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文档简介

细胞组分的分级分离 实验九 通过细胞匀浆和离心的方法分级分离细胞的组分 了解其原理 过程及作用 实验目的 细胞内不同结构的比重和大小都不同 在同一离心场内的沉降速度也不相同 根据这一原理 用不同的转速的离心法 可将细胞内各种组分分级分离出来 实验原理 速度逐渐提高 样品按大小先后沉淀 实验内容 细胞核的分离提取高速离心分离提取线粒体 细胞核的分离提取步骤 1 椎脱臼法法处死小鼠 迅速开腹取肝脏 剪成小块 置于盛有0 9 NaCl烧杯中 反复洗涤 除去血污 用滤纸吸去表面的溶液 2 将湿重约1g的肝组织放在小平皿中 取8ml预冷的0 25mol L蔗糖 0 003mol L氯化钙溶液 先加入少量该溶液于平皿中 尽量剪碎组织后 再全部加入 3 将剪碎的肝组织倒入匀浆管中 使匀浆器下端浸入盛有冰块的器皿中 研磨3 5次 用8层湿纱布过滤匀浆于离心管中 然后制备一张涂片 做好标记 自然干燥 4 将装有滤液的离心管配平后 放入离心机 2500r min离心15分钟 取上清液 移入高速离心管中 保存于有冰块的烧杯中 待分离线粒体用 同时涂一张上清液片 做好标记 自然干燥 余下的沉淀物进行以下步骤 5 用6ml0 25mol L蔗糖 0 003mol L氯化钙溶液 悬浮沉淀物 以2500r min离心15分钟弃上清 将残留液体用吸管吹打成悬液 滴一滴于干净的载玻片上 涂片 自然干燥 6 将 涂片用1 甲苯胺兰染色后盖上盖片即可观察 高速离心分离提取线粒体步骤 1 将上述装有上清液的高速离心管 从装有冰块的烧杯中取出 配平后 以17000r min离心20分钟 弃上清 留取沉淀物 2 加入0 25mol L蔗糖 0 003mol L 氯化钙液 1ml 用吸管吹打成悬液 以17000r min离心20分钟 将上清吸入另一试管 留取沉淀物 加入0 1ml0 25mol L蔗糖 0 003mol L氯化钙溶液混匀成悬液 3 取沉淀物上清液和悬液 分别滴一滴于干净的载玻片上 分别标记为 涂片 各滴一滴0 02 詹纳斯绿B染液 盖上盖片染20分钟 4 油镜下观察 颗粒状的线粒体被詹纳斯绿B染成兰绿色 1 研磨时要在低温进行 2 过滤前要先将纱布湿润 3 离心前要注意配平 注意事项 1 简要说明分级分离细胞的原理及其意义 2 比较一下分离细胞核时涂
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