医学免疫学实验-Djp4 免疫标记技术PPT课件

医学免疫学实验 Djp4免疫标记技术 1 医学免疫学实验 4 免疫标记技术 医学免疫学实验 Djp4免疫标记技术 2 免疫标记技术 概念 用荧光素 酶 同位素等标记抗体或抗原用以测定相应抗原或抗体的技术称为免疫标记技术 特点 敏感 特异 快速 定性 定量 定位 医学免疫学实验 Djp4免疫标记技术 3 免疫印迹技术 westernblot 斑点金技术 放射免疫技术 酶免疫技术 ELISA 免疫荧光技术 常用免疫标记技术 医学免疫学实验 Djp4免疫标记技术 4 直接免疫荧光荧光素直接标记抗体 检测抗原 常用的荧光素主要有 异硫氰酸荧光素 FITC 黄绿色藻红蛋白 PE 桔红色罗丹明 RB200 红色 免疫荧光技术 直接免疫荧光 间接免疫荧光 医学免疫学实验 Djp4免疫标记技术 5 间接免疫荧光 一抗与标本中抗原结合 再用荧光素标记的二抗进行检测 高效 更灵敏2 经济 通用性强 一抗 二抗 以兔源一抗为例兔源一抗木瓜 胃蛋白酶抗体Fc段 为抗原 人蛋白 1 2 3 兔 鼠 抗体1 2 3 羊 驴 二抗 免疫动物产生抗体 多抗 单抗 兔源 鼠源抗人 抗原 种特异性 一个羊源二抗可识别所有兔源一抗 即一个二抗分子可识别一种动物源的所有一抗 羊抗兔 鼠 驴抗兔 鼠 免疫羊产生抗体 恒定区 可变区 医学免疫学实验 Djp4免疫标记技术 6 人工制备抗体的类型 多克隆抗体抗原免疫动物后得到的动物血清 抗血清 含有针对不同抗原决定簇的多种抗体分子 Ag 6 抗原决定簇 医学免疫学实验 Djp4免疫标记技术 7 单克隆抗体 mAb K hler和Milstein1975年建立的技术 通过杂交瘤技术获得的针对单一抗原决定簇的高特异性抗体 7 医学免疫学实验 Djp4免疫标记技术 8 8 抗原加工提呈 抗原肽 医学免疫学实验 Djp4免疫标记技术 9 免疫荧光技术 抗C3二抗 补体结合位点 见前所述 医学免疫学实验 Djp4免疫标记技术 10 定位 对某蛋白质在细胞的定位 定量 细胞质中表达 荧光染料 医学免疫学实验 Djp4免疫标记技术 11 共定位 对某二个蛋白质在细胞内的定位 定量 医学免疫学实验 Djp4免疫标记技术 12 免疫荧光可 定位 定性 借助图像软件可进行模拟 定量 分析 医学免疫学实验 Djp4免疫标记技术 13 酶标记技术 免疫组织化学 定位 定性 模拟定量 免疫印迹 Westernblotting 定性 模拟定量 酶联免疫吸附试验 ELISA 定量 辣根过氧化物酶碱性磷酸酶 OPD 邻苯二胺 OPD 四甲基联苯胺 TMB H2O2 有色物质 医学免疫学实验 Djp4免疫标记技术 14 直接法directELISA 检测抗原 酶直接标记一抗 辣根过氧化物酶 HRP TMB OPD H2O2 有色物质 抗原 一抗 邻苯二胺 OPD 四甲基联苯胺 TMB 酶联免疫吸附试验Enzyme LinkedImmunosorbentAssays ELISA 医学免疫学实验 Djp4免疫标记技术 15 双抗体夹心法SandwichELISA 检测抗原 有两个一抗 固相载体 聚苯乙烯微量反应板 辣根过氧化物酶 HRP 医学免疫学实验 Djp4免疫标记技术 16 间接法indirectELISA 病人血清 固相载体 聚苯乙烯微量反应板 工业化生产 已知抗原 乙肝表面抗原 HBsAg 二抗 抗人IgM或IgGFc段抗体 如 检测乙肝表面抗体 HBsAb 加病人血清 辣根过氧化物酶 HRP 包被 洗涤 洗涤 可省 洗涤 不可省 有色物质 二抗过量时 加入病人血清后 要不要洗涤 邻苯二胺 OPD 四甲基联苯胺 TMB TMB OPD H2O2 预包被板 医学免疫学实验 Djp4免疫标记技术 17 间接ELISA法检测血清抗 HBsAb 1 加血清及对照 一抗 第1孔 空白对照 加洗涤液1滴第2孔 阴性对照 加阴性对照血清1滴第3孔 阳性对照 加阳性对照血清1滴第4孔 待检血清1 加待检血清1滴第5孔 待检血清2 加待检血清1滴 不洗 因为二抗过量 2 加酶结合物 酶结合二抗 加入酶结合物1滴 空白孔不加 混匀 37 C 20 30min3 洗板 弃去孔内液体 注满洗涤液 静置5sec甩干 重复3次 4 显色 每孔加显色液A B各1滴 混匀 封板 37 C 15min