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核蛋白提取实验准备：1 4离心机2 根据标本数计算所需I，II，III，IV总体积，取出液体，并加入蛋白酶抑制剂，（III由加蛋白酶抑制剂I与加蛋白酶抑制剂II混合物）实验操作：1 收集细胞。10ml 对照细胞（1-2*105/ml ）培养48h后，15ml 离心管收集，300g（1370 rpm）* 5min。弃上清，加1ml 1*PBS轻轻涡旋混匀后转移至1.5ml EP管。2 4，300g * 5min，弃上清。3 重悬细胞于120l缓冲液I。4 重悬细胞于120l缓冲液II，4轻微旋转混匀，15min。5 4 2500 rpm * 1min。6 转移上清（胞浆蛋白）至新管。7 在沉淀中缓慢加120l缓冲液III，轻微颠倒混匀，离心：4，2500 rpm * 1min。8 弃上清，加130l缓冲液IV（+蛋白酶抑制剂），4旋转混匀1h。9 离心4，13000g * 10 min。10 转移上清（核蛋白）至一新管，定量。核提取缓冲液I（15ml）25mM HEPES 375l HEPES5mM KCl 75l 1M KCl0.5mM MgCl2 7.5l 1M MgCl2DDH2O 14.54 ml核提取缓冲液II（15ml）25mM HEPES 375l HEPES5mM KCl 75l 1M KCl0.5mM MgCl2 7.5l 1M MgCl21% NP-40 150l NP-40DDH2O 14.39 ml核提取缓冲液III（15ml）25mM HEPES 250l HEPES10% Sucrose 1g Sucrose350mM NaCl 700l 5M NaCl0.01% NP40 1l NP-40DDH2O 9.1 ml5M NaCl：14.61g/50 ml H2O注：1在提取浆蛋白后，吸去上清时，如第一次用100l枪洗不干净，再离心，然后用10l枪吸尽液体。再用III液洗一遍，如前步骤吸尽液体，再加IV液，这样的去除浆蛋白污染效果较好些。2胞浆蛋白混胞核蛋白原因：因为药物高浓度时，胞核会破裂，所以会在高浓度处理组中胞浆蛋白混有胞核蛋白较严重；3 胞核蛋白对照组有时会提不到原因：可能是因为没有药物处理，所以其核不容易破开。如需要，可在步骤8去掉胞浆蛋白后用枪头打匀，并振荡（我还没试
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