NAA浓度对中华芦荟叶片组织培养影响的研究.doc

不同浓度NAA诱导芦荟叶片愈伤效果的研究王玉梅广东第二师范学院 生物系 09园艺技术 广州 510303摘要：采用浓度差的方法，考察了0mg/L、0.5mg/L、1mg/L、1.5mg/L四种浓度的NAA对中华芦荟叶片愈伤组织的诱导效果的影响。结果表明：在MS+0.2mg/L6-NA基本培养基中，1mg/L的NAA对愈伤的诱导效果最好。关键词：芦荟（Aloe） 叶片 愈伤组织诱导 芦荟（Aloe）为百合科芦荟属植物，含有七十多种对人体有益物质，在医学、食用、美容等多方面都具有广泛的实用价值【1】。芦荟的繁殖一般采用扦插和分株繁殖，然而这些方法受繁殖基数的限制，初期繁殖速度较慢，而且容易是病毒积累，影响植株生长，甚至退化【2】。采用叶片经愈伤组织诱导再促进长芽、生根的培养方法，不仅可以为生产提供一条在短期内繁殖出大量种苗的途径，以加速新品种的推广，而且还可以解决大规模快速繁殖中材料不足的问题。该试验以中华芦荟为材料，采用浓度差的方法，探究不同浓度NAA在MS+0.2mg/L6-BA基本培养基中对中华芦荟叶片愈伤组织诱导效果，以期获得最佳浓度。1 材料与方法1.1 实验材料 中华芦荟的幼嫩叶片采自广东第二师范学院生物楼6楼顶1.2 实验方法1.2.1 培养基的配置 以MS为基本培养基，其中添加0.2mg/L的6-BA和4个不同浓度的NAA组合（见表1），蔗糖3%，琼脂1%，PH5.8,培养基经高温杀毒30min备用。表1 培养基与激素组合组名 瓶数 培养基 6-BA(mg/L) NAA(mg/L) A 10 MS 0.2 0 B 10 MS 0.2 0.5 C 10 MS 0.2 1 D 10 MS 0.2 1.51.2.2 材料灭菌处理 取芦荟幼嫩叶片，用自来水洗干净再在流水下冲刷3h, 再用75%的酒精进行表面消毒30s，然后用01的升汞液消毒9min，最后用无菌水冲洗78次，洗去植物表面的升汞残液，放人无菌培养皿中，用无菌滤纸吸干水分备用。1.2.3 接种无菌条件下，将消毒后的芦荟切成约05lcm大小的块。接种在培养基上。每瓶接种34个外植体。1.2.4 培养条件温度252 。C，每天光照1014h，光照强度15OO 20001x2 结果与讨论2.1 实验结果2.1.1 观察与数据统计接种第5d开始出现轻微褐化现象，第10d全部褐化，第15d有54块芦荟叶片出现起动现象；第21d发现B、C组各有一瓶长出类似根的物质，第25d观察证实B组一块外植体长出根和C组两块外植体长出根，截至第47d，A组有13块外植体启动，B组有14块外植体启动，C组外植体有18块有启动现象，D组有17块外植体起动。表2 不同浓度NAA对愈伤起动的影响组名 接种块数 褐化率（%） 启动率（%） 长根率 A 18 100 72.2 0 B 24 100 58.3 4.2 C 27 100 66.7 7.4 D 27 100 63.3 02.1.2 实验照片图1 四组褐化现象的比较图2 外植体直接生根2.2 实验讨论2.2.1 NAA抑制芦荟叶片在MS+0.2mg/L6-BA基本培养基愈伤的起动？ 有关资料表明【3】常用生长调节物质对中华芦荟的愈伤诱导效果大小表现为6-BAIBA2.4-DNAA.由表2可知，A组没有添加NAA，其愈伤启动率最高，然而NAA的浓度对愈伤的影响也有一个坡度。最佳的NAA浓度与0.2mg/L的6-BA组合还有待于我们下一组实验的验证。2.2.2 褐化对实验结果的影响 在实验过程中，发现外植体发生褐化现象严重，褐化率达100%。它是由于组织中的酚类物质经氧化后产生棕褐色的醌类物质造成的。这类物质可抑制细胞中其他酶的活性，影响细胞的正常代谢，严重是可导致组织的死亡。这一现象严重影响了芦荟愈伤组织的诱导率，所以今后芦荟组织培养一定要注意防止褐变的发生，可以添加活性炭等物质。2.2.3 实验误差对实验结果的影响 该试验各组的接种外植体数目相差甚大，造成实验的对比误差，可能A组的外植体总数比较少而引起其起动率的偏大。建议以后做类似的对比实验一定要严格要求数目的一致，令实验更有说服力。 2.2.4 导致外植体直接生根的两个原因 生长素与细胞分类素的比例高时，愈伤组织仅形成根【4】。外植体不适应培养基所产生的变异。 参考文献：【1】 于生华，吴洪军，赵凤臣,等. 芦荟的药用 .中国林副特产，1998，（4），157 【2】 纪萍，司徒琳莉，赵伟东，等.三种芦荟组织培养及快速繁殖的研究.中国林副特产，2002，（1