化妆品中防腐剂的检测方法（征求意见稿）.doc

化妆品中防腐剂的检测方法（征求意见稿） 1化妆品中防腐剂的检测方法（征求意见稿）第一法高效液相色谱法（一）甲基异噻唑啉酮等23种组分1范围本方法规定了采用高效液相色谱法测定化妆品中甲基异噻唑啉酮等23种组分的含量。 本方法适用于液态水基类、膏霜乳液类、凝胶类、液态油基类、粉类化妆品中甲基异噻唑啉酮等23种组分含量的测定。 本方法所指的23种组分包括甲基异噻唑啉酮、2-溴-2-硝基丙烷-1,3二醇、4-羟基苯甲酸、甲基氯异噻唑啉酮、苯甲醇、苯氧乙醇、苯甲酸、4-羟基苯甲酸甲酯、氯苯甘醚、脱氢乙酸、5-溴-5-硝基-1,3-二噁烷、4-羟基苯甲酸乙酯、4-羟基苯甲酸异丙酯、4-羟基苯甲酸丙酯、4-羟基苯甲酸苯酯、4-羟基苯甲酸异丁酯、4-羟基苯甲酸丁酯、4-羟基苯甲酸苄酯、苯甲酸乙酯、4-羟基苯甲酸戊酯、苯甲酸异丙酯、苯甲酸丙酯和苯甲酸苯基酯。 2方法提要以甲醇为溶剂提取化妆品中23种组分，用高效液相色谱仪分离，二级管阵列检测器检测，采用保留时间和光谱扫描图定性，峰面积定量，以标准曲线法计算含量。 本方法对23种组分的检出限、定量限和取样量为1g时的最低检出浓度，最低定量浓度见表1。 表123种组分的检出限、定量限、检出浓度和最低定量浓度序号组分名称检出限（ng）定量限（ng）最低检出浓度（%）最低定量浓度（%）1甲基异噻唑啉酮0.080.250.0000080.00002522-溴-2-硝基丙烷-1,3二醇5150.00050.001534-羟基苯甲酸0.6720.0000670.00024甲基氯异噻唑啉酮0.080.250.0000080.0000255苯甲醇10300.00100.00306苯氧乙醇6.7200.000670.00202序号组分名称检出限（ng）定量限（ng）最低检出浓度（%）最低定量浓度（%）7苯甲酸1.750.000170.000584-羟基苯甲酸甲酯0.41.250.000040.0001259氯苯甘醚130.00010.000310脱氢乙酸130.00010.0003115-溴-5-硝基-1,3-二噁烷8.3250.000830.0025124-羟基苯甲酸乙酯0.82.50.000080.00025134-羟基苯甲酸异丙酯0.82.50.000080.00025144-羟基苯甲酸丙酯0.82.50.000080.00025154-羟基苯甲酸苯酯130.00010.0003164-羟基苯甲酸异丁酯130.00010.0003174-羟基苯甲酸丁酯130.00010.0003184-羟基苯甲酸苄酯130.00010.000319苯甲酸乙酯260.00020.0006204-羟基苯甲酸戊酯260.00020.000621苯甲酸异丙酯2.370.000230.000722苯甲酸丙酯2.370.000230.000723苯甲酸苯基酯2.780.000270.00083试剂和材料除另有规定外，试剂均为分析纯，水为GB/T6682规定的一级水。 3.1甲醇，色谱纯。 3.2乙腈，色谱纯。 3.3二甲亚砜，色谱纯。 3.4磷酸(85%)，色谱纯。 3.50.1%磷酸溶液量取磷酸(85%)（3.4）1.18mL，加水至1000mL，混匀。 3.6标准储备溶液（=1g/L）准确称取甲基异噻唑啉酮等23种组分的标准品适量，精确到0.0001g，置于同一容量瓶中，用乙腈（必要时，可先用适量二甲亚砜溶解，再用乙腈溶液定容至刻度）溶解并定容至刻度，摇匀，置于冰箱中冷藏保存。 各组分浓度见表2。 3表2甲基异噻唑啉酮等23种组分混合标准储备溶液浓度序号组分名称混合标准储备溶液浓度（g/mL）1甲基异噻唑啉酮25022-溴-2-硝基丙烷-1,3二醇1500034-羟基苯甲酸20004甲基氯异噻唑啉酮2505苯甲醇300006苯氧乙醇200007苯甲酸500084-羟基苯甲酸甲酯12509氯苯甘醚300010脱氢乙酸3000115-溴-5-硝基-1,3-二噁烷25000124-羟基苯甲酸乙酯2500134-羟基苯甲酸异丙酯2500144-羟基苯甲酸丙酯2500154-羟基苯甲酸苯酯3000164-羟基苯甲酸异丁酯3000174-羟基苯甲酸丁酯3000184-羟基苯甲酸苄酯300019苯甲酸乙酯6000204-羟基苯甲酸戊酯600021苯甲酸异丙酯700022苯甲酸丙酯700023苯甲酸苯基酯80004仪器和设备4.1高效液相色谱仪，二极管阵列检测器。 4.2超声波清洗器。 44.30.22?m滤膜。 4.4离心机，10000r/min。 4.5涡旋振荡器。 4.6天平。 5分析步骤5.1混合标准系列溶液制备取混合标准储备溶液（3.6）适量，用甲醇稀释得混合标准系列溶液，各组分标准系列溶液浓度见表3。 混合标准系列溶液应现用现配。 表3甲基异噻唑啉酮等23种组分标准系列溶液浓度名称混合标准系列溶液溶液浓度（g/mL）甲基异噻唑啉酮12.552.50.50.250.0252-溴-2-硝基丙烷-1,3二醇75030015030151.54-羟基苯甲酸1004020420.2甲基氯异噻唑啉酮12.552.50.50.250.025苯甲醇150060030060303苯氧乙醇1000400xx0202苯甲酸250100501050.54-羟基苯甲酸甲酯62.52512.52.51.250.125氯苯甘醚1506030630.3脱氢乙酸1506030630.35-溴-5-硝基-1,3-二噁烷125050025050252.54-羟基苯甲酸乙酯125502552.50.254-羟基苯甲酸异丙酯125502552.50.254-羟基苯甲酸丙酯125502552.50.254-羟基苯甲酸苯酯1506030630.34-羟基苯甲酸异丁酯1506030630.34-羟基苯甲酸丁酯1506030630.34-羟基苯甲酸苄酯1506030630.3苯甲酸乙酯300120601260.65名称混合标准系列溶液溶液浓度（g/mL）4-羟基苯甲酸戊酯300120601260.6苯甲酸异丙酯350140701470.7苯甲酸丙酯350140701470.7苯甲酸苯基酯400160801680.85.2样品处理准确称取样品1.0g，精确至0.001g，置于具塞比色管中，加入甲醇（3.1）8mL，涡旋振荡30s，使试样与提取溶剂充分混匀，超声提取20min（工作频率2043KHz，200W），用甲醇定容至10mL，摇匀，以10000r/min离心5min。 取上清液经0.22m滤膜过滤，滤液作为试样溶液备用。 必要时用适量甲醇稀释。 5.3参考色谱条件色谱柱Agilent ZorbaxSB-C18柱（5m，4.6250mm），或等效色谱柱。 流动相溶液A0.1%磷酸溶液（3.5），溶液B乙腈（3.2），梯度洗脱程序见表4表4梯度洗脱time（min）A(%)B(%)0.0090105.00901029.0505041.0653552.0356557.059562.0901067.09010流速1.0mL/min；柱温30；进样量10L；检测波长甲基异噻唑啉酮、甲基氯异噻唑啉酮、苯甲酸的测定可采用280nm，对羟基苯甲酸、苯甲醇、4-羟基苯甲酸甲酯、4-羟基苯甲酸乙酯、4-羟基苯甲酸异丙酯、4-羟基苯甲酸丙酯、4-羟基苯甲酸苯酯、4-羟基苯甲酸异丁酯、4-羟基苯甲酸丁酯、4-羟基苯甲酸苄酯、4-羟基苯甲酸戊酯的测定可采用254nm，2-溴-2-硝基丙烷-1,3二醇、氯苯甘醚、5-溴-5-硝基-1,3-二噁烷、苯甲酸乙酯、苯甲酸异丙酯、苯甲酸丙酯、苯甲酸苯基酯的测定可采用6230nm，苯氧乙醇的测定可采用270nm，脱氢乙酸的测定可采用310nm。 5.4测定在“5.3”色谱条件下，取混合标准系列溶液（5.1）分别进样，进行色谱分析，以标准系列溶液浓度为横坐标，峰面积为纵坐标，绘制标准曲线。 取“5.2”项下的待测溶液进样，进行色谱分析，根据保留时间和紫外光谱图定性，测得峰面积，根据标准曲线得到待测溶液中各测定组分的浓度，按“6”计算样品中各测定组分的含量。 6分析结果的表述6.1计算mD V?式中样品中甲基异噻唑啉酮等23种组分的含量，g/g；试样溶液中甲基异噻唑啉酮等23种组分的浓度，g/mL；V样品定容体积，mL；m样品取样量，g。 D稀释倍数（如未稀释则为1）。 在重复性条件下获得的两次独立测试结果的绝对差值不得超过算术平均值的10%。 6.2回收率和精密度多家实验室验证在定量下限浓度附近回收率为80.0%115.0%，相对标准偏差小于9.7%；其他浓度回收率为79.89%114.6%，相对标准偏差小于10.5%。 77谱图图1标准溶液HPLC参考色谱图（1.甲基异噻唑啉酮，2.2-溴-2-硝基丙烷-1,3二醇，3.4-羟基苯甲酸，4.甲基氯异噻唑啉酮，5.苯甲醇，6.苯氧乙醇，7.苯甲酸，8.4-羟基苯甲酸甲酯，9.氯苯甘醚，10.脱氢乙酸，11.5-溴-5-硝基-1,3-二噁烷，12.4-羟基苯甲酸乙酯，13.4-羟基苯甲酸异丙酯，14.4-羟基苯甲酸丙酯，15.4-羟基苯甲酸苯酯，16.4-羟基苯甲酸异丁酯，17.4-羟基苯甲酸丁酯，18.4-羟基苯甲酸苄酯，19.苯甲酸乙酯，20.4-羟基苯甲酸戊酯，21.苯甲酸异丙酯，22.苯甲酸丙酯，23.苯甲酸苯基酯）8附录A表A标准品信息表标准品分子量纯度CAS No分子式甲基异噻唑啉酮115.0695%2682-20-4C4H5NOS2-溴-2-硝基丙烷-1,3二醇199.9898%52-51-7C3H6BrNO44-羟基苯甲酸138.1299%99-96-7C7H6O3甲基氯异噻唑啉酮149.5699%26172-55-4C4H4ClNOS苯甲醇108.13100%100-51-6C7H8O苯氧乙醇138.1699%122-99-6C8H10O2苯甲酸122.1100%65-85-0C6H5COOH4-羟基苯甲酸甲酯152.1599%99-76-3C8H8O3氯苯甘醚202.6398%104-29-0C9H11ClO3脱氢乙酸168.1598%520-45-6C8H8O45-溴-5-硝基-1,3-二噁烷21298%30007-47-7C4H6BrNO44-羟基苯甲酸乙酯166.299%120-47-8C9H10O34-羟基苯甲酸异丙酯180.299%4191-73-5C10H12O34-羟基苯甲酸丙酯180.2100%94-13-3C10H12O34-羟基苯甲酸苯酯214.299%17696-62-7C13H10O34-羟基苯甲酸异丁酯194.299%4247-02-3C11H14O34-羟基苯甲酸丁酯194.299%94-26-8C11H14O34-羟基苯甲酸苄酯228.2598%94-18-8C14H12O3苯甲酸乙酯150.17100%93-89-0C9H10O24-羟基苯甲酸戊酯203.2597%6521-29-5C12H16O3苯甲酸异丙酯164.299%939-48-0C10H12O2苯甲酸丙酯164.299%2315-68-6C10H12O2苯甲酸苯基酯198.2299%93-99-2C13H10O29（二）水杨酸等18种组分1范围本方法规定了高效液相色谱法测定化妆品中水杨酸等18种组分的含量。 本方法适用于液态水基类、膏霜乳液类、凝胶类、液态油基类、粉类化妆品中水杨酸等18种组分含量的测定。 本方法所指的18种组分包括水杨酸、山梨酸、苯氧异丙醇、2,6-二氯苯甲醇、苯甲酸甲酯、碘丙炔醇丁基氨甲酸酯、对氯间甲酚、2,4-二氯苯甲醇、邻苯基苯酚、邻伞花烃-5-醇、氯二甲酚、氯咪巴唑、苄氯酚、吡罗克酮乙醇胺盐、三氯卡班、三氯生、溴氯芬、硫柳汞钠。 2方法提要样品经甲醇提取后，经高效液相色谱仪分离，二级管阵列检测器检测，采用保留时间和光谱扫描图定性，峰面积定量，以标准曲线法计算含量。 本方法对18种组分的检出限、定量限和取样量为1g时的最低检出浓度，最低定量浓度见表1。 表118种组分的检出限、定量限、检出浓度和最低定量浓度序号组分名称检出限（ng）定量限（ng）最低检出浓度（%）最低定量浓度（%）1水杨酸3100.00030.00102山梨酸120.00010.00023苯氧异丙醇120.00010.000242,6-二氯苯甲醇7200.00070.00205苯甲酸甲酯140.00010.00046碘丙炔醇丁基氨甲酸酯20600.00200.00607对氯间甲酚250.00020.000582,4-二氯苯甲醇7200.00070.00209邻苯基苯酚260.00010.000310邻伞花烃-5-醇260.00020.000611氯二甲酚7200.00070.00xx氯咪巴唑7200.00070.00xx序号组分名称检出限（ng）定量限（ng）最低检出浓度（%）最低定量浓度（%）13苄氯酚260.00020.000614吡罗克酮乙醇胺盐16.7500.001670.005015三氯卡班120.00010.000216三氯生260.00020.000617溴氯芬260.00020.000618硫柳汞钠4120.00010.00033试剂和材料除另有规定外，试剂均为分析纯，水为GB/T6682规定的一级水。 3.1甲醇，色谱纯。 3.2磷酸二氢钠（NaH2PO4?2H2O）试剂纯。 3.3乙二胺四乙酸二钠（EDTA-2Na）试剂纯，分子量336.21。 3.4磷酸（85%）色谱纯。 3.5磷酸水溶液（10%）准确量取磷酸（3.4）14.16mL，用水定容至100mL,摇匀。 3.6磷酸二氢钠溶液（0.025mol/L，pH=3.80，0.02mmol/L EDTA-2Na）:称取磷酸二氢钠（3.2）3.9g，精确至0.001g，乙二胺四乙酸二钠（3.3）0.0067g，精确至0.0001g，于50mL烧杯中，加水溶解，移至1000mL容量瓶中，用水定容至刻度，混匀，即得0.025mol/L磷酸二氢钠溶液（含0.02mmol/L EDTA-2Na）。 用10%磷酸水溶液调节pH至3.80。 3.7单标标准储备溶液精密称取硫柳汞钠标准品500mg（精确到0.0001g），置于20mL容量瓶中，用甲醇溶解并定容至刻度，摇匀，制得硫柳汞钠为25mg/mL的单标标准储备溶液。 精密吸取硫柳汞钠标准储备溶液适量，用甲醇溶液稀释得硫柳汞钠为3000ug/mL的单标标准储备溶液。 3.8混合标准储备溶液除硫柳汞钠以外，精密称取17种组分标准品适量（精确到0.0001g），置于同一容量瓶中，用甲醇溶解并定容至刻度，摇匀，得17种组分的混合标准储备溶液。 各组分浓度见表2。 11表2水杨酸等18种组分混合标准储备溶液浓度序号中文名储备液浓度（ug/mL）1水杨酸25002山梨酸5003苯氧异丙醇50042,6-二氯苯甲醇50005苯甲酸甲酯10006碘丙炔醇丁基氨甲酸酯150007对氯间甲酚125082,4-二氯苯甲醇50009邻苯基苯酚150010邻伞花烃-5-醇150011氯二甲酚500012氯咪巴唑500013苄氯酚150014吡罗克酮乙醇胺盐1250015三氯卡班50016三氯生150017溴氯芬150018硫柳汞钠30004仪器和设备4.1高效液相色谱仪，二级管阵列检测器。 4.2超声波清洗器。 4.30.22?m滤膜。 4.4离心机，12000r/min。 4.5涡旋振荡器。 4.6天平。 5分析步骤5.1混合标准系列溶液的制备取混合标准储备溶液（3.8），用甲醇稀释得混合标准系列溶液，各组分标准系列溶液浓度见表3，混合标准系列溶液现用现配。 12表3水杨酸等18种组分混合标准系列溶液浓度名称混合标准系列溶液浓度（ug/mL）水杨酸250100502551山梨酸50xx510.2苯氧异丙醇50xx510.22,6-二氯苯甲醇500xx0050102苯甲酸甲酯10040xx20.4碘丙炔醇丁基氨甲酸酯1500600300150306对氯间甲酚125502512.52.50.52,4-二氯苯甲醇500xx0050102邻苯基苯6邻伞花烃-5-6氯二甲酚500xx0050102氯咪巴唑500xx0050102苄氯6吡罗克酮乙醇胺盐1250500250125255三氯卡班50xx510.2三氯6溴氯6硫柳汞钠300120603061.2注硫柳汞钠因与水杨酸发生螯合作用，故硫柳汞钠单独配制标准系列溶液单独测定。 硫柳汞钠需与2,6-二氯苯甲醇、苯甲酸甲酯完全分离。 5.2样品处理准确称取样品1.0g，精确至0.001g，置于具塞比色管中，加入甲醇8mL，涡旋振荡30s，使试样与提取溶剂充分混匀，超声提取20min（工作频率2043KHz，200W），用甲醇定容至10mL，摇匀，以10000r/min离心5min。 取上清液经0.22m滤膜过滤，滤液作为试样溶液备用。 当样品中18种组分的含量超过标准曲线范围时，应对样品进行适当稀释并选择合适的标准曲线范围进行测定。 135.3色谱参考条件色谱柱Kromasil C18柱（5m，4.6250mm），或等效色谱柱。 流动相溶液A磷酸二氢钠溶液(0.025mol/L，pH=3.80，0.02mmol/L EDTA-2Na)（3.6），溶液B甲醇（3.2），梯度洗脱程序见表4表4梯度洗脱time（min）A(%)B(%)0.00554510.0554527.0307042.0158549.0158550.0554555.05545流速1.0mL/min；检测波长水杨酸、山梨酸、苯氧异丙醇、邻伞花烃-5-醇、氯二甲酚、三氯卡班、三氯生的测定可采用280nm，2,6-二氯苯甲醇、苯甲酸甲酯、碘丙炔醇丁基氨甲酸酯、对氯间甲酚、2,4-二氯苯甲醇、邻苯基苯酚、氯咪巴唑、苄氯酚、溴氯芬、硫柳汞钠的测定可采用230nm，吡罗克酮乙醇胺盐的测定可采用300nm。 柱温30；进样量10L；5.4测定在“5.3”色谱条件下，取混合标准系列溶液（5.1）分别进样，进行色谱分析，以标准系列溶液浓度为横坐标，峰面积为纵坐标，绘制标准曲线。 取“5.2”项下的待测溶液进样，进行色谱分析，根据保留时间和紫外光谱图定性，测得峰面积，根据标准曲线得到待测溶液中各测定组分的浓度，按“6”计算样品中各测定组分的含量。 6分析结果的表述6.1计算mD V?式中样品中水杨酸等18种组分的含量，g/g；试样溶液中水杨酸等18种组分的浓度，g/mL；V样品定容体积，mL；14m样品取样量，g。 D稀释倍数（如未稀释则为1）。 在重复性条件下获得的两次独立测试结果的绝对差值不得超过算术平均值的10%。 6.2回收率和精密度多家实验室验证在定量下限浓度附近回收率为80.1%115.0%，相对标准偏差小于8.9%；其他浓度回收率为81.6%114.6%，相对标准偏差小于6.4%。 7图谱min051015202530354045mAU050010001500200025003000DAD1B,Sig=280,4Ref=off(防腐剂课题G2-ST7.D)4.353-110.004-217.195-330.722-1031.111-1143.201-1543.535-16min051015202530354045mAU050010001500200025003000DAD1D,Sig=230,4Ref=off(防腐剂课题G2-ST7.D)19.068-421.92222.430-524.376-626.303-727.911-829.581-933.555-1238.430-1346.696-17min051015202530354045mAU050010001500200025003000DAD1E,Sig=300,4Ref=off(防腐剂课题G2-ST7.D)39.249-14min051015202530354045mAU0100xx00400DAD1D,Sig=230,4Ref=off(JING-51FFJ-GROUP22018-01-05358S18.D)20.320-S18图1标准溶液HPLC参考色谱图（1.水杨酸，2.山梨酸，3.苯氧异丙醇，4.2,6-二氯苯甲醇，5.苯甲酸甲酯，6.碘丙炔醇丁基氨甲酸酯，7.对氯间甲酚，8.2,4-二氯苯甲醇，9.邻苯基苯酚，10.邻伞花烃-5-醇，11氯二甲酚.，12.氯咪巴唑，13.苄氯酚，14.吡罗克酮乙醇胺盐，15.三氯卡班，16.三氯生，17.溴氯芬，18.硫柳汞钠）15附录B标准品信息表序号标准品分子量（Mw）纯度CAS No分子式1水杨酸138.1299%69-72-7C7H6O32山梨酸112.1399.5%110-44-1C6H8O23苯氧异丙醇152.1998%770-35-4C9H12O242,6-二氯苯甲醇177.0399%15258-73-8C7H6OCl25苯甲酸甲酯136.1599.5%93-58-3C8H8O26碘丙炔醇丁基氨甲酸酯281.0997%55406-53-6C8H12INO27对氯间甲酚142.5899%59-50-7C7H7ClO82,4-二氯苯甲醇177.0399%1777-82-8C7H6OCl29邻苯基苯酚170.2198%90-43-7C12H10O10邻伞花烃-5-醇150.2299%39660-61-2C10H14O11氯二甲酚156.6199%88-04-0C8H9ClO12氯咪巴唑292.7698%38083-17-9C15H17ClN2O213苄氯酚218.6895%120-32-1C7H7Cl14吡罗克酮乙醇胺盐298.4297%68890-66-4C16H30N2O315三氯卡班315.5898%101-20-2C13H9C l3N2O16三氯生289.5497%3380-34-5C12H7C l3O217溴氯芬426.9295%15435-29-7C13H8Br2Cl2O218硫柳汞钠404.8197%54-64-8C9H9HgNaO2S16（三）吡硫鎓锌等8种组分1范围本方法规定了高效液相色谱法测定化妆品中吡硫鎓锌等8种组分的含量。 本方法适用于液态水基类、膏霜乳液类、凝胶类、液态油基类、粉类化妆品中吡硫鎓锌等8种组分含量的测定。 本方法所指的8种组分包括吡硫鎓锌、二羟乙磺酸己脒定、氯己定、烷基（C12-C22）三甲基溴化铵（十二烷基三甲基溴化铵）、十二烷基二甲基苄基铵、苄索氯铵、十四烷基二甲基苄基氯化铵、十六烷基二甲基苄基氯化铵。 2方法提要样品经提取溶剂提取后，经高效液相色谱仪分离，二级管阵列检测器检测，采用保留时间和光谱扫描图定性，峰面积定量，以标准曲线法计算含量。 本方法对8种组分的检出限、定量限和取样量为1g时的最低检出浓度，最低定量浓度见表1。 表18种组分的检出限、定量限、检出浓度和最低定量浓度序号组分名称检出限（ng）定量限（ng）最低检出浓度（%）最低定量浓度（%）1吡硫鎓锌10400.00100.00402二羟乙磺酸己脒定（以己脒定计）10200.00100.00203氯己定10300.00100.00304烷基（C12-C22）三甲基溴化铵（以十二烷基三甲基溴化铵计）1504000.01500.04005十二烷基二甲基苄基氯化铵401000.00400.01006苄索氯铵401000.00400.01007十四烷基二甲基苄基氯化铵401000.00400.01008十六烷基二甲基苄基氯化铵401000.00400.01003试剂和材料除另有规定外，试剂均为分析纯，水为GB/T6682规定的一级水。 3.1甲醇，色谱纯。 3.2乙腈，色谱纯。 173.3甲酸色谱纯。 3.4三氟乙酸（CF3COOH）色谱纯。 3.5乙二胺四乙酸二钠（EDTA-2Na）试剂纯，分子量336.21。 3.6正己烷色谱纯。 3.7二甲亚砜色谱纯3.8三氟乙酸溶液（0.1%）准确量取三氟乙酸（3.4）1mL，准确称取乙二胺四乙酸二钠（3.5）0.0067g（精确到0.0001g），用水稀释并定容至1000mL,摇匀。 3.9二甲亚砜乙腈溶液准确量取二甲亚砜（3.7）20mL，加乙腈定容至100mL，摇匀即得。 3.10甲酸溶液（1%）准确量取甲酸（3.3）10mL，用水定容至1000mL,摇匀。 3.11提取溶剂准确量取1%甲酸溶液（3.10）500mL，准确加入500mL甲醇（3.1），摇匀，即得。 3.12单标标准储备溶液精密称取吡硫鎓锌40mg，置于20mL容量瓶中，加二甲亚砜乙腈溶液（3.9）溶解并定容至刻度，摇匀，制得吡硫鎓锌2mg/mL标准储备溶液。 精密称取另7种组分标准品各500mg（精确到0.0001g），分别置于20mL容量瓶中，用甲醇溶解并定容至刻度，摇匀，制得浓度均为25mg/mL的单标标准储备溶液。 3.13混合标准储备溶液精密吸取8种组分标准储备溶液适量，用甲醇稀释得混合标准储备溶液，各组分浓度见表2。 表2吡硫鎓锌等8种组分混合标准储备溶液浓度序号中文名混合储备液浓度（ug/mL）1吡硫鎓锌640.02二羟乙磺酸己脒定（以己脒定计）467.43氯己定5004烷基（C12-C22）三甲基溴化铵（以十二烷基三甲基溴化铵计）70005十二烷基二甲基苄基氯化铵20006苄索氯铵20007十四烷基二甲基苄基氯化铵20008十六烷基二甲基苄基氯化铵20004仪器和设备4.1高效液相色谱仪，二级管阵列检测器。 4.2超声波清洗器。 184.30.22?m滤膜。 4.4离心机，12000r/min。 4.5涡旋振荡器。 4.6天平。 5分析步骤5.1混合标准系列溶液的制备取混合标准储备溶液（3.13），用提取溶剂（3.11）稀释得混合标准系列溶液。 混合标准系列溶液现用现配。 表3吡硫鎓锌等8种组分混合标准系列溶液浓度名称混合标准系列溶液浓度（ug/mL）吡硫鎓锌12864321684二羟乙磺酸己脒定（以己脒定计）93.546.723.411.75.82.9氯己定100502512.56.33.1烷基（C12-C22）三甲基溴化铵（以十二烷基三甲基溴化铵计）140070035017587.543.8十二烷基二甲基苄基氯化铵400xx00502512.5苄索氯铵400xx00502512.5十四烷基二甲基苄基氯化铵400xx00502512.5十六烷基二甲基苄基氯化铵400xx00502512.55.2样品处理准确称取样品1.0g，精确至0.001g，置于具塞比色管中，加入提取溶剂（3.11）8mL，涡旋振荡30s，使试样与提取溶剂充分混匀，超声提取30min（工作频率2043KHz，200W），用提取溶剂（3.11）定容至10mL，摇匀，再加入正己烷（3.6）2mL，涡旋振荡60s，以10000r/min离心5min。 弃去上层正己烷层，取下层溶液经0.22m滤膜过滤，滤液作为试样溶液备用。 当样品中8种组分的含量超过标准曲线范围时，应对样品进行适当稀释并选择合适的标准曲线范围进行测定。 5.3色谱参考条件色谱柱Dr.Maisch GmbHExsil AvantiBDS Quattro柱（5m，4.6250mm），或等效色谱柱。 19流动相溶液A三氟乙酸溶液（3.8），溶液B乙腈（3.2），梯度洗脱程序见表4表4梯度洗脱time（min）A(%)B(%)0.00901040.0109043.0109043.1901048.09010流速1.0mL/min；检测波长吡硫鎓锌、二羟乙磺酸己脒定、氯己定的测定可采用270nm，其余化合物的测定可采用210nm，柱温30；进样量10L；5.4测定在“5.3”色谱条件下，取混合标准系列溶液（5.1）分别进样，进行色谱分析，以标准系列溶液浓度为横坐标，峰面积为纵坐标，绘制标准曲线。 取“5.2”项下的待测溶液进样，进行色谱分析，根据保留时间和紫外光谱图定性，测得峰面积，根据标准曲线得到待测溶液中各测定组分的浓度，按“6”计算样品中各测定组分的含量。 6分析结果的表述6.1计算mD V?式中样品中吡硫鎓锌等8种组分的含量，g/g；试样溶液中吡硫鎓锌等8种组分的浓度，g/mL；V样品定容体积，mL；m样品取样量，g。 D稀释倍数（如未稀释则为1）。 在重复性条件下获得的两次独立测试结果的绝对差值不得超过算术平均值的10%。 6.2回收率和精密度多家实验室验证在定量下限浓度附近回收率为84.7%128.2%，相对标准偏差小于5.4%；其他浓度回收率为83.3%115%，相对标准偏差小于5.3%。 207图谱min51015202530354045mAU-400-2000xx00600800DAD1B,Sig=270,4Ref=off(防腐剂课题G3-ST6.D)6.948-18.196-212.339-3min51015202530354045mAU-400-2000xx00600800DAD1A,Sig=210,4Ref=off(防腐剂课题G3-ST6.D)17.482-420.533-520.884-623.056-725.354-8图1标准溶液HPLC参考色谱图（1.吡硫鎓锌，2.二羟乙磺酸己脒定，3.氯己定，4.十二烷基三甲基溴化铵，5.十二烷基二甲基苄基氯化铵，6.苄索氯铵，7.十四烷基二甲基苄基氯化铵，8.十六烷基二甲基苄基氯化铵）21附录C标准品信息表序号标准品分子量（Mw）标准品纯度CAS No分子式1吡硫鎓锌317.796%13463-41-7C10H8N2O2S2Zn2二羟乙磺酸己脒定（以己脒定计）606.7195%659-40-5(3811-75-4)C22H32N4O6S（C20H26N4O2）3氯己定505.4598%55-56-1C22H30Cl2N104十二烷基三甲基溴化铵308.3495%1119-94-4C15H34NBr5十二烷基二甲基苄基氯化铵339.9995%139-07-1C21H38NCl6苄索氯铵448.0897%121-54-0C27H42ClNO27十四烷基二甲基苄基氯化铵368.0495%139-08-2C23H42NCl8十六烷基二甲基苄基氯化铵396.0995%122-18-9C25H46NCl22（四）聚氨丙基双胍1范围本方法规定了采用高效液相色谱法测定化妆品中聚氨丙基双胍的含量。 本方法适用于液态水基类、膏霜乳液类、凝胶类、液态油基类、粉类化妆品中聚氨丙基双胍含量的测定。 2方法提要以混合溶剂提取化妆品中聚氨丙基双胍，用高效液相色谱仪分离，二级阵列管检测器检测，采用保留时间和光谱扫描图定性，峰面积定量，以标准曲线法计算含量。 本方法对聚氨丙基双胍的检出限为30ng，定量限为100ng，如以取样1g计，最低检出浓度为0.00167%，最低定量浓度为0.0050%。 3试剂和材料除另有规定外，试剂均为分析纯，水为GB/T6682规定的一级水。 3.1甲醇，色谱纯。 3.2乙腈，色谱纯。 3.3冰乙酸，色谱纯。 3.4磷酸（85%），色谱纯。 3.5乙酸铵，色谱纯，M=77.083g/mol。 3.6磷酸二氢铵，分析纯，M=115.03g/mol。 3.7正己烷，分析纯。 3.80.02mol/L乙酸铵（pH=4.8）准确称取乙酸铵（3.4）1.54g，加水至1000mL，充分混匀，用冰乙酸调pH=4.8。 3.90.1mol/L磷酸二氢铵水溶液（pH=2.45）准确称取磷酸二氢铵（3.5）11.5g，加水至1000mL，用磷酸（3.4）调pH至2.45，混匀。 3.10提取溶剂准确量取0.1mol/L磷酸二氢铵水溶液（pH=2.45）（3.9）900mL，再加入100mL乙腈（3.2），混匀。 3.11标准品，聚氨丙基双胍，纯度95%。 3.12标准储备溶液（=25g/L）准确称取聚氨丙基双胍的标准品500mg，精确到0.0001g，分别置于20mL容量瓶中，用提取溶剂（3.10）溶解并定容至刻度，摇匀。 234仪器和设备4.1高效液相色谱仪。 4.2超声波清洗器。 4.30.22?m滤膜。 4.4离心机，10000r/min。 4.5涡旋振荡器。 4.6天平。 5分析步骤5.1混合标准系列溶液制备取混合标准储备溶液（3.12）适量，用提取溶剂（3.10）稀释得5g/mL、10g/mL、50g/mL、100g/mL、500g/mL、1000g/mL系列浓度标准溶液。 标准溶液现用现配。 5.2样品处理准确称取样品1.0g，精确至0.001g，置于具塞比色管中，加入提取溶剂（3.10）8mL（涡旋振荡30s，使试样与提取溶剂（3.10）充分混匀，超声提取20min（工作频率2043KHz，200W），用提取溶剂（3.10）定容至10mL，摇匀，再加入2mL正己烷（3.7），涡旋30s，以10000r/min离心5min，弃去正己烷层，取下层溶液经0.22m滤膜过滤，滤液作为试样溶液备用。 必要时用适量提取溶剂（3.10）稀释。 5.3参考色谱条件色谱柱Agilent ZorbaxSB-C18柱（5m，4.6250mm），或等效色谱柱。 流动相溶液A0.02mol/L乙酸铵（pH=4.8）（3.8），溶液B乙腈溶液（3.2），等度洗脱（A+B=60+40）。 检测波长236nm流速1.0mL/min；柱温30；进样量20L；5.4测定在“5.3”色谱条件下，取混合标准系列溶液（5.1）分别进样，进行色谱分析，以标准系列溶液浓度为横坐标，峰面积为纵坐标，绘制标准曲线。 取“5.2”项下的待测溶液进样，进行色谱分析，根据保留时间和紫外光谱图定性，测得24峰面积，根据标准曲线得到待测溶液中聚氨丙基双胍的浓度，按“6”计算样品中聚氨丙基双胍的含量。 6分析结果的表述6.1计算mD V?式中样品中聚氨丙基双胍的含量，g/g；试样溶液中聚氨丙基双胍的浓度，g/mL；V样品定容体积，mL；m样品取样量，g。 D稀释倍数（如未稀释则为1）。 在重复性条件下获得的两次独立测试结果的绝对差值不得超过算术平均值的10%。 6.2回收率和精密度多家实验室验证在定量下限浓度附近回收率为85.8%112.8%，相对标准偏差小于4.4%；其他浓度回收率为90%112.1%，相对标准偏差小于3.6%。 7谱图图1聚氨丙基双胍标准溶液HPLC参考色谱图25附录D标准品信息表标准品分子量纯度CAS No分子式聚氨丙基双胍115.0695%133029-32-0（C5H14N6）n26（五）海克替啶1范围本方法规定了采用高效液相色谱法测定化妆品中海克替啶的含量。 本方法适用于液态水基类、膏霜乳液类、凝胶类、液态油基类、粉类化妆品中海克替啶含量的测定。 2方法提要以混合溶剂提取化妆品中海克替啶，用高效液相色谱仪分离，二级阵列管检测器检测，采用保留时间和光谱扫描图定性，峰面积定量，以标准曲线法计算含量。 本方法对海克替啶的检出限为30ng，定量限为100ng，如以取样1g计，最低检出浓度为0.0030%，最低定量浓度为0.0100%。 3试剂和材料除另有规定外，试剂均为分析纯，水为GB/T6682规定的一级水。 3.1甲醇，色谱纯。 3.2乙腈，色谱纯。 3.3磷酸（85%），色谱纯。 3.4磷酸氢二铵，色谱纯，M=132.06g/mol。 3.50.02mol/L磷酸氢二铵（pH=7.0）准确称取磷酸氢二铵2.64g，加水至1000mL，充分混匀，用磷酸调pH=7.0。 3.6标准品，海克替啶，纯度95%。 3.7标准储备溶液（=25g/L）准确称取海克替啶的标准品500mg，精确到0.0001g，置于20mL容量瓶中，用甲醇溶解并定容至刻度，摇匀。 4仪器和设备4.1高效液相色谱仪。 4.2超声波清洗器。 4.30.22?m滤膜。 4.4离心机，10000r/min。 4.5涡旋振荡器。 4.6天平。 275分析步骤5.1混合标准系列溶液制备取标准储备溶液（3.7）适量，用甲醇（3.1）稀释得10g/mL、50g/mL、100g/mL、500g/mL、1000g/mL系列浓度标准溶液。 标准溶液现用现配。 5.2样品处理准确称取样品1.0g，精确至0.001g，置于具塞比色管中，加入甲醇（3.1）8mL（涡旋振荡30s，使试样与甲醇（3.1）充分混匀，超声提取20min（工作频率2043KHz，200W），用甲醇（3.1）定容至10mL，摇匀，以10000r/min离心5min。 取上清液经0.22m滤膜过滤，滤液作为试样溶液备用。 必要时用适量甲醇（3.1）稀释。 5.3参考色谱条件色谱柱Ahrom Xaqua（氰基）柱（5m，4.6250mm），或等效色谱柱。 流动相溶液A0.02mol/L磷酸氢二铵（pH=7.0）（3.5），溶液B乙腈溶液（3.2），等度洗脱（A+B=30+70）。 检测波长215nm流速1.0mL/min；柱温30；进样量10L；5.4测定在“5.3”色谱条件下，取混合标准系列溶液（5.1）分别进样，进行色谱分析，以标准系列溶液浓度为横坐标，峰面积为纵坐标，绘制标准曲线。 取“5.2”项下的待测溶液进样，进行色谱分析，根据保留时间和紫外光谱图定性，测得峰面积，根据标准曲线得到待测溶液中海克替啶的浓度，按“6”计算样品中海克替啶的含量。 6分析结果的表述6.1计算mD V?式中样品中海克替啶的含量，g/g；试样溶液中海克替啶的浓度，g/mL；V样品定容体积，mL；m样品取样量，g。 28D稀释倍数（如未稀释则为1）。 在重复性条件下获得的两次独立测试结果的绝对差值不得超过算术平均值的10%。 6.2回收率和精密度多家实验室验证在定量下限浓度附近回收率为88.8%113.0%，相对标准偏差小于3.6%；其他浓度回收率为76.0%103.0%，相对标准偏差小于3.5%。 7谱图图1海克替啶标准溶液HPLC参考色谱图29附录E标准品信息表标准品分子量纯度CAS No分子式海克替啶115.0695%133029-32-0（C5H14N6）n30（六）硼酸苯汞1范围本方法规定了采用高效液相色谱法测定化妆品中硼酸苯汞的含量。 本方法适用于液态水基类、膏霜乳液类、凝胶类、液态油基类、粉类化妆品中硼酸苯汞含量的测定。 2方法提要以混合溶剂提取化妆品中硼酸苯汞，用高效液相色谱仪分离，二级阵列管检测器检测，采用保留时间和光谱扫描图定性，峰面积定量，以标准曲线法计算含量。 本方法对硼酸苯汞的检出限为1.67ng，定量限为5ng，如以取样1g计，最低检出浓度为0.0003%，最低定量浓度为0.0010%。 3试剂和材料除另有规定外，试剂均为分析纯，水为GB/T6682规定的一级水。 3.1甲醇，色谱纯。 3.2乙腈，色谱纯。 3.3冰乙酸，色谱纯。 3.4标准品，硼酸苯汞，纯度95%。 3.5标准储备溶液（=1g/L）准确称取硼酸苯汞的标准品500mg，精确到0.0001g，分别置于20mL容量瓶中，用提取溶剂（3.9）溶解并定容至刻度，摇匀。 4仪器和设备4.1高效液相色谱仪。 4.2超声波清洗器。 4.30.22?m滤膜。 4.4离心机，10000r/min。 4.5涡旋振荡器。 4.6天平。 5分析步骤5.1混合标准系列溶液制备取混合标准储备溶液（3.5）适量，用甲醇（3.1）稀释得1g/mL、10g/mL、50g/mL、100g/mL、250g/mL、500g/mL系列浓度标准溶液。 标准溶液现用现配。 315.2样品处理准确称取样品1.0g，精确至0.001g，置于具塞比色管中，加入甲醇（3.1）8mL（涡旋振荡30s，使试样与提取溶剂（3.9）充分混匀，超声提取20min（工作频率2043KHz，200W），用甲醇（3.1）定容至10mL，摇匀，以10000r/min离心5min。 取上清液经0.22m滤膜过滤，滤液作为试样溶液备用。 必要时用适量甲醇（3.1）稀释。 5.3参考色谱条件色谱柱Merk HILIC色谱柱（5m，4.6100mm）或等效色谱柱。 流动相溶液A水，溶液B乙腈（3.2），等度洗脱（A+B=15+85）。 检测波长220nm流速1.0mL/min；柱温30；进样量5L；5.4测定在“5.3”色谱条件下，取混合标准系列溶液（5.1）分别进样，进行色谱分析，以标准系列溶液浓度为横坐标，峰面积为纵坐标，绘制标准曲线。 取“5.2”项下的待测溶液进样，进行色谱分析，根据保留时间和紫外光谱图定性，测得峰面积，根据标准曲线得到待测溶液中硼酸苯