微生物操作规范.xls

菌菌落落总总数数标标准准操操作作规规范范 评价对象日期 步步骤骤过过程程注注意意要要点点分分数数提提问问 操操作作不不符符合合情情况况 一 准备工作 1实验器材 平皿清洗干净后 使用灭菌筒或厚纸包扎 锥形 瓶 试管使用塞子 2 3在管内 后 再用厚纸 包扎进行灭菌 1 1 高压锅在灭菌过程中 加压的作用是什么 1 分 培养基按说明分装300ml三角瓶灭菌 体积为容 积的2 3 1 高压锅的正确使用 1 放入的消毒物品是否堵塞安全阀出气孔 保证出 气畅通 1 消毒物品之间是否留有一定的缝隙 1 为胆内注水 观测水位 拧紧螺杆 接通电源 1 加热时 放气阀是否在垂直放气的位置 使冷空 气加热逸出 1 温度时间设置是否正确 2 检查压力锅是否在检定日期内使用 1 使用前查看压力表是否正常运行 1 消毒完毕 切断电源 待汽排尽压力表指针回到 0时 开启上边放气阀 才能打开器盖 1 2 环境 人 员 无菌室是否清洁整齐 室内是否备有必须的检验 用品 如 酒精灯 酒精棉 火柴 镊子 接种 针 接种环 记号铅 吸头等 1 查看温度 湿度表是否在检定日期内 1 检查温度 湿度表是否正常 1 紫外线灭菌半小时 1 人员进入无菌室以前 是否更换消毒过的工作服 工作帽及工作鞋 1 进入无菌室是否用消毒液对超净台及所用区域进行消 毒 1 是否打开超净台鼓风 1 二 检测过程 1称样 取出酒精棉球消毒后 瓶盖是否盖住 1 2 菌落总数的定义 2分 3 菌落总数的卫生学意 义 1分 4 检测依据是什么 1分 5 GB T5413和GB T4789 菌落总数那些内容改变 3分 6 如果菌落蔓延 该怎 么办 1分 称样时人员手 小臂是否消毒 1 所称样品是否具有代表性 1 样品封口是否完整 1 称样前是否对所称样品进行消毒 1 称样纸进行灭菌时要快速过酒精灯火焰外焰 以防温 度过高糊粉 1 是否对称样勺进行消毒 1 称样量是否准确 1 称样吸样时是否在酒精灯火焰区域 1 2稀释 溶解样品时是否振摇使样品完全溶解 1 7 为什么要进行对照实 验 1分 8 为什么要从低到高进 行稀释 1分 样品稀释液是否进行预热 温度是否适宜 1 使用的稀释液是否正确 1 稀释时检查吸管是否完好无损 1 吸管头接吸头前是否在火焰周围挤捏排气 1 吸管插入检样稀释液内不能低于液面2 5cm 1 打开稀释液容器时 瓶口 或管口 瓶塞 或 管塞 是否过火焰 1 加完样后瓶口或管口 瓶塞或管塞是否过火焰 用后的样品 器材是否及时撤出超净台 1 试管手持方式是否正确 手离开试管口 手持两 支试管时管口 塞子不得接触 1 每递增稀释一次 是否更换一次吸管 1 做稀释时移取的量是否准确 1 选择的稀释度是否正确 1 是否从低稀释倍数到高稀释倍数进行稀释 1 做每个稀释度时是否与样品充分混匀 1 每个稀释度是否做平行 1 检样时是否对操作环境的空气净度进行监测 1 检样时是否做稀释液 培养基的空白对照 1 吸样在平板中时 样品是否溅到平皿壁上 管尖 不能碰到平皿 1 3 倾注培 养基 倾倒培养基时温度 46 1 及量 15 20ml 是否适宜 1 9 琼脂温度过高或过低 会产生怎样的影响 1 分 倾注培养基后是否与样品充分混匀 1 倾倒培养基时 酒精灯对三角瓶口灭菌时间应适 宜 1 从制备样品匀液至样品接种完毕 全过程不得超 过15min 1 是否冷却后 翻转平皿放入培养箱中 1 培养温度 36 1 是否正确 1 培养时间 48h 2h 是否正确 1 实验完毕后是否将废物及时清理 并将紫外灯打 开灭菌半小时 1 4 菌落计 数 菌落的选择是否正确 2 10 如果平板上菌落密布 应该怎样计数 2 分 11 如果稀释度大的平板 上菌落数反比稀释度小 的平板上菌落数高的原 因 如何处理 2分 12 菌落计数的公式是什 么 1分 计数是否准确 2 计算结果是否准确 保留位数是否正确 1 5 结果报 告 报告结果是否正确 1 13 菌落总数的单位是什 么 1分 2稀释 7 为什么要进行对照实 验 1分 8 为什么要从低到高进 行稀释 1分 记录填写是否完全 1 6其它 操作方面不符合情况 每个问题0 5 分数满分 79分得分 评价人 日期 5 结果报 告 13 菌落总数的单位是什 么 1分 霉霉菌菌及及酵酵母母菌菌标标准准操操作作规规范范 评价对象日期 步步骤骤过过程程注注意意要要点点分分数数提提问问 操操作作不不符符合合情情况况 一 准备工作 1实验器材 平皿清洗干净后 使用灭菌筒或厚纸包扎 锥形瓶 试管使用塞子 2 3在管内 后 再用厚纸包扎进行灭菌 1 1 高压锅在灭菌过程 中加压的作用是什么 1分 培养基按说明分装300ml三角瓶灭菌 体积 为容积的2 3 1 高压锅的正确使用 1 放入的消毒物品是否堵塞安全阀出气孔 保 证出气畅通 1 消毒物品之间是否留有一定的缝隙 1 为胆内注水 观测水位 拧紧螺杆 接通电 源 1 加热时 放气阀是否在垂直放气的位置 使冷空气加热逸出 1 温度时间设置是否正确 1 检查压力锅是否在检定日期内使用 1 使用前查看压力表是否正常 1 消毒完毕 切断电源 待汽排尽压力表指针 回到0时 开启上边放气阀 才能打开器盖 1 2 环境 人 员 无菌室是否清洁整齐 室内是否备有必须的 检验用品 如 酒精灯 酒精棉 火柴 镊 子 接种针 接种环 记号铅 吸头等 1 紫外线灭菌半小时 1 检查温度 湿度表是否在检定日期内 1 检查温度 湿度表是否正常 1 人员进入无菌室以前 是否更换消毒过的工 作服 工作帽及工作鞋 1 进入无菌室是否用消毒液对超净台及所用区域 进行消毒 1 是否打开超净台鼓风 1 二 检测过程 1称样 取出酒精棉球消毒后 瓶盖是否盖住 1 2 霉菌属于什么菌 形态是什么样的 2分 3 霉菌区别于其他菌 的特征是什么 2 分 称样时人员手 小臂是否消毒 1 所称样品是否具有代表性 1 样品封口是否完整 1 称样前是否对所称样品进行消毒 1 用称样纸称样时 快速过酒精灯火焰外焰 以免温度过高糊粉 1 是否对称样勺进行消毒 1 称样量是否准确 1 称样吸样时是否在酒精灯火焰区域 1 2稀释 溶解样品时是否振摇使样品完全溶解 1 4 在稀释过程中 为 什么要反复吹打50次 1分 样品溶解后是否振摇30min 1 稀释液是否进行预热 温度是否适宜 1 使用的稀释液是否正确 1 使用吸管前 是否检查吸管完好无损 1 吸管头接吸头前是否在火焰周围挤捏排气 1 吸管插入检样稀释液内不能低于液面2 5cm 1 打开稀释液容器时 瓶口 或管口 瓶塞 或管塞 是否过火焰 1 加完样后瓶口或管口 瓶塞或管塞是否过火 焰 用后的样品 器材是否及时撤出超净台 1 试管手持方式是否正确 手离开试管口 手 持两支试管时管口 塞子不得接触 1 每递增稀释一次 是否更换一次吸管 1 做稀释时移取的量是否准确 1 选择的稀释度是否正确 1 是否从低稀释倍数到高稀释倍数进行稀释 1 做每个稀释度时是否与样品充分混匀 1 混匀后是否用吸管在试管里吹打50次 使孢 子吹打开 1 每个稀释度是否做平行 1 检样时是否对操作环境的空气净度进行监测 2 检样时是否做稀释液 培养基的空白对照 2 吸样在平板中时 样品是否溅到平皿壁上 管尖不要碰到平皿壁 1 3 倾注培 养基 倾倒培养基时温度 46 1 及量 15 20cm 是否适宜 2 5 霉菌使用的培养基 是什么 1分 6 长有霉菌的平板 该怎样处理 1分 倾注培养基后是否与样品混匀 1 倾倒培养基时 酒精灯对三角瓶口灭菌时间 应适宜 1 从制备样品匀液至样品接种完毕 全过程不 得超过15min 1 是否冷却后 翻转平皿放入培养箱中 1 培养温度 25 28 是否正确 1 培养时间 3 5d 是否正确 三天后是否观 察结果 1 实验完毕后是否将废物及时清理 并将紫外 灯打开灭菌半小时 1 4菌落计数 菌落的选择是否正确 2 7 计数时应该选择多 少范围内的菌落计数 1分 计数是否准确 1 计算结果是否准确 1 5结果报告 报告结果是否正确 保留位数是否正确 1 8 霉菌的单位是什么 1分 9 如果结果为0 0 应该怎样报告 1分 记录填写是否完全 1 6其它 操作方面不符合情况 每个问题0 5 分数满分 75分得分 评价人 日期 大大肠肠菌菌群群标标准准操操作作规规范范 评价对象日期 步步骤骤过过程程注注意意要要点点分分数数提提问问操操作作不不符符合合情情况况 一 准备工作 1实验器材 平皿清洗干净后 使用灭菌筒或厚纸包扎 锥 形瓶 试管使用塞子 2 3在管内 后 再用厚 纸包扎进行灭菌 1 1 高压灭菌为什么要 排冷空气 1分 培养基按说明分装300ml三角瓶灭菌 体积为 容积的2 3 1 高压锅的正确使用 1 放入的消毒物品是否堵塞安全阀出气孔 保证 出气畅通 1 消毒物品之间是否留有一定的缝隙 1 为胆内注水 观测水位 拧紧螺杆 接通电源 1 加热时 放气阀是否在垂直放气的位置 使冷 空气加热逸出 1 温度时间设置是否正确 2 检查压力锅是否在检定日期内使用 1 使用前查看压力表是否正常 1 消毒完毕 切断电源 待汽排尽压力表指针回 到0时 开启上边放气阀 才能打开器盖 1 2环境 人员 无菌室是否清洁整齐 室内是否备有必须的检 验用品 如 酒精灯 酒精棉 火柴 镊子 接种针 接种环 记号铅 吸头等 1 检查温度 湿度表是否在检定日期内 1 检查温度 湿度表是否正常运行 1 紫外线灭菌半小时 1 人员进入无菌室以前 是否更换消毒过的工作 服 工作帽及工作鞋 1 进入无菌室是否用消毒液对超净台及所用区域进行 消毒 1 是否打开超净台鼓风 1 二 检测过程 1称样 取出酒精棉球消毒后 瓶盖是否盖住 1 2 大肠菌群的定义 2分 3 大肠菌群的卫生学 意义是什么 1分 称样时人员手 小臂是否消毒 1 所称样品是否具有代表性 1 样品封口是否完整 1 称样前是否对所称样品进行消毒 1 是否对称样勺进行消毒 1 用称样纸进行称样时 快速过酒精灯火焰外焰 以免温度过高糊粉 1 称样量是否准确 1 称样吸样时是否在酒精灯火焰区域 1 2稀释 溶解样品时是否振摇使样品完全溶解 1 4 稀释时为什么要从 低稀释倍数到高稀释 倍数 1分 稀释液使用时是否进行预热 温度是否适宜 1 使用的稀释液是否正确 1 使用吸管前检查吸管是否完好无损 1 吸管头接吸头前是否在火焰周围挤捏排气 1 吸管插入检样稀释液内不能低于液面2 5cm 1 打开稀释液容器时 瓶口 或管口 瓶塞 或管塞 是否过火焰 1 加完样后瓶口或管口 瓶塞或管塞是否过火焰 用后的样品 器材是否及时撤出超净台 1 试管手持方式是否正确 手离开试管口 手持 两支试管时管口 塞子不得接触 1 每递增稀释一次 是否更换一次吸管 1 做稀释时移取的量是否准确 1 选择的稀释度是否正确 1 是否从低稀释倍数到高稀释倍数进行稀释 1 做每个稀释度时是否与样品充分混匀 1 是否做稀释液的空白对照实验 1 检样时是否做单 双料空白对照 2 3 初发酵实 验 LST 初发酵接种量是否正确 应选择3个稀释度 每 个稀释度接种3管 如接种量超过1ml 则用双 料肉汤 1 5 加样时为什么要缓 慢的加入 1分 6 放入小导管的作用 1分 做样前 是否检查导气管中有无气泡 1 加样时是否沿着管壁缓慢加入 加完样品后不 要振荡 1 培养的温度 36 1 时间 48h 2h 是否 正确 2 如果不好进行判定 轻摇试管观察产气情况 1 4 复发酵实 验 BGLB 接种环的使用是否先竖着过火焰 然后在横着 从前向后进行彻底灭菌 1 接种环是否先冷却一下 然后在挑取培养物 1 接种完毕后是否过火焰进行灭菌 1 培养的温度 36 1 时间 48h 2h 是否 正确 2 如果不好进行结果判定 轻摇试管观察产气情 况 1 5结果 结果判定是否准确 2 7 MPN是什么的简称 1分 报告方式是否正确 1 6其它 操作方面不符合情况 每个问题0 5分 分数满分 77分得分 评价人 日期 2稀释 4 稀释时为什么要从 低稀释倍数到高稀释 倍数 1分 革革兰兰氏氏染染色色标标准准操操作作规规范范 评价对象日期 步步骤骤过过程程注注意意要要点点分分数数提提问问 操操作作不不符符合合情情况况 一 染色过程 1涂片 接种环的使用 先竖着过火焰 在横着过 火焰 从前往后 1 1 涂片的薄厚对结果 有什么影响 2分 接种环的使用 灭菌是否彻底 灭菌后是 否冷却 1 涂片时菌量的多少 涂的是否均匀 2 浸泡载玻片所用酒精的浓度是否正确 1 挑取菌落是否适宜 挑取单菌落 1 挑取的菌落是否做标记 1 挑取菌体时 接种环离酒精灯火焰距离适 宜 1 是否用干净的载玻片 1 灭菌是否彻底的鉴定 过火焰时须将铂丝烧 红 至少横过2 3次 1 涂片结束后接种环处理方式是否妥当 从 柄往环逐渐灭菌以防菌爆渐污染环境 1 2干燥 可自然干燥 也可用酒精灯干燥 如用酒 精灯则加热温度不可过高以防细菌变形 玻片应远离火焰1 2cm 1 2 干燥时温度过高会 产生怎样的影响 1分 3固定 过酒精灯外焰2 3次进行固定 1 3 固定的目的 3 分 4染色 染色液 时间 顺序是否正确 3 4 染色的时间长短对 结果有影响吗 1分 染色时涂菌部分是否全部浸到染色液中 1 5脱色 脱色所用乙醇浓度是否正确 95 乙醇 1 5 脱色时间长对结果 有影响吗 1分 脱色的时间是否正确 脱色30s 1 6复染色 染色液 时间是否正确 2 7水洗 水流大小是否适宜 冲洗时不可直对涂菌 处 1 8干燥 水洗后是否干燥 如果用吸水纸不可对载 玻片造成摩擦 以免菌体被擦掉 16 干燥的目的 2分 9镜检 镜检方法是否正确 选择油镜 先粗调 再细调 2 7 显微镜怎样使用 2分 8 涂香泊油的目的 2分 是否能顺利地镜检出结果 2 镜检结果判定是否正确 2 镜检后镜头处理是否正确 应先用擦镜纸擦 去香泊油 再蘸取二甲苯擦去残余香泊油 再用擦镜纸擦去残余二甲苯 2 使用完毕后 显微镜是否妥当处理 转动 物镜转换器 放在低倍境位置 并将境身 下降到最低位置 罩上防尘套 2 10其它 操作方面不符合情况 每个问题0 5分 分数满分 47分得分 评价人 日期 双双歧歧杆杆菌菌标标准准操操作作规规范范 评价对象日期 步步骤骤过过程程注注意意要要点点分分数数提提问问操操作作不不符符合合情情况况 一 操作过程 1准备工作 平皿清洗干净后 使用灭菌筒或厚纸包扎 锥 形瓶 试管使用塞子 2 3在管内 后 再用厚 纸包扎进行灭菌 1 1 双歧杆菌的定义是 什么 1分 2 双歧杆菌的形态 1分 培养基的配置是否正确 1 培养基按说明分装三角瓶灭菌 1 高压锅的正确使用 1 放入的消毒物品是否堵塞安全阀出气孔 保证 出气畅通 1 消毒物品之间是否留有一定的缝隙 1 为胆内注水 观测水位 拧紧螺杆 接通电源 1 加热时 放气阀是否在垂直放气的位置 使冷 空气加热逸出 1 温度 时间设置是否正确 1 检查压力锅是否在检定日期内 1 使用前查看压力表是否正常 1 消毒完毕 切断电源 待汽排尽压力表指针回 到0时 开启上边放气阀 才能打开器盖 1 检查温度 湿度表是否在检定日期内 1 检查温度湿度表是否正常 1 无菌室是否清洁整齐 室内是否备有必须的检 验用品 如 酒精灯 酒精棉 火柴 镊子 接种针 接种环 记号铅 吸头等 1 紫外线灭菌半小时 1 人员进入无菌室以前 是否更换消毒过的工作 服 工作帽及工作鞋 1 进入无菌室是否用消毒液对超净台及所用区域进行 消毒 1 是否打开超净台鼓风 1 2称样 称样前是否对手 小臂进行消毒 1 取出酒精棉球消毒后 瓶盖是否盖住 1 称样时人员手 小臂是否消毒 1 所称样品是否具有代表性 1 样品封口是否完整 1 称样前是否对所称样品进行消毒 1 是否对称样勺进行消毒 1 用称样纸称样时 快速过酒精灯火焰外焰 以免温 度过高糊粉 1 称样量是否准确 1 称样 吸样时是否在酒精灯火焰区域 1 稀释 操作时 如吸样 称样 是否在酒精灯附近进 行 1 取样是否有代表性 固体应多处取样 液体应 混匀 1 吸取样量是否准确 1 使用吸管前 检查吸管是否完好无损 1 吸管头接吸头前是否在火焰周围挤捏排气 1 吸管插入检样稀释液内不能低于液面2 5cm 1 打开稀释液容器时 瓶口 或管口 瓶塞 或管塞 是否过火焰灭菌 1 试管手持方式是否正确 手离开试管口 手持 两支试管时管口 塞子不得接触 1 做每个稀释度时是否与样品充分混匀 1 每递增稀释一次 是否更换一次吸管 1 稀释时从低稀释度向高稀释度进行稀释 1 4 倾注培养基 倾注培养基时温度 46 1 及量 15ml 20ml 是否适宜 2 3 双歧杆菌所使用的 培养基是什么 1分 倾注培养基后是否与样品混匀 1 从制备样品匀液至样品接种完毕 全过程不得 超过20min 1 培养温度 36 1 时间 72h 3h 是否 正确 2 5结果 选择平板数是否正确 2 4 一般选取什么范围 内的菌落计数 1分 结果是否准确 1 结果报告 保留位数是否正确 1 6其它 操作方面不符合情况 每个问题0 5分 分数满分 54分得分 评价人 日期 芽芽孢孢和和耐耐热热芽芽孢孢标标准准操操作作规规范范 评价对象日期 步步骤骤过过程程注注意意要要点点分分数数提提问问操操作作不不符符合合情情况况 一 操作过程 1准备工作 玻璃器皿 培养基等是否灭菌 1 灭菌锅的使用是否正确 检查压力锅是否在 检定日期内使用 压力表是否正常 温度 时间设置是否正确 1 培养基的配置是否正确 2 无菌室是否清洁整齐 室内是否备有必须的 检验用品 如 酒精灯 酒精棉 火柴 镊 子 接种针 接种环 记号铅 吸头等 1 检查温度 湿度表是否正常 是否在