研究妥布霉素滴眼液的质量标准.doc

长春工业大学人文信息学院学士学位论文 I 摘 要 目的 研究妥布霉素滴眼液的质量标准 方法 建立高效液相色谱 蒸发光散射检测器检测法 HPLC ELSD 测定妥布霉 素滴眼液的有关物质 选用耐酸性的 C18 4 6 mm 250mm 5 m 色谱柱 乙腈 甲 醇 水为流动相 柱温 25 流速为 1 0 mL min 1 检测波长为 365nm 检测器为 ELSD 建立微生物检定法对妥布霉素滴眼液进行含量测定 结果 妥布霉素在 55 6 1 396 7 g mL 1内 其峰面积的对数与浓度的对数呈 良好的线性关系 r 0 9997 该方法适合妥布霉素滴眼液有关物质的检定 平均 回收率为 99 41 RSD 为 0 87 重复性良好 含量测定结果均在 90 0 110 0 之间 该方法准确可靠 适用于妥布霉素滴眼液含量测定 关键词 妥布霉素滴眼液 含量测定 高效液相色谱 蒸发光散射检测器检测 法 长春工业大学人文信息学院学士学位论文 II ABSTRACT Objective To research the quality standards of tobramycin eye drops Methods To establish an HPLC ELSD method to determine the related substances of tobramycin eye drops In this method the column was C18 4 6 mm 250 mm 5 m acetonitrile methanol water as mobile phase The column temperature was 25 at flow rate of 1 0 mL min 1 The detection wavelength was 365nm The detector was ELSD Establish microbial identification method to determine the content determination for tobramycin eye drops Results The linear range was 55 6 1396 7 g mL 1 The logarithm of peak area and the logarithm of concentration show a good linear relationship r 0 9997 The method is suitable for the related substance of tobramycin eye drops The average recovery was 99 41 RSD was 0 87 and show a good repeatability The method is simple accurate and reliable It is suitable for the routine quality control of tobramycin eye drops preparations Key words tobramycin eye drops content determination HPLC ELSD 长春工业大学人文信息学院学士学位论文 I 目 录 第 1 章文献综述 1 1 1 妥布霉素的发现以及应用 1 1 2 妥布霉素含量测定方法以及优缺点介绍 2 1 2 1 测量方法介绍 2 1 2 2 试验方法优缺点 2 1 2 3 高效液相色谱法介绍 2 1 2 4 蒸发光散射检测器介绍 3 1 3 含量测定 4 第 2 章仪器与实验药品 6 2 1 仪器与原料 6 第 3 章实验方法 7 3 1 有关物质测定 7 3 1 1 方法与条件 7 3 1 2 色谱条件的选择 7 3 1 3 溶剂 辅料的干扰试验 8 3 1 4 强力破坏试验 9 3 1 5 检测限 9 3 1 6 系统适应性试验 9 3 1 7 线性关系试验 10 3 1 8 有关物质测定结果 11 3 2 含量测定 11 3 2 1 测定方法 11 3 2 2 回收率试验 11 3 2 3 精密度试验 12 3 2 4 供试品溶液稳定性 13 3 2 5 样品含量测定结果 13 第 4 章试验结果 14 参考文献 15 致 谢 16 长春工业大学人文信息学院学士学位论文 1 第 1 章文献综述 妥布霉素属氨基糖苷类抗生素 抗菌谱与庆大霉素近似 对大肠埃希菌 产 气杆菌 克雷白杆菌 奇异变形杆菌 某些吲哚阳性变形杆菌 铜绿假单胞菌 某些奈瑟菌 某些无色素沙雷杆菌和志贺菌等革兰阴性菌有抗菌作用 本品对铜 绿假单胞菌的抗菌作用较庆大霉素强 3 5 倍 对庆大霉素中度敏感的铜绿假单胞 菌对本品高度敏感 革兰阳性菌中 金黄色葡萄球菌 包括产内酰胺酶株 对本 品敏感 链球菌 包括化脓性链球菌 肺炎球菌 粪链球菌等 均对本品耐药 厌氧菌 拟杆菌属 结核杆菌 立克次体 病毒和真菌亦对本品耐药 本品的作 用机制是与细菌核糖体 30S 亚单位结合 抑制细菌蛋白质的合成 1 1 妥布霉素的发现以及应用 妥布霉素 tobramycin 是 1967 年由链霉菌得到的抗生素 亦可从 kanamycin B 脱氧制备 临床制剂为其硫酸盐 妥布霉素适用于绿脓杆菌 变形杆菌 吲哚阳性和阴性 大肠杆菌 克雷伯 菌属 肠杆菌属 沙雷菌属及葡萄球菌 包括耐青霉素 G 与耐甲氧西林菌株 所 致的新生儿脓毒症 败血症 中枢神经系统感染 包括脑膜炎 泌尿生殖系统感 染 肺部感染 胆道感染 腹腔感染 及腹膜炎 骨骼感染 皮肤 软组织感染 包括烧伤 急性与慢性中耳炎 鼻窦炎等 该品用于绿脓杆菌脑膜炎或脑室炎 时可同时鞘内注射给药 用于支气管及肺部感染时可同时气溶吸入该品作为辅助 治疗 妥布霉素对多数 D 组链球菌感染无效 用于结膜炎 角膜炎等眼部细菌感 染 特别是对庆大霉素耐药的革兰阴性秆菌感染 如严重的绿脓杆菌感染有效 妥布霉素由肌注后吸收迅速而完全 局部冲洗或局部应用后亦可经身体表面 吸收一定量 吸收后主要分布于细胞外液 其中 5 15 再分布到组织中 在肾皮 质细胞中积蓄 该品可穿过胎盘 分布容积为 0 26L kg 尿液中药物浓度高 肌注 1mg kg 后尿中浓度可达 75 100 g ml 滑膜液内可达有效浓度 在支气管 分泌液 脑脊液 胆汁 粪便 乳汁 房水中浓度低 肌注 1mg kg 后血药浓度可 达 4 g ml 静滴上述剂量 1 小时 其血药浓度与肌注相似 T1 2为 1 9 2 2 长春工业大学人文信息学院学士学位论文 2 小时 蛋白结合率很低 该品在体内不代谢 经肾小球滤过排出 24 小时内排出 给药量的 85 93 1 2 妥布霉素含量测定方法以及优缺点介绍 1 2 1 测量方法介绍 妥布霉素 tobramycin 是从黑暗链霉菌 Streptomyces tenebrarius 发酵液中 提取得到的具有广谱抗菌活性的氨基糖苷类抗生素 其含量测定方法主要有微生 物效价测定法 1 旋光法 2 UV 衍生化法 2 高效液相色谱 间接光度检测法 HPLC IPD 3 HPLC 衍生化法 4 HPLC 电化学检测器法 5 及 TLC 3 1 2 2 试验方法优缺点 常用的微生物效价测定法测定误差较大 衍生化法影响因素较多 而电化学 检测法使用不易 较难普及 近年来国内外有文献报道采用蒸发光散射检测技术 ELSD 分析氨基糖苷类抗生素 6 中国药典 2005 年版也已收载该检测技术和部分 相关品种 以 HPLC ELSD 测定妥布霉素及其制剂的方法也陆续见诸报道 7 HPLC ELSD 早在 20 世纪九十年代就用于天然产物分析 随着技术的发展 其应用范围已逐渐扩大 近年来屡有用 HPLC ELSD 分析抗生素类药物的报道 HPLC ELSD 分析抗生素类药物的报道多见于氨基糖苷类抗生素 氨基糖苷类抗生 素是临床上常用的抗生素 可通过微生物发酵或半合成制得 是一类单组分或多 组分糖基取代的氨基环醇类化合物 主要有 链霉素 卡那霉素 庆大霉素 阿 米卡星 小诺霉素等 对这一类抗生素的含量测定多采用微生物法 但微生物法 测定的是各活性组分的总量 无法反映各组分组成 为克服这个缺点 国内外的 药典采用 HPLC 法进行测定 但这类抗生素无紫外吸收 只能采取衍生化法 多为 柱前衍生 结果易受衍生化反应条件的影响而不够准确 ELSD 法很好地解决了 这个问题 氨基糖苷类抗生素含多个氨基 可产生含不同当量无机酸盐产品 对 于这些副产物成分 ELSD 也能很好的加以测定 长春工业大学人文信息学院学士学位论文 3 1 2 3 高效液相色谱法介绍 高效液相色谱法 High Performance Liquid Chromatography HPLC 又称 高压液相色谱 高速液相色谱 高分离度液相色谱 近代柱色谱 等 高效液相色谱是色谱法的一个重要分支 以液体为流动相 它在经典色谱理论的 基础上 采用了高压泵 化学键合固定相高效分离柱 高灵敏专用检测器等新实 验技术建立的一种液相色谱分析法 采用高压输液系统 将具有不同极性的单一溶剂或不同比例的混合溶剂 缓 冲液等流动相泵入装有固定相的色谱柱 在柱内各成分被分离后 进入检测器进 行检测 从而实现对试样的分析 该方法已成为化学 医学 工业 农学 商检 和法检等学科领域中重要的分离分析技术 色谱法的分离原理是溶于流动相 mobile phase 中的各组分经过固定相时 由 于与固定相 stationary phase 发生作用 吸附 分配 离子吸引 排阻 亲和 的大小 强弱不同 在固定相中滞留时间不同 从而先后从固定相中流出 HPLC 系 统一般由输液泵 进样器 色谱柱 检测器 数据记录及处理装置等组成 其中 输液泵 色谱柱 检测器是关键部件 有的仪器还有梯度洗脱装置 在线脱气机 自动进样器 预柱或保护柱 柱温控制器等现代 HPLC 仪还有微机控制系统进行自 动化仪器控制和数据处理 制备型 HPLC 仪还备有自动馏分收集装置 1 2 4 蒸发光散射检测器介绍 蒸发光散射检测器 Evaporative Light Scattering Detector ELSD 作为一种新 型通用型检测器 从 20 世纪 80 年代转化为商品起 随着技术的不断改进和完善 已经越来越多的应用于医药 化工 食品等领域 ELSD 的基本原理 色谱柱流出液进入雾化器形成微小液滴 与通入的气体 V 通常是氮气 有时也用空气 混合均匀 经过加热的漂移管 蒸发除去流动相 样品组分形成气溶胶 用强光或激光照射气溶胶 产生光散射 用光电二极管检 测散射光 散射光的强度 I 与组分的质量 m 有下述关系 I km 或 lgI blgm lgk 其中 k 和 b 为与蒸发室 漂移管 温度 雾化气体压力及流动相性质等实验条件有关 的常数 ELSD 消除了溶剂的干扰和因温度变化引起的基线漂移 即使用梯度洗 脱也不会产生基线漂移 ELSD 的响应不依赖样品的光学性质 只要样品的挥发 长春工业大学人文信息学院学士学位论文 4 性低于流动相即可被检测 尤其适用于流动相有紫外吸收干扰或梯度洗脱时基线 漂移影响的情况 克服了传统检测方法的不足 已经越来越多的应用于高效液相 色谱 超临界色谱和逆流色谱中 另一区别于传统检测方法的特点是 在相同的 色谱条件下 物理性质相似的物质在 ELSD 中形成的颗粒大小 形状相近 对激 光散射能力相同 而显示相同的响应 这就使利用已知的标准物质来测定结构相 似 含量未知的物质成为可能 ELSD 还可与梯度洗脱相容 应用范围较一些传 统的检测方法要广 而且 ELSD 与 HPLC MS 的色谱要求一致 二者可通用 ELSD 以其通用性 响应因子只与物性有关及与梯度洗脱相容等优点 广泛应用 于药物的分析测定中 尤其是利用结构相似 含量已知的物质作对照标定新的药 品基准 是药物分析的一大发展 但目前 ELSD 检测器的灵敏度还不是很理想 如果采用微径色谱柱 将会大大提高其灵敏度 ELSD 的适用范围 ELSD 的响应与被测物的质量成正比 不依赖于被测物的 光学特性及官能团 理论上可用于挥发性低于流动相的任何组分的检测 概括地 说 其适用对象主要有 1 物质本身不含生色团或吸光系数不入或只有紫外末端吸收 使用 UV 检测 时无法检测或灵敏度很差 在中药化学成分中常见的有糖类 皂苷类 萜类 内 酯类 甾类 部分生物碱类等 2 选择短波长为检测波长 流动相选择受限制 如甲醇等在较短波长有紫外 吸收干扰 影响分析测定 3 物质组分非常复杂 其中含有较多紫外吸收很强但是含量很低的物质 对 其他弱紫外吸收的物质定量干扰较大 影响分析测定 4 在相同的色谱条件下 物理性质相似的物质在 ELSD 中形成的颗粒大小 形状相近 对激光散射能力相同 而显示相同的响应 这就使利用已知的标准物 质来测定结构相似 含量未知的物质成为可能 鉴于 ELSD 的上述特点 HPLC ELSD 在药物分析中的应用日益增多 1 3 含量测定 原料药可用已知纯度的对照品或符合要求的原料药进行测定 或用本法所得 结果与已建立准确度的另一方法测定的结果进行比较 制剂可用含已知量被测物 的各组分混合物进行测定 如不能得到制剂的全部组分 可向制剂中加入已知量 长春工业大学人文信息学院学士学位论文 5 的被测物进行测定 必要时 与另一个已建立准确度的方法比较结果 一般制剂 的含量测定的回收率是向辅料中加入处方量 80 100 120 已知含量的主药 按含量测定的方法测定 妥布霉素对听神经和肾脏有一定毒性 可引起肾损害 对肾脏的毒性较庆大 霉素为少见 仅约 1 的病人有肾功能武失常的征候 如管型尿 少尿 蛋白尿或 血清肌酐浓度升高等 肾功能不全者可引起胃肠道反应 恶心 呕吐 食欲不振 腹胀 腹泻 可有肝损害 转氨酶升高 血小板减低 白细胞减低 粒细胞减低 皮疹 静脉炎等 血象改变 剂量大时可有神经毒性 二重感染 中毒性精神病 均可发生 我国药品含量测定是依据 中国药典 进行 参考 药物分析 可见其试验 的严整性 药品内含量检测直接关系到给药剂量 必须严格要求药品含量以确保 给药剂量在可接受范围之内 2001 年在国家食品药品监督管理局下发的关于国家药品标准修订批件 ZFB0171 号文中 将黄芪注射液的含量测定由薄层扫描法改为 HPLC ELSD 法 在我国首次将 HPLC ELSD 法列入国家法定标准 很多含有弱紫外吸收成分的药 物并没有有效 简便 合理的分析方法作为质控手段 显而易见 蒸发光散射检 测器对于建立此类药品质量控制方法建立中将起到至关重要的作用 HPLC ELSD 法在药物分析中的应用也日益增多 HPLC ELSD 法测量妥布霉素滴眼液含量于 2005 年收录于 中国药典 现今 大部分测量方法都定为 HPLC ELSD 方法 长春工业大学人文信息学院学士学位论文 6 第 2 章仪器与实验药品 2 1 仪器与原料 Agilent 1100 高效液相色谱仪 Dikma SEDEX 75 型 ELSD 检测器美国安捷伦 科技有限公司 水为重蒸水 原料药 妥布霉素 由丽珠集团新北江制药股份有限公司生产 批号为 C0601002 样品 妥布霉素滴眼液 长春迪瑞制药有限公司生产 规格为 5ml 15mg 批号为 061001 061002 061003 待测样品 妥布霉素滴眼液 成都恒瑞制药有限公司生产 批号 060701 标准品 妥布霉素标准品 购自中国药品生物制品检定所 批号为 0340 200002 对照品 妥布霉素化学对照品 购自中国药品生物制品检定所 批号为 130527 200402 长春工业大学人文信息学院学士学位论文 7 第 3 章实验方法 3 1 有关物质测定 根据美国药典 USP28 NF23 妥布霉素滴眼液及原料药含量测定方法 8 并参照 有关文献 9 建立了以 C18柱 乙腈 甲醇 水为流动相 检测波长为 365nm ELSD 为检测器 2 4 二硝基氟苯柱前衍生化的 HPLC ELSD 测定方法 3 1 1 方法与条件 衍生试剂 2 4 二硝基氟苯溶液 取 2 4 二硝基氟苯适量 用乙醇制成 10mg ml 的溶液 冰箱中可贮存 5 天 三羟甲基氨基甲烷溶液 量取 40ml 的三羟甲基氨基甲烷贮存液 15mg ml 的 水溶液 冰箱中可放置 1 个月 置 200ml 的量瓶中 用二甲基亚砜稀释至刻度 摇匀 4 小时之内使用 衍生方法 精密量取本品 2ml 于 50ml 量瓶中 用水稀释至刻度 摇匀 精密 量取 5ml 置于 50ml 量瓶中 加入 10ml 2 4 二硝基氟苯溶液和 10ml 三羟甲基氨基 甲烷溶液 摇匀 放入 60 2 的恒温水浴锅中加热 50 5 分钟 取出 放置 10 分钟 加乙腈至量瓶刻度线下 2cm 放至室温 用乙腈定容 0 22 m 的滤膜过滤 作为供试品溶液 测定方法 取供试品溶液 1 0ml 置 100ml 量瓶中 加流动相稀释至刻度 作 为对照溶液 取对照溶液 20 l 注入液相色谱仪 调节仪器检测灵敏度使主成分峰 高为满量程的 10 20 再精密量取供试品溶液 20 l 注入液相色谱仪 记录 色谱图至主成分保留时间的 2 3 倍 供试品溶液色谱图中如有杂质峰 各杂质峰 面积和 除空白溶液和辅料峰外 不得大于对照溶液主峰面积的 10 倍 10 长春工业大学人文信息学院学士学位论文 8 3 1 2 色谱条件的选择 色谱柱 C18 250mm 4 6mm 5 m 流 速 1 0ml min 检测波长 365nm 柱温 25 对照品溶液 精密称取妥布霉素化学对照品 30mg 置 50ml 量瓶中 加 20ml 水和 0 5mol L 的硫酸溶液 1ml 振摇使溶解 用水稀释到刻度 摇匀 取 10 0ml 置 50ml 量瓶中 用水稀释至刻度 摇匀 供试品溶液 精密量取样品溶液 2ml 置于 50ml 量瓶中 用水稀释至刻度 摇匀 辅料溶液 精密量取按处方比例配制的空白辅料溶液 2ml 置于 50ml 量瓶中 用水稀释至刻度 摇匀 衍生方法 精密量取对照品溶液 供试品溶液 辅料溶液及水各 5ml 分别 置于 50ml 量瓶中 在每个容量瓶中加入 10ml 2 4 二硝基氟苯溶液和 10ml 三羟 甲基氨基甲烷溶液 摇匀 将容量瓶同时放入 60 2 的恒温水浴锅中加热 50 5 分钟 同时取出 放置 10 分钟 加乙腈至容量瓶刻度线下 2cm 放至室温定容 摇匀 即得衍生对照品溶液 衍生供试品溶液 衍生辅料溶液及空白溶液 根据有关文献 9 以甲醇 水 68 32 为流动相 在上述色谱条件下 取衍 生化的对照品溶液 供试品溶液 辅料溶液及空白溶液各 20 L 注入液相色谱仪 记录色谱图 由图可见 妥布霉素主峰与辅料峰 溶剂峰分离情况良好 但此条 件未分离出杂质峰且主峰面积太小 调整流动相为乙腈 甲醇 水 4 6 3 取 衍生化的对照品溶液 供试品溶液 辅料溶液及空白溶液各 20 L 注入液相色谱 仪 记录色谱图 由图可以看出 改进后的流动相能够分离出杂质峰 且与主峰 很好地分离 故选定乙腈 甲醇 水 4 6 3 为流动相 3 1 3 溶剂 辅料的干扰试验 由 3 1 2 流动相的选择项下的 HPLC 图谱说明 溶剂 辅料峰在所得谱图的 前 7 分钟出峰 并且能与样品杂质峰及主峰达到良好分离 即溶剂和辅料对测定 长春工业大学人文信息学院学士学位论文 9 无干扰 3 1 4 强力破坏试验 酸破坏 精密量取待测样品 2ml 于 50ml 量瓶中 加入 1mol L 的盐酸溶液 5ml 水浴加热 2 小时 冷至室温 用 1mol L 的氢氧化钠溶液调至中性 用水定 容至刻度 摇匀 滤过 作为酸破坏供试品溶液 碱破坏 精密量取待测样品2ml 于50ml 量瓶中 加入1mol L 的氢氧化钠溶液 5ml 水浴加热2小时 冷至室温 用1mol L 的盐酸溶液调至中性 用水定容 摇 匀 滤过 作为碱破坏供试品溶液 高温破坏 精密量取待测样品2ml 于50ml 量瓶中 90 水浴加热6小时 冷至 室温 作为高温破坏供试品溶液 强光破坏 精密量取待测样品2ml 于50ml 量瓶中 置于紫外灯下照射3小时 作为强光破坏供试品溶液 氧化破坏 精密量取待测样品2ml 于50ml 量瓶中 加双氧水液3滴 摇匀 放 置2小时 作为氧化破坏供试品溶液 分别吸取供试品溶液 各5ml 分别置于50ml 量瓶中 照 有关物质测定方法进行衍生后 各取20 l 注入液相色谱仪 记录色谱图 取空白 辅料同法操作 结果表明 空白辅料吸收较小 在所得谱图的前 7 分钟 此色谱条件下能够 检出各破坏条件下产生的降解产物 且降解产物峰与妥布霉素主峰能达到基线分 离 各破坏条件下 辅料不干扰样品有关物质的检测 该方法适合妥布霉素滴眼 液有关物质的测定 3 1 5 检测限 取 3 1 2 流动相的选择项下妥布霉素化学对照品衍生溶液 通过逐级稀释降 低溶液浓度 精密量取不同浓度溶液各 20 L 分别注入液相色谱仪 当信噪比 为 3 1 时的进样量为 1ng 故本方法的检测限为 1ng 长春工业大学人文信息学院学士学位论文 10 3 1 6 系统适应性试验 取妥布霉素原料药和对照品各适量 用流动相溶解并稀释制成每 1 mL 中含妥 布霉素 1 mg 和对照品约 0 05 mg 混合溶液 取 10 L 进样测试 记录色谱图 结 果妥布霉素主组分和对照品组分两峰之间的分离度达 6 54 表明本法建立的色谱 条件可以达到系统适用性试验要求 见图 3 1 图 3 1 系统适用性试验的 HPLC ELSD 图 1 0ml min 1 GAIN 6 1 对照品 2 妥布霉素 3 1 7 线性关系试验 取妥布霉素标准品 分别精密称取适量 加流动相溶解并稀释制成 55 546 111 091 277 728 555 456 777 568 1012 000 1230 592 1396 736 g mL 1浓度的系列溶液 分别进样 10 L 记录色谱图 以妥布霉素主组分峰面积 的常用对数为纵坐标 进样浓度 g mL 1的常用对数为横坐标 以最小二乘法进 行线性回归 得回归方程为 1 29569y 7 61388x 0 9997 长春工业大学人文信息学院学士学位论文 11 结果表明 妥布霉素浓度在 55 55 1396 74 ug mL 1内线性良好 3 1 8 有关物质测定结果 取三批样品及待测样品进行有关物质检查 结果见表 3 1 表 3 1 三批样品及待测样品有关物质检测结果 批 号 061001061002061003待测样品 有关物质 7 487 607 157 16 结果表明 三批样品及待测样品有关物质含量均小于 10 0 三批样品的有 关物质含量与待测产品的有关物质含量数值相近 无显著差异 3 2 含量测定 3 2 1 测定方法 精密量取本品适量 加灭菌水制成每 1ml 约含 1000 单位的溶液 作为供试 品溶液 再精密称取妥布霉素标准品适量 加灭菌水制成每 1ml 约含 1000 单位的 溶液 作为标准品溶液 取两种溶液 照抗生素微生物检定法 中国药典 2005 年 版二部附录 XI A 测定 1000 单位妥布霉素相当于 1mg 的 C18H37N5O9 3 2 2 回收率试验 精密称取妥布霉素原料适量 按处方比例加辅料 制备含妥布霉素为标示量 的 80 100 120 的溶液各 3 份 照妥布霉素滴眼液含量测定方法测定 根 据投入量和检出量计算回收率 结果见表 3 2 长春工业大学人文信息学院学士学位论文 12 表 3 2 妥布霉素的回收率测定结果 浓度投入量 mg 检出量 mg 回收率 平均回收率 RSD 120 00119 8399 86 120 01118 9299 0980 120 02121 65101 36 150 02148 9299 27 150 02147 9098 59100 150 03148 1498 74 180 04178 4399 11 180 04177 7898 74120 180 02179 8599 91 99 410 87 结果表明 该方法回收率均在 98 102 范围内 符合规定 适用于本品的含测 定 3 2 3 精密度试验 精密量取样品 8 5ml 置于 25ml 容量瓶中 加灭菌水稀释至刻度 摇匀 作 为供试品溶液 同法制备 6 份供试品溶液 按含量测定方法测定 结果见表 3 3 表 3 3 精密度试验结果 序 号123456 RSD 长春工业大学人文信息学院学士学位论文 13 含量 99 599 399 999 799 499 30 24 结果表明 含量测定方法精密度良好 即本试验重复性良好 3 2 4 供试品溶液稳定性 精密量取样品 17ml 置于 50ml 容量瓶中 加灭菌水至刻度 摇匀 分取约 30ml 移入另一容量瓶中放置冰箱 2 10 保存 将上述溶液分别于配制当天以 及置冰箱 2 10 24 小时 48 小时后取样 照含量测定方法测定 结果见表 3 4 表 3 4 溶液稳定性试验结果 检测时间配制当天 配制后置冰箱 24 小时 配制后置冰箱 48 小时 RSD 含量 99 6 98 598 80 57 结果表明 供试品溶液放置冰箱 2 10 可稳定保存 2 天 3 2 5 样品含量测定结果 取三批样品及待测样品品进行含量测定 结果见表 3 4 表 3 4 三批样品及待测样品的含量测定结果 批号061001061002061003待测样品 含量 98 499 699 498 2 结果表明 三批样品及待测样品的含量均在 90 0 110 0 之间 长春工业大学人文信息学院学士学位论文 14 第 4 章试验结果 有关物质试验中妥布霉素在 55 6 1 396 7 g mL 1内 其峰面积的对数与浓度 的对数呈良好的线性关系 r 0 9997 当信噪比为 3 1 时的进样量为 1ng 故本 方法的检测限为 1ng 各破坏条件下 辅料不干扰样品有关物质的检测 本法建 立的色谱条件可以达到系统适用性试验要求 最后结果表明三批样品及待测样品 有关物质含量均小于 10 0 三批样品的有关物质含量与待测产品的有关物质含 量数值相近 无显著差异 即 HPLC ELSD 方法适合妥布霉素滴眼液有关物质的 检定 含量测定试验中平均回收率为 99 41 RSD 为 0 87 回收率均在 98 102 范围内 范符合规定 适用于本品的含测定 精密度试验表明本试验重复性良好 最终试验结果表明三批样品及待测样品的含量均在 90 0 110 0 之间 本试验适用 于妥布霉素滴眼液的含量测定 长春工业大学人文信息学院学士学位论文 15 参考文献 1 Ch P 2005 Vol II 中国药典 2005 年版 二部 S 2005 270 2 SU Z A Review on tobramycin analysis methods J Strait Pharm J 海峡药学 2004 16 4 13 14 3 YUAN C JIA N WANG J X et al Determination of aminoglycoside