细胞转染试剂产品销售专员培训资料PPT课件

掀起Polyplus转染风暴 产品专员培训 J Polyplus transfection 转染方法介绍 显微注射法电穿孔法 Amaxa Biolistic颗粒传递法 基因枪粒子轰击法 磷酸钙法阳离子脂质体法 Invitrogen Roche Qiagen 阳离子聚合物 Sunma梭华 凯基 polyplus 物理方法 化学方法 病毒介导法 转染的应用 基因组功能研究 基因表达调控 蛋白功能 信号转导和药物筛选研究建立细胞系 转基因细胞模型 永生性细胞株建立转基因动物模型基因治疗研究和应用蛋白功能和定位研究重组蛋白生产及蛋白药物研究 Whydoweneedtransfectionreagent 细胞转染难易比较 Adherent SuspensionProblem E g MembraneTHP1 Jurkat Fastdividingcell nondividingcellProblem E g AccesstothenucleusNeurons Cellline PrimarycellProblem E g MoresensitiveEpithelialprimarycells 体外转染 PolyPlus transfection是法国一家专门致力于研发和销售转染试剂的生物技术公司 PolyPlus transfection公司简介 PolyPlus transfection提供体内和体外转染产品 包括基因 寡核苷酸 siRNA及蛋白转染产品 可进行瞬时和稳定的转染及重组蛋白质制备 InVitro InVivo siRNAtransfection StandardtransfectionINTERFERin jetSI ENDOTraffickingandvisualizationjetSI FluojetSI ENDO Fluo 产品介绍 DNAtransfection Standardtransfectioninvivo jetPEI Ligand conjugatedreagentsinvivo jetPEI Galinvivo jetPEI ManTraffickingandvisualizationinvivo jetPEI Fluoinvivo jetPEI biotin DNAtransfection Invitro Invivo StandardtransfectionjetPEI Cell specifictransfectionjetPEI GaljetPEI MacrophagejetPEI HUVECjetPEI RGDTraffickingandvisualizationjetPEI FluojetPEI biotin SyntheticmediumtransfectionFecturin Proteindelivery ProteinandantibodyPULSin invivo jetPEI MousebraininjectionjetSI 10mM siRNAtransfection 产品系列 Protein antibody转染 PULSinSiRNA体外转染 INTERFERinDNA SiRNA体内转染 invivojetPEIDNA体外转染 invitrojetPEI 产品系列一 Protein antibody转染 PULSin 蛋白转染 Protein antibody转染 应用 细胞内定位研究蛋白水平的干扰研究抗体功能封闭的研究疾病治疗的研究替代免疫细胞化学在活细胞内检测 蛋白转染 protein转染难题 MassChargePurityStability3DstructureRelease Activity xkDapI xx hoursordaysGlobular random well definedstructureFreeproteinincytoplasm DNAandRNA anionicpolymers Protein morecomplexmolecules 蛋白转染 技术原理 PULSin cationicamphiphilic basedformulation 蛋白转染 操作步骤 蛋白转染 R phycoerythrin NIH 3T3cells Conditions Livingcellswereanalyzedbyfluorescencemicroscopy16hourspost delivery pI 5 5MW 240kDa PULSin转染蛋白质 1 gR PE 4 lPULSin Diffusefluorescence EfficientdeliveryofproteinwithPULSin 蛋白转染 PULSin 转染单抗 HeLacellsanti NPC AF 488 1 lAb4 lPULSin Conditions Livingcellswereanalyzedbyfluorescencemicroscopy8hourspost delivery Localizedfluorescencearoundnuclearmembrane EfficientdeliveryoffunctionalAb 抗体转染 PULSin 转染多抗 HeLacellsanti giantin AF 488 0 5 lAb4 lPULSin Conditions Livingcellswereanalyzedbyconfocalmicroscopy17hourspost delivery PlasmamembraneswerestainedwithConcanavalinA rhodamine EfficientdeliveryoffunctionalAb 抗体转染 PULSin 转染多肽 多肽转染 HeLacells Pep A StreptococcusTPEBepitope 16aa lissamine rhodaminederivative EfficientdeliveryofPeptides PULSin 已转染的不同细胞类型 R PE 1 g PULSin 4 l Deliverytoawidevarietyofcells 蛋白转染 PULSin 已转染的细胞及转染效率 蛋白转染 R phycoerythrin R phycoerythrin R phycoerythrin PULSin 蛋白 抗体 多肽列表 蛋白转染 优势 新新技术 活细胞中进行Protein Ab转染高转染效率无细胞毒性即用型溶液操作简单 PULSin 优势 蛋白转染 PULSin 的竞争对手 蛋白转染 Chariot ActiveMotif BioPorter GTS ProteoJuice Merck 产品系列二 体外SiRNA转染 INTERFERin siRNA转染 选择 设计 合成siRNA双链化学合成siRNA质粒表达siRNA转染siRNA到靶细胞瞬时表达 化学合成siRNA 质粒表达siRNA稳定表达 质粒表达siRNA分析检测RNA干扰作用蛋白水平 WB IF FCmRNA水平 实时定量RT PCR northernblotting siRNA基因沉默实验设计 iRNA介导基因沉默机制 siRNA siRNAexpressionplasmid CleavagebyDicer siRNAs siRNAassociatewithRISC CleavageofmRNAbyRISC dsRNA DicercleavageofdsRNA HairpinsiRNA Cellmembrane Nuclearmembrane Protein X INTERFERin jetPEI siRNA转染 实验操作 siRNA 1nM inserum freemedium 1 AddINTERFERin Vortexandincubate10minatr t 3 1 2 3 4 Addtowellcontainingcellsincompletemedium Incubatefor48hoursat37 C 5 6 Genesilencingassay 6 5 4 2 Protocolforcellsin24 wellplate INTERFERin siRNA转染 反向操作 HTS操作 Standartprotocol Reverseprotocol Platecells24hpriortotransfection DilutesiRNAs AddINTERFERin VortexIncubate10min Distributeintowells DistributesiRNAsoruselibraries AddINTERFERin MixIncubate10min Addcells 96 wellplate Day1 Day2 Day1 Day3 Plate Transfect Assay Plateandtransfect Day4 Assay siRNA转染 反向转染基因沉默效率 A549 GL3LucLuciferase 96 wellplate 反向转染仍能得到极高的基因沉默效率 siRNA转染 siRNAdeliverywithINTERFERin CaSkicells 24 wellplate LaminA CImmunofluorescenceassay 1nMsiRNA siRNA转染 基因沉默效率 基因沉默效率 GreatsilencingdowntopicomolarsiRNAconcentration A549 GL3Luccells 24 wellplate Luciferase 70 92 siRNA转染 细胞毒性 A549 GL3Luc 24 wellplate 1nMsiRNA NocellulartoxicityobservedwithINTERFERin L1 INTERFERin L2 siRNA转染 成功转染的细胞系 SilencingefficiencywithINTERFERin invariouscelllines siRNA转染 原代细胞的高效沉默 24 wellplateGAPDH 甘油醛 3 磷酸脱氢酶 BranchedDNAassay 96 人原代肝实质细胞 人原代纤维原细胞 82 siRNA转染 INTERFERin优势 低浓度siRNA 甚至pmol级别 就能达到高效的基因沉默在很多细胞系中 基因沉默效率可达到90 以上在原代细胞中也能达到有效的基因沉默效率无细胞毒性不受血清和抗生素的影响操作简单价格便宜在反向操作转染中的效率高 siRNA转染 siRNA转染竞争对手 Lipofectamine2000 Invitrogen Oligofectamine Invitrogen HiPerFect Qiagen SiLentFect BioRad InvitrogenisthelargestsiRNAtransfectionmarketQiagenisadangerousoutsiderwithHiPerFect siRNA转染 INTERFERinvsLipofectamine2000 INTERFERinvsOligofectamine INTERFERinvsHiPerFect SiLentFect INTERFERin 与HiPerFect SiLentFect基因沉默效率 A549 GL3Luc 24 wellplate Luciferase INTERFERin 与HiPerFect SiLentFect细胞毒性 A549 GL3Luc 24 wellplate 1nMsiRNA NocellulartoxicityobservedwithINTERFERin HiPerFect INTERFERin SiLentFect 体内DNA siRNA转染 invivojetPEI 产品系列三 体内转染 invivojetPEIvsViruses invivojetPEI easytobeusednotimmunogenicnottoxiccandeliveredoligonucleotidesuptoverylargeDNA butalsosiRNA 体内转染 体内转染 invivojetPEIvsViruses Differentroutes Variousanimals Intravenous静脉Intratumoral瘤内Intracerebral脑室Intraperitonal腹膜Intratracheal气管灌注Instillation 吸入 MouseRatDuckGuineapigMonkey 体内转染的路径和动物 towardsHumanapplication 体内转染 体内转染的基因表达分布情况 O Freund 活小鼠体内荧光素酶表达的荧光检测图象 用含50 gpCMVluc和invivo jetPEI复合物的400 l5 葡萄糖溶液尾部注射Balb Cmice Liver30000Tumor2000 KidneyL300000 LungR20000000 KidneyR115000 OvaryL210000 LungL16000000 OvaryR150000 CourtesyJL CollandO Freund invivo jetPEI体内转染 体内转染 InRats H19 DTA H19 白喉毒素A基因 质粒与invivo jetPEI复合物转入大鼠膀胱 NBT IIcells50 gDNAatD 4 D 8D 11ratsweresacrified Ohana P etal GeneTherMolBiol 2004 8 181 192 DecreaseinbladderweightInhibitionoftumorgrowth invivo jetPEI转染对膀胱癌的治疗 体内转染 InHuman H19 DTAplasmid invivo jetPEI 复合物转染对人膀胱癌的治疗 Ohana P etal GeneTherMolBiol 2004 8 181 192 D Video cystoscopyperformedbeforethetreatmentandthreeweeksafterthecompletionofthe6thtreatment showingalargenecroticareareplacingthetumorregion E Treatmentshows 75 tumorregression invivo jetPEI转染对膀胱癌的治疗 体内转染 活体小鼠尾静脉注射 24小时后的荧光检测图 24hourslater theluciferasegeneexpressionwasmonitoredbybioluminescentimagingoflivemiceusingacooledCCDcamera DNAalone GL2 Luc DNA GL2 Luc GL2 Luc siRNA 10 g DNA GL2 Luc GL3 Luc siRNA 10 g Coll Freund Erbacher invivo jetPEI DNA siRNA共转染 siRNAandpCMVLuc与invivo jetPEI复合物转染对荧光素酶肺部表达起明显的抑制作用 体内转染 Urban kleinetal GeneTherapy 1 6 2004 C erb2 neu HER 2 receptor invivo jetPEI 体内基因沉默 HER 2downregulationTumorgrowthinhibitionduring18days i p inathymicnudemiceSubcutaneoustumorxenograftsSKOV 3 ovariancarcinomacell A NakedHER 2specificsiRNA 0 6nmole B HER 2siRNA PEIpolyplexes 体内转染 产品系列四 DNAinvitrotransfection invitrojetPEI 体外DNA转染 DNA转染过程 体外DNA转染 提取质粒DNA或寡核苷酸选择和培养细胞系转染瞬时转染稳定转染 抗性筛选检测 外源基因细胞内表达的实验流程 DNA转染试剂 体外DNA转染 体外DNA转染 DNA jetPEI Cationiccomplexes nucleus ProtonSponge cytoplasm Endocytosis invitroDNAdelivery 体外DNA转染 numberofnitrogenresiduesofjetPEI numberofDNAphosphates ComplexesFormation 2 lofjetPEIfor1 gofDNAatN P 5 InvitroDNAdelivery jetPEI 实验操作 serum 2 lofjetPEIfor1 gofDNA 1mlofjetPEI 500transfectionsin24 wellplatesor 2500transfectionsin96 wellplates 体外DNA转染 HeLacells 1 gofpCMVLuc N P5 ComplexesFormation Effectofincubationtime 体外DNA转染 HeLa HEK293 NIH3T3 galactosidase BHK N P 3 N P 5 control pCMVLacZ Reproductibility Cellstransfectedin24 wellplateswithjetPEI N P 5 witha galactosidase expressingplasmid pCMVLacZ ExpressionwasvisualizedbyX galstainingafter24h jetPEI 转染效率 体外DNA转染 细胞特异性jetPEI转染产品 jetPEI Macrophage 巨噬细胞 jetPEI Mannose Mannosereceptor MacrophagesjetPEI Hepatocyte 肝实质细胞 jetPEI G