HPLC法检测设备表面枸橼酸托法替布含量.doc

HPLC法检测设备表面枸橼酸托法替布含量 【摘要】本文建立用高效液相法（HPLC）对设备表面的枸橼酸托法替布残留的检测方法。方法：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以0.1%醋酸铵溶液-乙腈7525为流动相；检测波长为286nm。结果：该方法线性范围为7g/ml到43g/ml，R2=0.9997；回收率为99.5%，取样回收率为91.0%；且该方法专属性强、灵敏度高、在24小时内溶液稳定性良好，够准确的检测出设备表面残留的枸橼酸托法替布含量。 【关键词】高效液相法 HPLC；枸橼酸托法替布；设备表面残留 【中图分类号】R971 【文献标识码】A 【文章编号】2095-6851（2017）07-02 1.前言 类风湿关节炎目前大多被认为是人体自身免疫性疾病，亦是一种慢性的综合征，表现为外周关节的非特异性炎症。此时患病关节及其周围组织呈现进行性破坏，并致使受损关节发生功能障碍，影响全球0.8%的成人人口1，2。人们正越来越致力于类风湿性关节炎药物的开发。 枸橼酸托法替布片是由美国辉瑞制药公司开发的一种新型的治疗类风湿性关节炎（RA）的药物，用于对氨甲喋呤治疗应答不充分或不耐受的中至重度活动性类风湿性关节炎成人患者。3作为Janus激酶（JAK）抑制剂，托法替布通过作用于JAKs来预防STATs磷酸化和激活。2012年美国食品药品监督管理局批准该药品上市。本文对设备表面的枸橼酸托法替布残留的检测方法进行了考察研究。 2.方法 2.1 仪器与试剂 仪器：Agilent1260液相色谱仪（安捷伦科技有限公司）；BT125D分析天平（赛多利斯科学仪器有限公司）；KQ500E超声清洗器（中国昆山市超声仪器有限公司）。试剂：枸橼酸托法替布对照品（自标，批号LFQ170315，含量100%，水分0.13%）；醋酸铵（温州市化学用料厂）；醋酸（上海凌峰化学试剂有限公司）；乙腈（J.TBaker）。 2.2 色谱条件 以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂（Shim-packVP-ODS4.6150mm5m）；以0.1%醋酸铵溶液（用醋酸调节pH值至5.0）-乙腈7525为流动相；检测波长为286nm；进样量为20l；理论板数按托法替布峰计算应不低于2000。 2.3 溶液制备 对照溶液的制备：取枸橼酸托法替布对照品，精密称定，加水溶解并稀释制成每1ml中约含枸橼酸托法替布28.68?g的溶液，摇匀，作为对照品溶液。 供试品溶液的制备（模拟生产设备进行取样）：取合适浓度的对照品溶液适量均匀滴加涂布在面积约为25cm2的不锈钢板上，待溶液干后，用干净的棉球（纯化水浸润）上下左右方向各擦拭至少3次，然后将棉签浸在10ml纯化水中超声10min后，取浸出液过滤，取续滤液即得。 枸橼酸托法替布片溶液的制备：取枸橼酸托法替布片适量，磨成细粉，精密称定置量瓶中，加纯化水适量，超声10min，使枸橼酸托法替布溶解，用纯化水稀释制成每1ml中含枸橼酸托法替布约28.68g的溶液。 3.结果 3.1 系统适用性。精密取对照品溶液（浓度约为28.68g/ml）20l注入液相色谱仪，连续进样6次，记录色谱图。6次对照品峰面积RSD为0.1%，该系统具有良好适用性。 3.2 专属性。取空白溶剂、空白辅料溶液、对照品溶液和枸橼酸托法替布片溶液进行测定。空白溶剂和空白辅料溶液在托法替布峰位置均无出峰，对照品溶液和枸橼酸托法替布片溶液主峰的保留时间一致。结果表明，空白溶剂和辅料空白对枸橼酸托法替布主峰没有干扰，该方法专属性强。 3.3 准确度。取处方量的空白辅料和对照品分别制成含枸橼酸托法替布14.34g/ml、28.68g/ml和43.02g/ml的溶液各3份，进行测定。其中50%的回收率为98.4%，100%的回收率为98.6%，150%的回收率为99.5%，9份样品RSD为0.65%。各浓度的回收率均大于98%，该方法回收率良好。 3.4 取样回收率。吸取对照品储备液（286.8g/ml）0.5ml滴加涂布在面积约为25cm2的不锈钢板上，待溶液干后，用干净的棉球（纯化水溶液浸润，挤去多余水分）按要求的方法进行擦拭，然后将棉签浸在5ml纯化水中超声10min后，取浸出液进行测定。其取样回收率为91.0%，由此表明该方法能将设备表面的大部分残留擦拭下来。 3.5 线性。取对照品适量，用纯化水配制成浓度分别为7.17g/ml、14.34g/ml、21.51g/ml、28.68g/ml、35.85g/ml和43.02g/ml的溶液，精密吸取20l注入液相色谱仪，记录色谱图。以浓度为横坐标，峰面积为纵坐标作图，得回归方程为y=43288x+2.9833，R=0.9997。在7g/ml到43g/ml的?舛确段?方法线性良好。 3.6 检测限。将对照品溶液进行系列稀释，将稀释的对照品溶液进行测定，并将信号与空白溶剂的信号进行比较，信噪比为3：1时的浓度即为检测限。信噪比为3.6：1时，检出限为0.288ng。 3.7 溶液稳定性。分别在0h，4h，8h，12h，18h，24h取对照品溶液和枸橼酸托法替布片溶液（28.68g/ml）20l进样，记录色谱图，并以其峰面积计算RSD%。对照品溶液和枸橼酸托法替布片溶液的RSD均为0.1%，在24小时内该两种溶液均有良好的稳定性。 4.结论 经过上述实验验证，其结果证明该方法专属性强、准确度高、灵敏度高、线性及溶液稳定性均良好，能够准确的检测出设备表面残留的枸橼酸托法替布含量，能够对生产中设备清洁方法提供真实可靠的评价及数据支持。 参考文献 1马培奇，类风湿性关节炎治疗药物发展现状及