梅毒的实验室检查.ppt

梅毒的实验室检查 梅毒的定义 梅毒是一种慢性传染性疾病 是由梅毒螺旋体 苍白螺旋体 引起 患病后病程漫长 早期侵犯生殖器和皮肤 晚期侵犯全身各器官 并生多种多样的症状和体征 病变几乎能累及全身各个脏器 病原体 为梅毒螺旋体 属于密螺旋体属 苍白密螺旋体苍白亚种 Treponemapallidumsubspeciespallidum 苍白亚种梅毒苍白螺旋体地方亚种地方性梅毒极细亚种雅司病密螺旋体属品他螺旋体品他病 梅毒螺旋体的生物学特性 1 直径0 10 0 15 m 有8 14个致密而规则的小螺旋 两端尖直 2 原生质圆柱体上紧绕着3 4根周浆鞭毛 故运动活跃 运动方式多样 3 G 但不易着色 Fantana镀银染色呈棕褐色 4 在无活细胞的人工培养基中难培养 生长慢 5 抵抗力极弱 对温度和干燥特别敏感 对青霉素 四环素 红霉素等抗生素敏感 在干燥条件下不易生存 肥皂水和一般消毒剂以及加温42 以上均极易将其杀灭 传播途径 性接触是主要的传染途径未经治疗的患者在感染后的1年内最具有传染性随着病期的延长 传染性越来越小到感染后2年 通过性接触一般无传染性母婴传播在妊娠7周时 梅毒螺旋体即可通过胎盘传染未经治疗者 虽已无性传播 病期 2年 但妊娠时仍可传染给胎儿病期越长 传染性越小 输血传染间接传播 日常用品 接吻 哺乳 医疗器械等途径 接触部位附有梅毒螺旋体 免疫性 特异性抗体感染2周后产生特异性IgM抗体 不能通过胎盘感染4周后出现特异性IgG抗体 可通过胎盘非特异性抗体刺激机体产生抗心磷脂抗体 反应素RPR和TRUST等方法可检出 5 7周或硬下疳后2 3周完全治愈的早期梅毒可再感染 梅毒的分期 梅毒的诊断 梅毒的诊断早期梅毒 一期 二期和早期隐性梅毒 和晚期梅毒 三期和晚期隐性梅毒 必须依靠病史 症状及实验检查进行综合分析梅毒的实验室检查结果对诊断有决定性意义 常用梅毒实验室检测方法 病原学检测法 1 暗视野显微镜检查 2 镀银染色检查血清学检测法 非梅毒螺旋体抗原血清试验 1 VDRL 性病研究实验室试验 需灭活 2 USR 不加热血清反应素试验 3 RPR 加速血浆反应素环状卡片试验 4 TRUST 甲苯胺红不加热血清试验 梅毒螺旋体抗原血清试验 1 FTA ABS 2 TPPA TPHA 3 TP ELISA 4 发光法 5 胶体金法 暗视野显微镜检查 标本类型 梅毒硬下疳 扁平湿疣 黏膜斑等皮损的渗出液 淋巴结穿刺液方法 暗视野显微镜下查找梅毒螺旋体 结果 典型的梅毒螺旋体呈白色发光 其螺旋较密而均匀 运动方式 伸缩其螺旋间距离而移动 主要方式 蛇行式 旋转式评价 简单 可靠 早期 硬下疳 梅毒血清学试验仍阴性 阴性不能排出患梅毒的可能性 暗视野显微镜下的梅毒螺旋体 镀银染色检查 基本原理 梅毒螺旋体具有亲银性 可被银溶液染色 从而可以在镜下观察到梅毒螺旋体结果 棕褐色的梅毒螺旋体 病原学检查的临床意义 病原学方法直接镜检到梅毒螺旋体 在临床可确诊梅毒 且具有快速 方便 易操作的特点 螺旋体检查是诊断早期现症梅毒的最佳方法 对于患者的早期诊断 及时治疗 预后和尽早切断传染源都有十分重要的意义 如未见到梅毒螺旋体 并不能排除患梅毒的可能性 非梅毒螺旋体抗原血清学试验 原理 抗心磷脂抗体 人体感染了梅毒螺旋体后 组织受到破坏 释放出来的一种类脂成分 与梅毒螺旋体结合形成完全抗原 刺激机体产生类脂质抗体 反应素 主要是IgM和IgG混合抗体 抗体产生时间感染3周 4周 硬下疳出现1周 2周一般在感染后5 7周 或硬下疳出现后2 3周 产生 抗体作用无保护作用 治疗监测 未经治疗的病人 其血清内的反应素可长期存在 经正规治疗后 反应素可以逐渐减少至转为阴性 梅毒自动旋转仪 四种非特异性试验方法比较 检测流程 定性 加样 吸取50 l血清 浆 放在卡片圈中 并均匀地涂布在整个圈内 加抗原 将抗原轻轻摇匀 用试剂盒提供的针头加1滴抗原 反应 将卡片置梅毒自动旋转仪8分钟立即在亮光下观察结果 检测流程 定量 稀释液准备 在圈内加入50 l生理盐水 根据需要确定稀释度 勿将盐水涂开 加样 吸取50 l血清 浆 与各圈中盐水作系列稀释 并涂布满整个圈内 重复定性试验后两步 凝集反应强度分级 3 4 圆圈内出现中到大的红色絮状物 液体清亮 2 圆圈内出现小到大的红色絮状物 液体较清亮 1 圆圈内出现小的红色絮状物 液体浑浊 圆圈内仅见红色集中于中央一点或均匀分散 RPR定量试验 中等至大的凝块为阳性 圈4和7 有明确但很小的凝块为弱阳性 圈2和3 颗粒均匀分布 圈1 5 8 10 或稍粗糙 圈6 为阴性 临床意义 早期梅毒 一期 二期 经足量规则抗梅毒治疗后3个月 VDRL试验抗体滴度下降2个稀释度 6个月下降4个稀释度 一期梅毒1年后转为阴性二期梅毒2年后转为阴性 晚期梅毒治疗后血清滴度下降缓慢 2年后约50 病人血清反应仍为阳性早期梅毒硬下疳出现1周 2周后 血清可呈阳性 经治疗后血清滴度可下降并阴性 故可作为疗效观察 判愈 复发或再感染的指征 假阳性问题 假阳性 非梅毒患者的血清反应呈阳性 技术性假阳性由于标本的保存不当 如细胞污染或溶血 试剂质量差或过期 或实验室操作错误所造成 生物学假阳性是由于患者有其他疾病或生理状态发生变化 使梅毒血清试验出现阳性 急性生物学假阳性反应的疾病 风疹水痘传染性单核细胞增多症传染性肝炎上呼吸道感染肺炎球菌性肺炎病毒性肺炎牛痘疹 慢性生物学假阳性反应的疾病 系统性红斑狼疮自身免疫性溶血性贫血盘状红斑狼疮结节性多动脉炎类风湿性关节炎桥本氏甲状腺炎 风湿性心脏病干燥综合征毒品瘾者慢性肾炎肝硬化老年麻风 是唯一产生慢性生物学假阳性的感染性疾病 妊娠的假阳性反应 这是一种生理情况下的生物学假阳性假阳性发生率较低有报告为0 4 滴度低 假阳性问题 梅毒假阳性反应的处理技术性假阳性反应一般是由于操作错误引起的假阳性反应 经过重复试验即可除外 对急性生物学假阳性反应 应做TPHA TPPA 等试验进行排除 前带现象 原理指二期梅毒患者非梅毒螺旋体抗原血清试验中 有时血清中存在高浓度的抗体时出现的弱阳性 不典型或阴性反应的结果 处理将血清稀释后再进行试验 血清固定 耐血清性 血清固定 指经抗梅毒治疗后 非梅毒螺旋体抗原血清试验在一定时期内不阴转 早期的耐血清性常与治疗量不足或不规则治疗 复发 再感染或有神经系统梅毒等因素有关 梅毒螺旋体抗体血清学试验 检测血中特异性抗梅毒螺旋体特异蛋白为抗原的抗体 IgG和IgM 特异性IgM型抗梅毒螺旋体抗体 感染2周后即可测出 实验方法 梅毒螺旋体颗粒凝集试验 TPPA 梅毒螺旋体血球凝集试验 TPHA 梅毒酶联免疫吸附试验 TP ELISA 梅毒免疫层析法 梅毒快速检测 RT 荧光螺旋体抗体吸收试验 FTA ABS 化学发光免疫分析法 CLIA 梅毒螺旋体蛋白印迹试验 WB TPPA TPHA原理 TPPA试验原理与TPHA试验基本相同TPPA试验用梅毒螺旋体致敏明胶颗粒TPHA试验中梅毒螺旋体致敏羊红细胞特点梅毒螺旋体 Nichols株 全抗原 操作步骤 1 试剂准备 试验前将试剂和待检标本恢复到室温 2 加稀释液 每份样本做4孔 加标本稀释液加至微量反应板孔内 第1孔100微升 第2 4孔各25微升 3 样本稀释 取血清25微升加至第1孔 混匀后取25微升至第2孔 混匀后取25微升至第3孔 混匀后取25微升至第4孔 混匀后弃去25微升 4 加对照液 第3孔加未致敏颗粒25微升 第4孔加致敏颗粒25微升 5 混合 将反应板置振荡器振荡30秒 6 反应 置有盖湿盒 孵育2h 或放4 冰箱过夜观察结果 结果判断 1 观察加未致敏颗粒的第3孔 不出现凝集为有效试验 2 观察凝集反应强度 分级如下 4 颗粒光滑覆盖整个孔底 有时边缘有折叠 3 颗粒光滑覆盖大部分孔底 2 颗粒光滑集聚覆盖孔底 周围有一颗粒环 1 颗粒光滑集聚覆盖孔底 周围有一明显颗粒环 颗粒沉集孔底 中央形成一小点 一 颗粒紧密沉积孔底中央 荧光螺旋体抗体吸收试验 FTA ABS 原理将有完整形态的梅毒螺旋体作为抗原 加上经吸收剂 用Reiter螺旋体制备而成 吸收过的梅毒患者血清形成抗原抗体复合物 再加入异硫氰酸荧光素 FTIC 标记的抗人免疫球蛋白 与抗梅毒螺旋体抗体结合 形成荧光的抗原抗体复合物 在荧光显微镜下 螺旋体显出苹果绿色的荧光 即为阳性反应 曾经认为FTA ABS试验是检测梅毒的 金标准 试验 TP ELISA 原理用重组梅毒螺旋体抗原包被固相板条 加上梅毒血清和单克隆抗体酶标记物 形成抗原抗体复合物与酶标记物结合 用酶联检测仪判定试验阳性反应 特点本法可用于大规模血清检测 梅毒螺旋体抗体测定 ELISA法 结果的解读 阴性对照OD 0 1 阳性对照OD 0 8时实验正常 否则实验无效 计算方法 cut off co 值 0 12 阴性对照平均OD值 s co值 病人OD值 cut off co 值 s co值大于或等于1判为阳性 s co值小于1判为阴性注s co值在0 5 2 0之间的灰区样本需复检确认后报告 免疫层析 临床应用 梅毒螺旋体试验的作用是作为证实试验它们可以帮助确定非梅毒螺旋体试验阳性反应是真阳性还是假阳性 一旦这些试验呈阳性 则患者终身阳性 方法特点 特异性强 敏感性高很少出现假阳性 据统计 在普通人群中 有1 的生物学假阳性发生 如系统性红斑狼疮患者血清可使FTA ABS试验呈假阳性反应 但大多数病例中螺旋体呈串株状荧光 传染性单核细胞增多症 可能由于嗜异性抗体所致 可使TPHA呈假阳性 麻风患者也可使特异试验呈阳性 临床意义 作为RPR初筛阳性标本的确证试验 不能作为疗效观察的指标 阳性不能区分既往感染和现症感染 应结合RPR结果进行诊断 假阳性问题 存在交叉反应的抗体处理方法 用Reiter株吸收血清中交叉反应的抗体 老年人抗体阳性的问题 1 真阳性2 假阳性 这些老年患者所患的基础疾病可能使机体释放诱导产生抗类脂抗体和 或抗T pallidum抗体的交叉抗原 梅毒检测流程图 A1 ELISA A1 A1 A2 PRP或TRUST A1 A2 感染 既往或现在 A1 A2 A3 TPPA A1 A2 A3 可能是梅毒感染需结合临床表现 A1 A2 A3 基本排除梅毒潜伏期 美国2009年指南 梅毒血清学试验结果的临床意义 RPR结果解释示意图 阳性阴性 TPPA结果解释示意图 阳性阴性 检测方法样品种类血清血浆末梢血脑脊液非梅毒螺