 置50ml量瓶中 用盐酸溶液 9 100 稀释至刻度 摇匀 滤过 收集续滤液 作为供品溶液 另取盐酸克仑特罗对照品适量 精密称定 加盐酸溶液 9 100 溶解并定量稀释制成每1ml中含7 2 g的溶液 作为对照品溶液 精密量取对照品溶液与供试品溶液各15ml 分别置25ml量瓶中 各加盐酸溶液 9 100 5ml与0 1 亚硝酸钠溶液1ml 摇匀 放置3分钟 各加0 5 氨基磺酸铵溶液1ml 摇匀 时时振摇10分钟 再各加0 1 盐酸萘乙二胺溶液1ml 摇匀 放置10分钟 用盐酸溶液 9 100 稀释至刻度 摇匀 照紫外 可见光光度法 在500nm波长处分别测定吸光度 计算 即得 五 高效液相色谱法 利用液相色谱的高效分离 高灵敏度和高选择性的测定方法 对本类药物制剂进行含量测定 示例盐酸肾上腺素注射液的含量测定1 色谱条件与系统适用性试验用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂 以0 14mol L庚烷磺酸钠溶液 甲醇 65 35 用磷酸调节pH至3 0 0 1 为流动相 检测波长为280nm 理论塔板数按肾上腺素峰计算不低于3000 2 测定方法精密量取本品适量 约相当于肾上腺素3mg 置于25ml量瓶中 加醋酸溶液 1 25 稀释至刻度 摇匀 精密量取20 g 注入液相色谱仪 记录色谱图 另取肾上腺素对照品适量 精密称定 加醋酸溶液 1 25 稀释至刻度制成每1ml含0 12mg的溶液 同法测定 按外标法以峰面积计算 即得 第二节芳胺类药物分析 一 典型药物结构与性质二 鉴别试验三 杂质检查四 含量测定 一 典型药物结构与性质 苯佐卡因盐酸普鲁卡因 盐酸丁卡因 一 对氨基苯甲酸酯类药物 1 典型药物结构 2 性质 水解性分子结构中含酯键 易水解 其水解的快慢受光线 热或碱性条件的影响 苯佐卡因的水解产物是对氨基苯甲酸和乙醇 盐酸普鲁卡因的水解产物是对氨基苯甲酸和二乙氨基乙醇 盐酸丁卡因的水解产物是对丁氨基苯甲酸和二甲氨基乙醇 芳香第一胺的特性本类药物结构中具有芳香第一胺 除盐酸丁卡因外 可发生重氮化 偶合反应 具有还原性 易氧化变色 可与芳醛缩合成Schiff碱 弱碱性分子结构中脂烃胺侧链为叔胺氮原子 除苯佐卡因外 故游离体具有弱碱性 因此能与生物碱沉淀试剂发生沉淀反应 可用于鉴别 因其碱性较弱 在水溶液中不能用标准酸直接滴定 可采用非水溶液滴定法测定含量 对乙酰氨基酚醋氨苯砜 盐酸利多卡因盐酸布比卡因 二 酰胺类药物 1 典型药物结构 芳香第一胺的特性本类药物结构中具有芳香第一胺 除盐酸丁卡因外 可发生重氮化 偶合反应 具有还原性 易氧化变色 可与芳醛缩合成Schiff碱 水解产物易酯化对乙酰氨基酚和醋氨苯砜 水解后产生醋酸 可在硫酸介质中与乙醇反应 产生具有香味的乙酸乙酯 在 中国药典 2010年版 中醋氨苯砜用此反应鉴别 弱碱性盐酸利多卡因和盐酸布比卡因的脂烃胺侧链为叔胺氮原子 故游离体具有弱碱性 可与生物碱沉淀试剂发生沉淀反应 对乙酰氨基酚和醋氨苯砜不具有此侧链 亦无此类反应 可以区别 酚羟基的特性对乙酰氨基酚分子结构中具有游离的酚羟基 可与三氯化铁反应 此性质可与利多卡因和醋氨苯砜区别 与重金属离子发生沉淀反应盐酸利多卡因和盐酸布比卡因酰氨基上的氮可在水溶液中与铜离子或钴离子发生配位反应 生成有色的配位化合物沉淀 此沉淀可溶于三氯甲烷等有机溶剂后呈色 可用于鉴别 2 性质 一 重氮化 偶合反应 二 鉴别试验 苯佐卡因和盐酸普鲁卡因分子结构中具有游离芳伯氨基 在盐酸溶液中 可直接与亚硝酸钠进行重氮化反应 生成的重氮盐可与碱性 萘酚偶合生成有色的偶氮染料 对乙酰氨基酚和醋氨苯砜分子结构中具有潜在芳伯氨基 在盐酸或硫酸中加热水解后 生成具有游离芳伯氨基的化合物后 可与亚硝酸钠发生重氮化反应 生成的重氮盐可与碱性 萘酚偶合生成有色的偶氮染料 盐酸丁卡因分子结构中不具有芳伯氨基 无此反应 但其分子中的芳香仲氨在酸性溶液中与亚硝酸钠反应 生成N 亚硝基化合物的乳白色沉淀 可与具有芳伯氨基的同类药物区别 二 三氯化铁反应 对乙酰氨基酚分子结构中具有游离的酚羟基 能直接与三氯化铁试液反应呈蓝紫色 在 中国药典 2010年版 采用此法鉴别该药物 三 水解产物反应 1 盐酸普鲁卡因分子结构中具有酯键 在碱性加热条件下 水解生成对氨基苯甲酸钠和二乙氨基乙醇 前者加盐酸酸化 可析出白色沉淀 此沉淀能溶于过量的盐酸 后者为小分子化合物 并显碱性 在加热的条件下挥发 可使湿润的红色石蕊试纸变蓝 2 苯佐卡因结构中具有酯键 在碱性加热条件下 有乙醇生成 与碘试液可发生碘仿反应 鉴别方法 取本品约0 1g 加氢氧化钠试液5ml 煮沸 即有乙醇生成 加碘试液 加热 即生成黄色沉淀 并发生碘仿的臭气 盐酸利多卡因分子结构中具有芳酰氨基 因酰氨基上的氮可在水溶液中与铜离子或钴离子发生配位反应 生成有色的配位化合物沉淀 此沉淀可溶于三氯甲烷等有机溶剂后呈色 可用于鉴别 如盐酸利多卡因在碳酸钠试液中 与硫酸铜反应生成蓝紫色配位化合物 此有色物溶于三氯甲烷中显黄色 盐酸普鲁卡因 盐酸丁卡因和苯佐卡因等无此反应 在 中国药典 2010年版 中 采用此反应鉴别盐酸利多卡因 四 与重金属离子反应 课堂互动 请用两种简单的化学方法区别盐酸利多卡因和盐酸普鲁卡因 制备衍生物测熔点是国内外药典常用的鉴别方法之一 在本类药物中 中国药典 2010年版 收载的盐酸丁卡因采用此法进行鉴别 五 制备衍生物测熔点 示例方法 取盐酸丁卡因约0 1g 加5 醋酸钠溶液10ml溶解后 加25 硫氰酸铵溶液1ml 即析出白色结晶 滤过 结晶用水洗涤 在80 干燥 依法测定 其熔点约为131 六 紫外吸收光谱法 芳胺类药物分子结构中具有苯环及取代基 存在共轭体系 因此具有紫外吸收光谱特征 示例一醋氨苯砜取本品 加无水乙醇制成每1ml中约含5 g的溶液 照紫外 可见分光光度法测定 在256nm与284nm的波长处有最大吸收 示例二盐酸布比卡因取本品 精密称定 按干燥品计算 加0 01mol L盐酸溶液溶解并定量稀释制成每1ml中约含0 40mg的溶液 照紫外 可见分光光度法测定 在263nm与271nm的波长处有最大吸收 其吸光度分别为0 53 0 58与0 43 0 48 七 红外吸收光谱法 红外吸收光谱具有特征性强 专属性好等特点 因此国内外药典均把红外吸收光谱作为芳胺类药物的一种常用鉴别方法 在 中国药典 2010年版 中 所列举的这些芳胺类典型药物都应用红外吸收光谱法进行鉴别 三 杂质检查 一 盐酸普鲁卡因的杂质检查 1 检查项目 酸度 溶液的澄清度 对氨基苯甲酸 干燥失重 炽灼残渣 铁盐及重金属 2 实例分析 对氨基苯甲酸的检查 1 色谱条件及系统适用性试验用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂 以含0 1 庚烷磺酸钠的0 05mol L磷酸二氧钾溶液 用磷酸调节pH值至3 0 甲醇 68 32 为流动相 检测波长为275nm 取系统适用性试验溶液10 l 注入液相色谱仪 理论板数按对氨基苯甲酸峰计算不低于2000 盐酸普鲁卡因峰和对氨基苯甲酸峰的分离度应大于2 0 2 溶液的制备取盐酸普鲁卡因 精密称定 加水溶解并定量稀释制成每1ml中含0 2mg的溶液 作为供试品溶液 另取对氨基苯甲酸对照品 精密称定 加水溶解并定量制成每1ml中含1 g的溶液 作为对照品溶液 取供试品溶液1ml与对照品溶液9ml混合均匀 作为系统适用性试验溶液 3 检查方法取对照品溶液10 l 注入液相色谱仪 调节检测灵敏度 使主成分峰高约为满量程的20 精密量取供试品溶液与对照品溶液各10 l 分别注入液相色谱仪 记录色谱图 供试品溶液色谱图中如有与对氨基苯甲酸峰保留时间一致的色谱峰 按外标法以峰面积计算 不得过0 5 二 对乙酰氨基酚的杂质检查 1 一般杂质检查项目酸度 氯化物 硫酸盐 炽灼残渣 重金属和干燥失重 2 乙醇溶液的澄清度与颜色 1 方法取本品1 0g 加乙醇10ml溶解后 溶液应澄清无色 如显浑浊 与1号浊度标准液比较 不得更浓 如显色 与棕红色2号或橙红色2号标准比色液比较 不得更深 2 解析由于生产工艺中使用铁粉作为还原剂 可能带入成品中 致使乙醇溶液产生浑浊 中间体对氨基酚的有色氧化产物 在乙醇中显橙红色或棕红色 3 对氨基酚及有关物质 中国药典 2010年版 规定检查 对氨基酚及有关物质 采用高效液相色谱法来控制对氨基酚 偶氮苯 氧化偶氮苯 苯醌和醌亚胺等中间体 副产物及分解产物的量 4 对氯苯乙酰胺以对硝基氯苯为原料合成本品时 可能引入对氯苯乙酰胺 该杂质对人体的毒性较大 应严格控制其限量 为了更好的控制对乙酰氨基酚的质量 中国药典 2010年版 中增补了该项检查 检查方法采用的是高效液相色谱法 规定含对氯苯乙酰胺不得过0 005 四 含量测定 一 亚硝酸钠滴定法 1 原理具有芳香第一胺或潜在芳香第一胺的药物在酸性溶液中可与亚硝酸钠反应 生成重氮盐 可用亚硝酸钠滴定法测定含量 课堂互动 从结构出发分析盐酸利多卡因和盐酸布比卡因能否应用亚硝酸钠滴定法测定药物的含量 为什么 2 测定的主要条件 1 加入适量的溴化钾加快反应速度在盐酸存在下 重氮化反应的历程为 解析 整个反应的速度取决于第一步 而第一步反应的快慢与含芳伯氨基化合物中芳伯氨基的游离程度和NO 多少有密切关系 如芳伯氨基的碱性较弱 则在一定强度酸性溶液中成盐的比例较小 即游离芳伯氨基多 重氮化反应速度就快 反之 则游离芳伯氨基较少 重氮化反应速度就慢 所以 在测定中一般向供试液中加入适量溴化钾 使重氮化反应速度加快 溴化钾与盐酸作用产生溴化氢 后者与亚硝酸作用生成NOBr 由于 1 式的平衡常数比 2 式的约大300倍 即生成的NOBr量大得多 也就是在供试液中NO 的浓度大得多 从而加速了重氮化反应 若供试溶液中仅有HCl 则生成NOCl 解析 2 加过量盐酸加速反应 由于胺类药物的盐酸盐较其硫酸盐的溶解度大 反应速度也较快 因此多采用盐酸 盐酸的用量按其反应式 1mol的芳胺需与2mol的盐酸作用 但实际测定时往往加入过量的盐酸 尤其是某些在酸中难溶解得药物 往往要多加一些 原因是过量的盐酸有利于 重氮化反应速度加快 重氮盐在酸性溶液中稳定 防止生成偶氮氨基化合物 而影响测定结果 酸度加大 反应向左进行 故可以防止偶氮氨基化合物的生成 若酸度过大 又可阻碍芳伯氨基的游离 反而影响重氮化反应速度 太浓的盐酸还可使亚硝酸分解 所以 加入盐酸的量一般按芳胺类药物与酸的摩尔比约为1 2 5 6 3 室温 10 30 条件下滴定 通常温度高 重氮化反应速度快 但温度太高 可使亚硝酸逸失 并可使重氮盐分解 一般温度每升高10 重氮化反应速度加快2 5倍 但重氮盐分解的速度亦相应地加速2倍 所以滴定一般在低温下进行 由于低温时反应太慢 经试验 可在室温条件下采用 快速滴定法 进行 4 快速滴定法 重氮化反应为分子反应 反应速度较慢 故滴定不宜过快 为了避免滴定过程中亚硝酸挥发和分解 滴定时将滴定管尖端插入液面下约2 3处 一次将大部分亚硝酸钠滴定液在搅拌条件下迅速加入 使其尽快反应 然后将滴定管尖端提出液面 用少量水淋洗尖端 再缓缓滴定 尤其是在近终点时 因尚未反应的芳香第一胺药物的浓度极稀 须在最后一滴加入后 搅拌1min 5min 再确定终点是否真正到达 这样可以缩短滴定时间 也不影响结果 3 指示终点的方法 有电位法 永停滴定法 外指示剂法和内指示剂法等 药品标准中多采用永停滴定法指示终点 1 永停滴定法 中国药典 2010年版 规定用永停法指示亚硝酸钠滴定法的终点 利用两个电极上的氧化 还原反应 通过观察电流计指针的变化来判断终点 2 外指示剂法常用碘化钾 淀粉糊剂或指示液 滴定到达终点时 稍过量的亚硝酸钠在酸性溶液中氧化碘化钾 析出的碘遇淀粉即显蓝色 示例苯佐卡因含量测定方法取本品0 35g 精密称定 照永停滴定法 用亚硝酸钠滴定液 0 1mol L 滴定 每1ml亚硝酸钠滴定液 0 1mol L 相当于16 52mg的苯佐卡因 二 非水溶液滴定法 由于盐酸布比卡因侧链烃胺的叔胺氮具有弱碱性 中国药典 2010年版 中采用非水滴定法测定其含量 示例盐酸布比卡因的含量测定测定方法取本品0 2g 精密称定 加冰醋酸20ml与醋酐20ml溶解后 照电位滴定法 用高氯酸滴定液 0 1mol L 滴定 并将滴定的结果用空白试验校正 每1ml高氯酸滴定液 0 1mol L 相当于32 49mg的盐酸布比卡因 解析在 中国药典 2005年版 中盐酸布比卡因用非水溶液滴定法测定含量时 应用萘酚苯甲醇为指示剂指示终点 由于盐酸布比卡因碱性较弱 应用指示剂指示终点测定该药物含量时误差较大 为了更加准确地确定终点 从而测定药物含量 在 中国药典 2010年版 中该法改用电位滴定法指示终点同时加醋酐 提高了盐酸布比卡因的碱性 使终点突跃更明显 易于观察 误差较小 三 紫外 可见分光光度法 对乙酰氨基酚在0 4 氢氧化钠溶液中 于257nm波长处有最大吸收 具有紫外吸收光谱特征 可用于对乙酰氨基酚原料及其制剂的含量测定 在 中国药典 2010年版 中采用吸收系数 法 测定对乙酰氨基酚及其片剂 咀嚼片 栓剂 胶囊剂及颗粒剂的含量 示例对乙酰氨基酚胶囊的含量测定方法取装量差异项下的内容物 混合均匀 精密称取适量 约相当于对乙酰氨基酚40mg 置250ml量瓶中 加0 1mol L氢氧化钠溶液50ml与水50ml 振摇 用水稀释至刻度 摇匀 滤过 精密量取续滤液5ml 置100ml量瓶中 加0 4 氢氧化钠溶液10ml 加水至刻度 摇匀 照紫外 可见分光光度法 在257nm的波长处测定吸光度 按对乙酰氨基酚的吸收系数 为715计算 即得 四 高效液相色谱法 高效液相色谱法是药物含量测定常用的方法 中国药典 2010年版 收载的盐酸利多卡因采用此法进行含量测定 示例1 色谱条件与系统适用性试验用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂 以磷酸盐缓冲液 取1mol L磷酸二氢钠溶液1 3ml和0 5mol L磷酸氢二钠溶液32 5ml 加水稀释至1000ml 摇匀 乙腈 50 50 用磷酸调节pH值至8 0 为流动相 检测波长为254nm 理论板数按利多卡因峰计算不低于2000 2 测定方法取本品适量 精密称定 加流动相溶解并定量稀释制成每1ml中约含2mg的溶液 精密量取20ul注入液相色谱仪 记录色谱图 另取利多卡因对照品 同法测定 按外标法以峰面积计算 并将结果乘以1 156 盐酸利多卡因的分子量之比 即得 第三节氨基醚衍生物类药物分析 一 典型药物结构二 性质三 鉴别试验四 杂质检查五 含量测定 一 典型药物结构 盐酸苯海拉明盐酸美西律 阿替洛尔 二 性质 弱碱性本类药物烃胺中具有碱性氮原子 呈碱性 可以成盐 还可与生物碱沉淀剂反应 如盐酸美西律与碘试液反应生成复盐沉淀 硫酸反应苯海拉明分子结构中具有二苯甲基 能与硫酸发生显色反应 水解反应盐酸苯海拉明遇酸时水解生成水溶性很小的二苯甲醇 分散在水层 呈白色乳浊 如加热煮沸 二苯甲醇则呈油状物 放冷 凝固成白色蜡状固体 紫外光促进其分解 紫外及红外吸收的性质本类药物结构中具有共轭体系 在一定波长处具有紫外和红外吸收特征 一 硫酸反应 三 鉴别试验 盐酸苯海拉明分子中具有二苯甲氧基的结构 能与硫酸发生显色反应 在 中国药典 2010年版 中采用此法鉴别该药物 方法 取本品约5mg 加硫酸1滴 初显黄色 随即变成橙红色 滴加水 即成白色乳浊液 二 氯化物鉴别反应 盐酸苯海拉明与盐酸美西律分子中含有盐酸根离子 即氯离子 可应用氯化物的鉴别试验来鉴别药物 本类药物具有烃胺结构 呈碱性 加生物碱沉淀剂如碘试液后 可生成复盐沉淀 中国药典 2010年版 采用此法鉴别盐酸美西律 反应式表示如下 方法 取本品0 1g 加水2ml溶解后 加碘试液2滴 即生成棕红色沉淀 三 生物碱沉淀剂反应 四 紫外吸收光谱法 本类药物在紫外光区有特征吸收 可用紫外吸收光谱法进行鉴别 例如 中国药典 2010年版 中收载的典型药物的紫外吸收光谱法鉴别 1 盐酸苯海拉明取本品 加0 01mol L盐酸溶液溶解并稀释制成每1ml中约含0 5mg的溶液 照紫外 可见分光光度法测定 在253nm与258nm的波长处有最大吸收 2 盐酸美西律取本品 加0 01mol L盐酸制成每1ml中约含0 4mg的溶液 照紫外 可见分光光度法测定 在261nm的波长处有最大吸收 吸光度为0 44 0 48 3 阿替洛尔取本品 加无水乙醇制成每1ml中含10 g的溶液 照紫外 可见分光光度法测定 在227nm 276nm与283nm的波长处有最大吸收 五 红外吸收光谱法 本类药物结构中具有苯环 酰氨基 醚键等特征官能团 其红外光谱中将出现相应的特征吸收峰 在 中国药典 2010年版 采用红外吸收光谱法鉴别盐酸美西律和阿替洛尔等药物 规定供试品的红外光吸收图谱应与对照品的图谱一致 四 杂质检查 在氨基醚衍生物类药物杂质检查中 包括一般杂质检查和某些药物的特殊杂质检查 现将 中国药典 2010年版 中收载的典型药物的杂质检查项目简述如下 见表 一 杂质来源在盐酸苯海拉明的合成和贮存过程中会引入一些杂质 如二苯酮 二苯基甲醇 二甲氨基乙醇等 为控制药物的纯度 中国药典 2010年版 采用高效液相色谱法中的主成分自身对照法检查供试品中的有关物质 二 检查方法1 色谱条件与系统适用性试验用氰基键合硅胶为填充剂 以乙腈 水 三乙胺 50 50 0 5 用冰醋酸调节pH值至6 5 为流动相 检测波长为258nm 取二苯酮5mg 置100ml量瓶中 加乙腈5ml使溶解 用水稀释至刻度 摇匀 另取盐酸苯海拉明5mg 置10ml量瓶中 加上述二苯酮溶液1ml 用水稀释至刻度 摇匀 取20 l注入液相色谱仪 记录色谱图 理论塔板数按盐酸苯海拉明峰计算不低于5000 盐酸苯海拉明峰与二苯酮峰的分离度应大于2 0 2 溶液的制备取本品 加流动相溶解并稀释制成每1ml中约含2 5mg的溶液 作为供试品溶液 精密量取1ml 置100ml量瓶中 用流动相稀释至刻度 摇匀 作为对照溶液 3 检查方法取对照溶液20 l 注入液相色谱仪 调节检测灵敏度 使主成分色谱峰的峰高约为满量程的25 再精密量取供试品溶液与对照溶液各20 l 分别注入液相色谱仪记录色谱图至主成分峰保留时间的3倍 供试品溶液色谱图中如有杂质峰 单个杂质峰面积不得大于对照溶液主峰面积的0 5倍 0 5 各杂质峰面积的和不得大于对照溶液主峰面积 1 0 五 含量测定 一 非水溶液滴定法 在 中国药典 2010年版 收载的本类药物中 盐酸美西律采用此法进行含量测定 因为盐酸美西律为有机碱的盐酸盐 在冰醋酸 醋酐等酸性溶剂中呈强碱性 可定量的与高氯酸反应 生成高氯酸盐 方法 取盐酸美西律约0 16g 精密称定 加冰醋酸25ml与醋酐25ml 振摇使溶解 照电位滴定法 立即用高氯酸滴定液 0 1mol L 滴定 并将滴定的结果用空白试验校正 每1ml高氯酸滴定液 0 1mol L 相当于21 57mg的C11H17NO HCl 本类药物在紫外光区有较强的紫外吸收 可用来进行含量测定 中国药典 2010年版 采用紫外 可见分光光度法对盐酸美西律片 盐酸美西律注射液和盐酸美西律胶囊进行定量分析 二 紫外 可见分光光度法 示例盐酸美西律片的测定方法取本品20片 精密称定 研细 精密称取适量 约相当于盐酸美西律50mg 置100ml量瓶中 加0 01mol L盐酸溶液约50ml 充分振摇 使盐酸盐酸美西律溶解 用0 01mol L盐酸溶液稀释至刻度 摇匀 用0 45 m微孔滤膜滤过 取续滤液 照紫外 可见分光光度法 在261nm的波长处测定吸光度 另取盐酸美西律对照品 精密称定 加0 01mol L盐酸溶液溶解并定量稀释制成每1ml中约含0 5mg的溶液 同法测定 计算 即得 在 中国药典 2010年版 中盐酸苯海拉明 盐酸苯海拉明片 盐酸苯海拉明注射液 阿替洛尔 阿替洛尔片采用高效液相色谱法进行含量测定 该方法快速 准确 三 高效液相色谱法 示例阿替洛尔的含量测定1 色谱条件与系统适用性试验用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂 以磷酸盐缓冲液 取磷酸二氢钾6 8g 辛烷磺酸钠1 3g 加水溶解并稀释至1000ml 用磷酸调节pH值至3 0 甲醇 70 30 为流动相 检测波长为226nm 理论板数按阿替洛尔峰计算不低于2000 阿替洛尔峰与相邻杂质峰的分离度应符合要求 2 测定方法取阿替洛尔约25mg 精密称定 置100ml量瓶中 加流动相适量 超声使溶解并稀释至刻度 摇匀 精密量取2ml 置10ml量瓶中 用流动相稀释至刻度 摇匀 精密量取20 l 注入液相色谱仪 记录色谱图 另取阿替洛尔对照品 同法测定 按外标法以峰面积计算 即得 第四节磺胺类药物分析 一 典型药物结构二 性质三 鉴别试验四 杂质检查五 含量测定 一 典型药物结构 磺胺甲恶唑磺胺异恶唑磺胺嘧啶 磺胺醋酰钠磺胺多辛 二 性质 酸碱两性磺胺类药物的碱性来源于芳香第一胺 酸性来源于磺酰胺基 可溶于酸或碱 为酸碱两性化合物 芳香第一胺特性磺胺类药物一般含有游离的芳香第一胺 可发生重氮化 偶合反应 芳香第一胺具有还原性 使磺胺类药物易被氧化变色 芳香第一胺也可与芳醛缩合成有色的Schiff碱