（医学课件）免疫组化

免疫组织化学的应用 1 原理 抗原 抗体的特异性结合 组织内定位 形态结合功能应用 广泛性 生理活动或病理过程 2 举例 生理活动 胚胎发育过程内分泌 旁分泌 自分泌功能 免疫反应 细胞免疫 体液免疫 活动状态 静止 活动或转化 3 炎症反应 炎症细胞 炎症介质 修复过程 细胞外基质沉积 间质细胞活化 肿瘤 起源 良恶性 致病原检测 外来致病原检测 内源性抗原沉积 病理过程 4 实用性对疾病作出诊断举例 乳头状瘤病毒 宫颈癌 乳头状瘤 湿疣HBV抗原 病毒性肝炎 HBV相关性肾炎 幽门螺杆菌 慢性胃炎 食道鳞癌 HPV 食道腺癌 HPV 5 慢性胃炎胃溃疡的病因发现马歇尔获2005年诺贝尔医学奖 1979年 沃伦教授初步发现幽门螺杆菌 之后马歇尔与他合作开展研究 最终发现幽门螺杆菌与慢性胃炎的关系 免疫组化hp阳性 6 一 检测致病原 7 一 外源性1 细菌类溶链球菌M蛋白 肾小球肾炎 风湿热伤寒杆菌Vi抗原 肾小球肾炎葡萄球菌抗原 肾小球肾炎白喉杆菌抗原 肾小球肾炎 8 2 病毒肝炎病毒 甲 乙 丙型肝炎病毒等 病毒性肝炎肝细胞肝癌 肝HBsAg 肝HBcAg 肝HCVAg 9 肾小球肾炎 乙 丙型肝炎病毒 肾小球HBcAg 肾小管HBcAg 10 人类免疫缺陷病毒AIDS病乳头状瘤病毒湿疣 6 11型 宫颈癌 16 18 31型 单纯疱疹病毒宫颈癌巨细胞病毒巨细胞病毒性肺炎等EBV病毒Burkitt淋巴瘤鼻咽癌传染性单核细胞增生症人类T细胞病毒 型急性T细胞白血病 型蕈样霉菌病 11 其他病毒 出血热病毒 流行性出血热 麻疹病毒 亚急性硬化性全脑炎 乳多空病毒 SV40等 进行性多灶性白质脑病 呼吸道合胞病毒 腺病毒 间质性肺炎 12 3 寄生虫类 卡氏孢子虫 卡氏孢子虫肺炎 血吸虫卵 肝肠血吸虫 肾小球肾炎 疟原虫 疟疾 肾小球肾炎4 螺旋体 梅毒螺旋体 梅毒 肾炎5 支原体 肺炎支原体 间质性肺炎 13 二 内源性 DNA SLE 线粒体 原发性胆汁性肝硬化 DNA 线粒体 14 微粒体 甲状腺炎 平滑肌抗原 狼疮性肝炎 甲状腺微粒体 血管平滑肌 15 壁细胞抗原 慢性萎缩性胃炎 甲状腺球蛋白 慢性甲状腺炎 Col NCI抗原 Goodpasture综合征 肾小管刷状缘抗原 膜性肾炎 中性粒细胞胞质抗体 ANCA ANCA相关性血管炎 胃壁细胞抗原 16 17 二 免疫性损伤 变态反应性疾病 18 19 免疫活性细胞1 T细胞 静止T细胞CD1 CD8 可分为CD4 细胞 CD8 细胞 活化T细胞CD9 J2 CD25 IL 2R Ia HLA D 其他标志 CD80 CD95 CDw109 CDw122 20 2 B细胞 静止B细胞SIg G M D CD19 22 CD24 Ia HLA D 活化B细胞CD23 Blast 2 BCGF CD25 IL 2R 其他标志CD80 CD86 21 3 NK细胞CD11b CD11c CD16 CD35 CD57 CDw122等4 单核巨噬细胞CD16 CD23 CD32 CD115酶类 1抗胰蛋白酶 1抗糜蛋白酶溶菌酶 肾小球MAC387 细胞 肿瘤溶菌酶 肺 1 ACT 22 代表性疾病 移植物排异反应 甲状腺炎 干燥综合征 病毒性肝炎 23 抗体介导的变态反应性疾病免疫球蛋白 IgG IgA IgM IgE 链补体 C1 C2 C3 C4 经典途径C3备介素 替代途径 24 代表性疾病 肾小球肾炎发病机制免疫复合物型 颗粒状荧光抗GBM型 线状荧光 25 球蛋白类型IgG为主 感染后肾炎 膜性肾炎 膜增生性肾炎IgA为主 IgA肾病 紫癜性肾炎IgM为主 IgM肾病 FSGS 淀粉样肾病 轻链肾病 IgAN FSGS 26 SLE血浆 自身抗体种类多肾组织 复合物中球蛋白和补体种类多 数量大 范围广皮肤 狼疮带 IgG IgA IgM 27 SLE C3 C1q 28 变态反应性血管炎 结节性多A炎 显微镜型多血管炎 IgG IgM IgA沉积ANCA CANCA 胞浆型 韦格纳肉芽肿pANCA 核周型 显微镜型多血管炎等 29 移植物排异反应血管壁 IgG C3沉积肾小球 复发性肾炎 其他自身免疫性疾病混合性结缔组织病 血管 肾小球内IgG C3沉积硬皮病 结缔组织 血管壁IgG沉积 硬皮病 30 三 修复 纤维化机制的研究肉芽组织是不完全性修复的物质基础 31 常见疾病A粥样硬化 冠心病肝硬化 肝昏迷 上消化道大出血肾小球硬化 肾功能衰竭肺纤维化 肺心病 肺性脑病 32 一 物质基础 间质细胞群 A壁平滑肌样细胞肝星状细胞肾小球系膜细胞肺成纤维细胞 33 ECM胶原蛋白间质型 型胶原基膜型 型胶原 Col I Col IV 34 粘连性糖蛋白FN LN TBS 透明质酸糖胺聚糖 蛋白氨基多糖 硫酸化氨基多糖 软骨素 肝素 肤质小分子氨基多糖 胶原修饰蛋白等 Col IV FN 35 生长因子及其受体EGF 上皮细胞生长PDGF 结缔组织生长 血管 肾小球硬化 TGF ECM合成增加 肝 肺 肾纤维化 bFGF 肝 肺纤维化和脑胶质化 36 ECM受体 整合蛋白 integrin 链组成的糖蛋白主要分为 1类FN R 5 1 v 1LM R 6 1 1 1Col R 1 1 2 1 3 1 2类动脉内皮细胞表面粘附分子 3类血小板gp b a Fb FN vWF Vn v 3 Vn Fb vWF TBS 37 基质降解酶及其抑制因子纤溶酶降解系统 PAs uPA tPA PAI 1 2 3 4基质金属酶降解系统 MMPs TIMPs 细胞内传递信使PKC依赖途径非PKC依赖途径Smad信号通路 38 四 肿瘤的病理诊断 39 组织相关性标志物 tissueassociatedmarker 又称组织特异性标志物 specifictissuemarker 用于区分肿瘤的组织来源 40 表1 上皮细胞常用标志物 名称英文缩写分子量 KD 意义 细胞角蛋白CK40 68上皮 腺 鳞上皮 上皮细胞膜抗原EMA45 400内脏器官上皮桥粒蛋白DSP215 285细胞连接结构甲状腺球蛋白TGB670甲状腺上皮前列腺特异抗原PSA34前列腺上皮组织多肽抗原TPA20 25肝 胆管上皮 41 1 上皮细胞类抗原细胞角蛋白 CK 低分子量 腺状上皮高分子量 鳞形上皮全细胞角蛋白 腺 鳞和移行上皮 CK 宫内膜 CK 卵巢黏液腺癌 CK 食管腺癌 CK 皮肤 42 特异性上皮标志甲状腺球蛋白 TGB 甲状腺滤泡上皮前列腺特异性抗原 PSA 前列腺上皮甲胎蛋白 FP 肝癌细胞 生殖细胞肿瘤胚胎性硫糖蛋白 FSA 胃癌细胞 TGB 甲状腺 PSA 前列腺癌 PSA 转移癌 FP 卵黄囊癌 43 上皮膜抗原 EMA 特异性较CK差 因浆细胞瘤 淋巴瘤细胞等可为阳性癌胚抗原 CEA 腺癌的标记物 EMA 乳腺癌 EMA 肾癌 CEA 结肠癌 44 表2 间叶组织常用标志物 名称英文缩写分子量 KD 意义 波形蛋白Vm57间叶组织结蛋白Dm53肌组织血友病因子VWF200 240血管 淋巴管 F RAg 肌红蛋白MG17 8横纹肌 中胚叶组织溶菌酶14 4组织细胞 1 抗胰蛋白酶 1 AT 1 抗糜蛋白酶 1 ACT 45 2 间叶组织类抗原间叶细胞性 波形蛋白 Vm 间叶性肿瘤 Vm 结肠间质 Vm 恶性纤维组织细胞瘤 46 肌源性 结蛋白 Dm 肌源性肿瘤肌动蛋白 actin 肌源性肿瘤肌凝蛋白 myosin 骨骼肌肌红蛋白 myoglobin MGB 横纹肌肿瘤 Dm 平滑肌肉瘤 actin 乳腺导管 MGB 横纹肌 47 血管 淋巴管 源性 因子相关抗原 F Rag 血管内皮细胞 外皮细胞阳性荆豆凝集素 UL 血管内皮 外皮细胞阳性CD34 血管 淋巴管 内皮细胞 F Rag 48 表3 神经组织常用标志物 名称英文缩写分子量 KD 意义 胶质纤维酸性蛋白GFAP50 52神经胶质神经丝蛋白NF68神经元S 10020 25神经及外胚层源性组织突触囊泡蛋白Sy38神经元突触前囊泡 肾上腺髓质等 49 3 神经源性神经微丝 neurofilament NF 神经元及神经内分泌肿瘤S 100 神经胶质细胞 鞘膜细胞 黑色素细胞 肌上皮来源肿瘤 脑胶母瘤 NF小脑星胶瘤 NF皮内痣 S100神经纤维束 S100 50 神经元特异性烯醇化酶 NSE 神经元胞体和胞突结构阳性胶质纤维酸性蛋白 GFAP 神经胶质细胞阳性 NSE 胰岛 GFAP 大脑皮质 51 表4 淋巴造血组织常用标志物 名称英文缩写分子量 KD 意义 全白细胞抗原CD45180 200T B细胞表面免疫球蛋白SIgB细胞全B细胞抗原CD1995CD2035 37B细胞CD22135全T细胞CD246 50T细胞CD319 29CD567CD740 52 T细胞亚群抗原CD455T细胞CD834髓单核细胞抗原CD11b165髓 单核细胞CD1315CD1455CD15105 200髓单核细胞也可见于R S细胞CD3367CD34105 120前髓细胞 内皮细胞Ki 1抗原CD30150 120Ki 1白血病 霍奇金病 53 4 CD抗原 前述 T B细胞抗原 用于区分白血病 淋巴瘤等肿瘤的病理组织学类型其他 CD45 LCA 白细胞共同抗原免疫球蛋白 SIg B细胞淋巴瘤CD20 L26 B细胞淋巴瘤CD45R0 UCAL 1 T细胞淋巴瘤CD15 LeuM1 何杰金淋巴瘤 RS细胞 CD30 Ri 1 Ki 1 淋巴瘤CD68 Kp 1 组织细胞性淋巴瘤 54 1 ACT 淋巴结 LCA 霍奇金病 LeuM 白血病 55 表5 标记物对低分化恶性肿瘤的鉴别 肿瘤CKEMALCAS 100VmDm 癌 恶黑 恶淋 肉瘤 56 表6 内分泌器官常用标志物器官名称英文缩写肽类意义垂体促肾上腺皮质激素ACTH39肽促肾上腺皮质功能促甲状腺素TSH25 28KD促甲状腺功能促卵泡素FSH促卵泡发育 精子生成黄体生成素LH促排卵 黄体生成 雄激素分泌生长激素GH191氨基酸促组织生长加压素VP9肽促肾小管吸收 升压催产素OT9肽催产排乳 57 肾上腺糖皮质激素 皮质 糖原沉积盐皮质激素潴钠排钾醛固酮肾上腺素 髓质 调节血压去甲肾上腺素甲状腺甲状腺素 腺上皮 T3 T4生长发育 代谢调节降钙素 C细胞 32肽抑骨盐溶解 58 5 内分泌类腺垂体促肾上腺皮质激素 ACTH 生长激素 GH 黄体生成素 LH 促黑色素 ACTHGHLH 促黑色素 59 胰岛素胰高血糖素 60 表7 弥散神经内分泌细胞 APUD 常用标记物种类名称英文缩写肽类意义A细胞肠高血糖素EG69肽升血压D细胞生长抑素SS14肽功能多种D1细胞血管活性肠肽VIP28肽舒平滑肌 促胰分泌EC1细胞P物质SP11肽功能未明EC2促胃动素Motilin22肽启肠运动ECL细胞组胺HT扩血管G细胞促胃液素Gastropin17肽促胃液分泌 61 I细胞缩胆囊肽CCK33肽促胰淀粉酶分泌K细胞肠抑胃肽GIP43肽抑胃液分泌L细胞肠高血糖样物GLI69肽参与肠道免疫反应N细胞神经降压肽Neurotesin13肽降压 抑促胃液P细胞铃蟾肽Bombesin14肽促胃液素 CCK分泌PP细胞胰多肽PP抑胰液分泌S细胞促胰液素Secretin促胰液分泌PYY细胞PYY肽PPY功能未明 62 嗜铬细胞瘤 促胃液素瘤 63 6 激素受体雌 孕激素受体 女生殖道肿瘤 乳腺癌 肺癌 胃癌等雄激素受体 中枢神经肿瘤 前列腺癌 肝癌等 ER 乳腺癌 ER 乳腺癌 64 7 酶类碱性磷酸酶 AKP 肝癌 骨肉瘤酸性磷酸酶 ACP 前列腺癌5 核苷酸磷酸二酶脂 5 NP 肝癌谷氨酰转肽酶 GT 肝癌M2型丙酮酸激酶 M2RYK 肝癌胎盘碱性磷酸酶 PLAP 精原细胞瘤 65 8 其他HMB45 恶性黑色素瘤hCG 合体滋养叶细胞及其肿瘤OC125 卵巢浆液性肿瘤 66 二 肿瘤相关性标志物 tumourassociatedmarker 又称肿瘤预后性标志物 tumourprognosticmarker 用于确定肿瘤的良恶性或预后 67 1 癌基因与抑癌基因表8 癌基因与人类相关肿瘤 一 癌基因恶性肿瘤 abl慢性粒细胞白血病bcl 2B细胞淋巴瘤bcl 3慢性淋巴细胞性白血病C erbB鳞状细胞癌 腺癌 星形胶质瘤neu乳癌 卵巢癌 胃癌lck结肠癌lyt10B细胞淋巴瘤Pml急性髓性白血病 68 表8 癌基因与人类相关肿瘤 二 myc多种肿瘤ras多种肿瘤ret甲状腺癌K sam胃癌sis肉瘤tal 1急性淋巴细胞白血病ros急性白血病fms绒癌 外阴癌 69 表9 抑癌基因与人类相关肿瘤 抑癌基因相关肿瘤 RB视网膜母细胞瘤p53多种肿瘤WT1肾母细胞瘤NF1神经纤维瘤NF2神经鞘瘤DCC直 结肠癌APC结肠癌等BRCA1 2乳腺癌p21多种肿瘤p16多种肿瘤p27多种肿瘤MSH2 MLH1非息肉性结肠癌 70 nm 23 牙龈鳞癌 71 p 53 平滑肌肉瘤 p 21 肺鳞癌 P 27 乳腺癌 72 2 粘附分子家族 A 钙粘蛋白 cadherin 又称钙依赖性粘附素家族 跨膜糖蛋白主要分为E P N 还有Ep B M R T V等 723 748个氨基酸 存在于分化性肿瘤 低分化者降低或消失 73 B 整合蛋白 integrin 又称整合素家族 由 亚单位组成的异二聚体 20多种其中 亚单位16种 亚单位8种 参与肿瘤转移和着落 侵袭性肿瘤时其表达增高 74 C 免疫球蛋白超家族 IgCAMs 种类多细胞间粘附分子 ICAM1 2 3 血管细胞粘附分子 VCAM 杀伤T细胞相关抗原4 CTLA 4 血小板内皮细胞粘附分子 1 PECAM 1 也包括CEA 跨膜蛋白 含Ig样结构区 血清ICAM 1 VCAM 1升高 可能与肿瘤发生转移有关 75 D CD44家族透明质酸受体 也介导其他ECM成份的结合 可分为3种 80 90 103 CD44s 120 160 103 CD44v 180 215 103 CD 硫酸软骨素 跨膜糖蛋白 341个氨基酸 MW37 2 103糖基化的CD44蛋白为80 90 103糖基化变异体的CD44蛋白为120 1600 103 10多种 恶性肿瘤细胞CD44表达升高 76 E 选择素家族 selectinfamily 又称凝集素样细胞粘附分子 分为3种L 选择素 淋巴细胞归巢受体P 选择素 血小板活化依赖性颗粒表面膜蛋白E 选择素 内皮细胞 白细胞粘附分子 单链跨膜糖蛋白 MW75 140KD 其受体为寡糖分子 如lewis抗原 结肠时表达增强 77 3 蛋白降解酶类 A 组织蛋白酶 CP