动物组织石蜡切片制作

动物组织石蜡切片制作 实验目的 制作实验动物的组织切片并染色 掌握动物组织制片技术 实验用品 1 动物的组织 2 器材和仪器 切片机 展片仪 毛笔 载玻片 盖玻片 烤箱 显微镜 3 试剂 60 乙醇 70 乙醇 80 乙醇 90 乙醇 95 乙醇 无水乙醇 二甲苯 石蜡 中性树胶 方案一 病理石蜡切片的制作 一 石蜡组织块制作1 取材 2 固定 3 脱水 透明及浸蜡 具体步骤见表 4 包埋 注意事项 一般实质性脏器的组织及肿瘤组织应把最大切面朝下包埋 食管 胃 肠等组织须将管壁横断面朝下包埋 若在同一蜡块中包埋数块管壁组织时 应平行横埋且黏膜面 内膜 的方向应一致 以便切片及观察 同一蜡块包埋多个组织块时 组织的性质应相同 方向要一致 不能把大小 厚薄差别悬殊的组织包埋在一起 组织块间的距离不能太大 皮肤 骨等难切组织及需要连续切片的组织都应单独包埋 神经 脊髓及需要定向包埋的组织应注意组织块的相互关系 包埋 尤其在室温较低的情况下 操作应迅速 防止组织块变凉 蜡液凝结及出现气泡 组织块与蜡液不能很好凝固定在一起 导致组织与蜡分离 遇有管腔或空洞标本与小标本同埋一个蜡块时 不能将小标本放入其他标本的管腔或空洞内 二 石蜡切片制作 用切片机将石蜡包埋的组织块 蜡块 制成适宜厚度的切片 是目前在病理学科中最常用的一种制片方法 切片厚度为一般4 6 m 切片前的准备 1 修切蜡块切片前应先修块 即切去组织周围过多的石蜡 一般留下约2mm宽度的蜡边为宜 注意蜡块不能留得太窄 在切片时易损坏组织 蜡边不能留得太多 否则影响展片 室温过高时 可将修好的蜡块放到冰箱中冷却一定时间 2 切片用品准备 1 切片刀 预先磨好切片刀备用或切片前更换新的一次性切片 2 载物片 载物片经清洁液 95 乙醇处理后备用 3 展片仪 加入温水 接通电源 调整温度 4 其他用品 准备好毛笔 记号笔 镊子 冰块等 切片制作过程 以使用旋转式切片机石蜡切片为例 1 将切片刀装在刀架上 后将蜡块装在切片机固定装置上 调整蜡块与刀至合适位置 刀刃与蜡块切面呈5 夹角 旋转式切片机切取组织 是由下向上切 为得到完整的切片 防止组织出现刀纹裂缝 应将组织硬脆难切的部分放在上端 如皮肤组织 应将表皮部分向上 而胃肠等组织 应将浆膜面朝上 2 左手执手笔 右手旋转切片机旋转轮 先粗切标本 直到暴露出组织最大切面 但对小标本不要修切得太多 以免将整个组织块修切掉 再连续旋转切出蜡带 左手持毛笔将蜡片带下端轻轻托起 右手用镊子夹起蜡带上端 正面向上放入展片仪水盒内 展片温度根据使用的石蜡熔点进行调整 一般水温为45 左右 待蜡片带中的组织展平后 即可进行分片和捞片 对于展片困难的切片经30 的乙醇初展后 再用载玻片捞起蜡带放人展片仪水盒内可使切片更易展平 在夏季切片时可用冰块冷却切片刀和组织块 减少切片刀与组织块在切片过程中产生的热时 使石蜡保持合适的硬度以利于切片 3 捞起切片后 写上编号 捞片时注意切片的位置 一般切片的中心位于载物片右侧1 3与2 3交界处为佳 并注意整齐美观 4 烤箱60 左右烘烤切片30min 对血凝块和皮肤组织应及时烤片 烤片温度应稍低 脑组织切片捞出后直立晾干 再烤片 否则产生气泡 方案二石蜡切片的制作 1 6微米 制作大批的或是连续的切片 长期保存 一 切片前的准备 1 恒温水浴锅首先预热至35 40 2 蜡块整修 暴露组织并修平 减少刀的磨 3 载玻片应事先洗涤干净 无油腻和不透明现象 涂粘片剂 4 将锋利的刀片 调整角度和位置 以20 30 为佳 5 备用小型毛笔 小型无钩镊子 铅笔 方案二石蜡切片的制作 二 切片的步骤 1 将蜡块固定于切片机头上的夹座内 2 调整蜡块组织切面恰好与刀口接触 旋紧刀架3 根据需要调整切片厚度 4 修整切片 直到切出完整的最大组织切面后 再行切制 5 切下的切片带 用毛笔从刀口向上挑起 拉下切片带 方案二石蜡切片的制作 三 切片的注意事项1 切片质量的好坏 与技术熟练程度和切片机 切片刀的好坏有关外 2 切片机的各个零件和螺丝应旋紧 否则将会产生震动 3 在摇动切片机时 用力要求均匀一致 不宜过重过猛 否则造成切片厚薄不均 或空洞现象 4 在夏秋季节进行切片时 应使用冰块加强冷却 可保持石蜡的硬度 减少切片的褶皱 方案二石蜡切片的制作 四 贴片 1 将单张切片 用镊子夹住蜡片的一边并提起 铺于恒温水中 光亮的一面朝下 立即用毛笔轻轻拉展以切片无皱褶为最好 2 待切片在恒温水内充分摊开展平后 将载玻片垂直插入水中轻靠切片 随即将玻片直立提起 拨正切片位置 3 用铅笔在玻片的毛玻璃上写上标本编号 字要写得小而清楚 端正 4 贴好的切片置于60 恒温箱内干燥2小时 蛋白质凝固后即可染色 实验1石蜡切片的制做技术 试剂与器材 甲醛 酒精 二甲苯 苏木精 伊红 中性树胶 双面刀片 蜡板 镊子 滤纸 200ml容量瓶 广口 玻璃标本缸 载玻片 盖玻片 染色缸 毛笔 新鲜鸡蛋 甘油空闲时间 参观冰冻切片的制做石蜡切片的制做程序 详细过程请查看讲义 组织取材2毫米厚度 固定于福尔马林2小时 组织流水冲洗1 2小时 实验1石蜡切片的制做技术 70 酒精2 4小时 85 酒精2 4小时 95 酒精 2 3小时 95 酒精 1 2小时 100 酒精 1 2小时 100 酒精 0 5 1小时 100 酒精 二甲苯 1 1 0 5 1小时 二甲苯 20 30分钟 二甲苯 10 20分钟 浸蜡 40分钟 浸蜡 40分钟 组织包埋 蜡块整修 切片 贴好的切片置于60 恒温箱内干燥2小时 实验2HE染色技术 二甲苯 脱蜡10分钟 二甲苯 脱蜡10分钟 100 酒精 2 5分钟 100 酒精 2 5分钟 95 酒精1 2分钟 90 酒精1 2分钟 85 酒精1 2分钟 自来水洗片刻蒸馏水片刻苏木素10 15分钟自来水洗1 2分钟1 盐酸酒精分化0 5 1分钟流水冲洗蓝化10分钟 至数小时 实验2HE