布病试管凝集试验(人畜检测法相同).doc

布病试管凝集试验（人畜检测方法相同）一、 实验前准备 1、 试管的准备 把试管浸泡于带有洗涤剂的温水中30分钟，浸泡后用试管刷将其刷干净。先用自来水冲洗10遍，再用去离子水冲洗1遍试管冲洗干净后倒置于篮子中，等水沥干后置干燥箱中，160干燥3个小时（整个干燥过程需要56个小时）。实验前要配置0.5%的石炭酸生理盐水实验前要配置的石炭酸生理盐水 配置方法：称取0.5克石炭酸 加入100ml的生理盐水中121高压30分钟。 2、试剂的准备标准抗原：按照说明书使用。使用时充分摇匀，用稀释液作 1:20(工作浓度)稀释。 标准阳性血清冻干品，使用前用蒸馏水溶解至规定容积。标准阴性血清冻干品，使用前用蒸馏水溶解至规定容积。 3、被检血清按常规方法采血分离血清 血清必须新鲜，无明显蛋白絮凝物、无溶血和无腐败气味。 运送和保存血清样品 防止血清冻结和受热，以免影响凝集价。若3d内不能送到实验室，可用冷藏方法运送血清。 二、试验操作过程 1、确定被检血清的稀释度 牛 、马 、 骆驼稀释用1:50、1:100、1:200、1:400（4个稀释度 ）；猪、山羊、绵羊和狗用1:25、1:50、1:100、1:200（4个稀释度)。大规模检疫时也可用2个稀释度，牛、马、骆驼用1:50、1:100；猪、山羊、绵羊和狗用1:25、1:50，为测定强阳性血清效价，稀释度可以增加。 2、稀释被检血清：猪、山羊、绵羊和狗血清的稀释 每份被检血清用4支试管，标记检验编号后第I管加 1.15 mL稀释液，第2-4管各加人0.5 m L稀释液。取被检血清0.1 mL，加人第1管，充分混匀后吸弃0.25 mL。 从第1管中吸取0.5mL加人到第2管，混合均匀后，再从第2管吸取0.5mL至第3管，如此倍比稀释至第4管，从第4管弃去0.5mL，稀释完毕。 从第1 至第4 管的血清稀释度分别为 1：12.5,1：25,1：50,1：100。3、加抗原 将0. 5 m L 抗原抗原(1:20)加入已稀释好的各血清管中，并振摇均匀，猪、羊或狗的血清稀释则依次变为 1 : 25,1 : 50,1 : 100,1：200；牛、马和骆驼的血清稀释度则依次变为 1：50,1：100,1：200,1:400。各反应管反应总量为1 mL。 4、设立对照：每次试验都应设立下列对照。 阴性血清对照 阴性血清的稀释和加抗原的方法与被检血清同 阳性血清对照 阳性血清的最高稀释度应超过其效价滴度，加抗原的方法与被检血清同。 抗原对照 在0. 5mL稀释液中，加0.5 m L抗原 （1：20) 5、比浊管的配置每次试验均须配制比浊管，作为判定凝集反应程度的依据。先将抗原(1:20) 用等量稀释液作一倍稀释，然后按表1配制比浊管 配制比浊管。表 1 比 浊 管 的 配 制管号1:40稀释抗原ml稀释液ml清亮度%记录标记10.001.00100+20.250.7575+30.500.5050+40.750.2525+51.000.000-6、感作所有试验管充分震荡后，置37温箱20小时 7、结果判断确定每份被检血清效价：比照比浊管判读，出现“+”以上凝集现象的最高血清稀释度为血清凝集价。 结果判定 当阴性血清对照和抗原对照不出现凝集(一)，阳性血清的凝集价达到其标准效价士1个滴度，则证明试验成立，可以判定。否则，试验应重做。牛、马和骆驼于1:10。血清稀释度，猪、山羊、绵羊和狗于1:50血清稀释度出现“+”以上的凝集现象时，被检血清判定为阳性反应。三、试验后的处理 1、试管的处理把所用试管必须高压处理（121高压30分钟），然后用自来水彻底洗涮干，再用去离子水冲洗，后放置框中沥干，干燥（160干燥3个小时），保存备用。 2、配置好而未用完的抗原及其盛装其瓶子的处理瓶子连其抗