豆干中细菌总数及大肠菌群检测.doc

豆干中细菌总数及大肠菌群检测食品学院 08食安（3）班潘金富200830610322 韦岸200830610323摘要：检测食品中的细菌总数和大肠菌群能从一定程度上反应食品的质量。本实验使用平板菌落计数法和细菌总数PetrifilmTM测试片计数法这两种方法测定豆干中的细菌总数，使用大肠菌群MPN检验方法和大肠菌群PetrifilmTM测试片计数法分别测定豆干中的大肠菌群。通过不同方法测相同样品中细菌总数的结果相差较大，而通过两种方法测得的大肠菌群结果比较接近。关键词：细菌总数 大肠菌群 平板计数 PetrifilmTM测试片前言 微生物学检验国家标准对菌落总数定义为：食品检样经过匀质处理，在一定条件下培养后（如培养基成分、培养温度和培养时间、pH、需氧性质等），所得1ml(g)验样中所含菌落的总数2。菌落总数一般反映出食品的新鲜程度、是否变质和食品生产的一般卫生状况，是判断食品卫生质量，进行食品卫生学评价的重要指标3。菌落总数的检测方法主要有国家标准、IDF国际标准和菌落总数测试片法。国际标准优于国家标准，检出率高，营养全面，计数公式科学，茵落易于分辨，但检验周期较长4。而测定方法应该在较短时间内使尽可能多的细胞在培养基上生长，因此国标法更适合于实验教学的展开。测试片法与国标法比较相符程度很高5，操作简单，容易判读，但成本较高。大肠菌群是指一群能发酵乳糖、产酸、产气、需氧和兼性厌氧的革兰氏阴性无芽孢杆菌。多年来国内外都以大肠菌群作为食品污染的常用指示菌，并评价和判断食品被粪便污染的程度和有无肠道致病菌污染的可能1。多年来，国内外都以大肠菌群作为食品、水体污染的常用指示菌之一，并评价和判断食品被粪便污染的程度和有无肠道致病菌污染的可能3。传统的大肠菌群计数采用多管发酵法，基于泊松分布间接计数最可能数，准确性高。有研究者在初发酵管中加入一定浓度的革兰氏阳性菌抑菌剂和显色剂，直接依据产酸产气及溶液颜色的变化，推算出水样中大肠菌群的含量，也能获得较好的准确性6。通过改变培养基成分和特殊加工研制快速检测试剂盒的工作也取得了一定的进展3。1 材料与方法1.1 细菌总数检测培养基与试剂，检测程序，操作步骤，参见国标GB/T4789.2-2008。1.2 大肠菌群检测培养基与试剂，检测程序，操作步骤，参见国标GB/T4789.3-2008。2 实验结果与分析2.1 细菌总数检测结果2.1.1 各浓度梯度计数结果表一：稀释度10-610-710-8空白对照平板一菌落数7782320平板二菌落数989145 0由表一所示数据可知，随着稀释度的增加，平板一的菌落数呈不规则变化，而平板二的菌落数随稀释度变大而变小。按常理推断，稀释度越大，菌落数应该越小。平板一的不规则变化应该是由操作或是计数的误差导致。2.1.2 细菌总数的计算与结果NC/(n1+0.1n2+0.01n3)d式中：N样品中菌落数C平板（含适宜范围菌落数的平板）菌落数之和n1第一个适宜稀释度平板上的平板数n2第二个适宜稀释度平板上的平板数n3第三个适宜稀释度平板上的平板数d稀释因子（第一稀释度）NC/(n1+0.1n2+0.01n3)d=（77+98+82+91+32+45）/(2+0.12+0.012) 10-6=425/(2.2210-6)=1.9108CFU/mL由计算结果所示，该检样中细菌菌落总数为1.9108CFU/mL。根据PetrifilmTM测试片法，检样中细菌数为2.4106CFU/mL。2.2 大肠菌群检测结果2.1.1 初发酵各浓度梯度阳性管数统计表二：稀释度10-310-410-5空白阳性管数3330由表二数据可知，三个梯度的阳性管数相同，而空白管的阳性管数为零。2.1.2 复发酵各浓度梯度阳性管数统计表三：稀释度10-310-410-5阳性管数3 32由表三所示数据可知，经过发发酵后各梯度的阳性管数有所变化。根据此结果可查出相对应的MPN值。2.1.3 大肠菌群MPN的计算与报告经查检索表所得，该检样中大肠菌群MPN值为1.1105/mL，有95%的可信限。未能得到更准确的结果，需要进一步稀释实验。根据PetrifilmTM测试片法，检样中大肠菌群为1.2106/mL3 实验结论与讨论本实验按照国标法进行操作，尽管产生一定的误差，但能够粗略判断出检样的卫生质量，达到了学习检测菌落数和大肠菌群MPN计数的目的。在细菌总数的测定中，通过平板菌落计数法检测出的细菌菌落总数为1.9108CFU/mL，通过PetrifilmTM测试片法检测出样中细菌数为2.4106CFU/mL，两种方法测出的数据相差较大，而且两个空白平板的菌落数为零，无菌水和实验室环境已为无菌环境，说明在实验过程中存在着一定误差，例如没有严格的进行无菌操作导致带入杂菌，而且对菌落计数的标准不够明确导致在计数过程中引起菌落数的误差。另外，试验中操作条件粗糙，各种用具并不是严格的无菌，也是造成误差的原因。在测定大肠菌群的实验中，分别使用了MPN法和PetrifilmTM测试片法检测样品中的大肠菌群，得到的实验结果是1.1105/mL和1.2106/mL，两者还是有一定的差距。MPN为最大可能数的简称。这种方法对样品进行连续系列进行稀释，加入培养基进行培养，从规定的反应呈阳性管数的出现率，用概率论来推算样品中菌数最近似的数值1。所以，通过这种方法测出的结果并不是一个准确的数值，跟实际值还是有一定的差距。在对照MPN检索表时要注意稀释梯度，如果实验时用了不同的梯度，MPN值要乘相应的倍数。大肠菌群PetrifilmTM测试片法虽然操作简便，但是在测试片计数时要熟练计数标准，红色有气泡的菌落方可确认为大肠菌群。通过对国标进行学习操作，对菌落总数、大肠菌群的测定有了较深的认识。本次实验中分别使用了两种不同的方法测定菌落总数和大肠菌群，通过两种方法的操作的对比可知，PetrifilmTM测试片法明显会比其它检测方法要简便、快键。而通过两种方法的数据对比可知，每种方法都有每种方法的优势和弊端，操作不规范、不熟练都会造成实验误差。因此，在实际工作中，要根据检测对象的不同来选择合适的检测方法。4 检验报告检样名称豆干检验编号002数量10g进料日期2010.4.25检验日期2010.4.25检验地点华农大食品学院检验项目菌落总数、大肠菌群实验依据GB/T 4789.2-2008 、GB/T 4789.3-2008结果细菌总数：1.9108CFU/g大肠菌群数：1.1105/100g本实验结果仅对所送样品负责检验起止时间：2010年4月25日至2010年4月27日检测人： 复核人： 参考文献1张英，张志伟.大肠菌群检测中应注意的几个问题探讨.2009，3：35-36.2房玉国,张丽宏,王克新.食品中菌落总数测定方法探讨. 2005,33(04):56-58.3王世平,句立言，高霞，等.大肠菌群快速检测试剂盒的研制及应用.中国初级卫生保健,2009,23(02):5