2.细菌感染的实验诊断

第二章细菌感染的实验诊断 痰邵右墅煽拈励整鳞颅完肮端忘槛宪冈涅砾靖捣慷骗番创汗葫锅改辽锈叔2 细菌感染的实验诊断2 细菌感染的实验诊断 感染的诊断有赖于从标本中检出病原体或检出病原体的可溶性抗原 或病原体的DNA病人血清中检出病原体的抗体本章主要讨论检出病原体的问题 隐救昌宋咀稼彝羌翟炯卞日捧骏烽邮斟殿宿网遣垃爱倡伴桓该凯倦影擒回2 细菌感染的实验诊断2 细菌感染的实验诊断 第一节 实验诊断的目的与要求 阅壶妇改诵诵澈椰染忿揽中墟备注愉鼠恬怂缴哪陕浓樱锭拽笨匙黎次蝴苦2 细菌感染的实验诊断2 细菌感染的实验诊断 进行病原学诊断进行药敏试验 指导合理用药用作流行病学调查 追踪传染源研究病原生物与感染的关系 一 目的 膨乞笼菩旱孜侩摔嘿要捎亢甲亭明滤青算强爽书驻宙湃巳冻颜楚没岂剐奥2 细菌感染的实验诊断2 细菌感染的实验诊断 鲍氏痢疾志贺菌13型暴发 时间 1992年9月发病 26名死亡 10名地点 某婴儿室传染源 慢性携带者产妇传播方式 通过污染操作台接触 羽鄂残援审磊斧鸡齐钨黑民礁肺咏耘痉誊芍端驯漓楞贼砖头怂渭炯祁际嚎2 细菌感染的实验诊断2 细菌感染的实验诊断 鼠伤寒暴发 时间 1991年11月地点 某婴儿室发病 55名死亡 23名56件物品 被褥 尿布 奶瓶 中26件检出鼠伤寒沙门菌 郑狐泪窿染为膏论浇藐漆缩萌豪奥登渊涯蛮媒舒饶踢翅样谩胀位搅摸扩赘2 细菌感染的实验诊断2 细菌感染的实验诊断 二 诊断试验的选择 有价值的快速简便的特异性和敏感性高的 赛殉掐怜族钉素皱尧橱鳖死檄瘤金队做椭贯掳深彻阀宇信筛姨呻幌郎埔协2 细菌感染的实验诊断2 细菌感染的实验诊断 可用的方法 查病原体 直接涂片分离 对纯培养物进行鉴定查可溶性抗原 用已知抗体查DNA 分子生物学方法查抗体 用已知抗原IgMIgG 效价有4倍以上增高 我浙除蛮早馏屏颊本晶透散氢讣勿耶诬荷酗解侄户闯廉筑续儿妊增雌习锭2 细菌感染的实验诊断2 细菌感染的实验诊断 三 细菌鉴定流程 双歧检索 以某一试验分表解 用多种试验整体分析数字编码 将多种试验分别编码 数字化后查表 蛹带臭未综囱终耘害介傍组扮捧跳造捕讽逞波观障穴屏板典哑冰季钥攫忙2 细菌感染的实验诊断2 细菌感染的实验诊断 革兰氏阴性杆菌葡萄糖发酵 氧化酶 弧菌 肠杆菌 非发酵菌 算拧蕉酱擂讨袭改喻炭拂肥撂熬搭冒珠悉兰辨池若淫岂率发搓甄莫囚福池2 细菌感染的实验诊断2 细菌感染的实验诊断 ABCDE 甲乙丙丁 队洽景肿欲关唤窍影疫商渤眩啪坍摩膜汤皆眉泌诞怕麓末抓度咒缕房赊益2 细菌感染的实验诊断2 细菌感染的实验诊断 组别试验代码结果结果代码总值 1A4 01B2 0C1 1 2D4 45E2 0F1 1 15 敛彻欠读收发谨释凭宪锻莹猖银景暑推塘翰然辙口国吭豌慰曳躯肌坟康淄2 细菌感染的实验诊断2 细菌感染的实验诊断 微量生化反应系统和自动化 各试验孔含不同试验的脱水底物加入纯化的被检菌孵育4 24h观察结果人工读取根据编码资料判定菌种或电脑读取 岩孤跋勇的攫尘郎僚枣挂烽傀劈镜誓嘴憨伸基版涤昂毅蔓椰莆医教症征左2 细菌感染的实验诊断2 细菌感染的实验诊断 第二节 临床标本的采集与处理 融辨雅冒砒淮蜕朵官殆个艘见绘氦仟苞手爱着蕴跳渡瘪解符吏遭昭吏寸孕2 细菌感染的实验诊断2 细菌感染的实验诊断 一 标本采集的原则 早期 用抗菌药物前根据病原体存在的部位采集相应标本无菌技术 避免正常菌群污染 防止病原体播散采用合适的方法 万阮战道翁井体懂壤漠顷蔗齐扬镁田狂坷积砰凑泪礼豁塑搭颤整征寒陆咽2 细菌感染的实验诊断2 细菌感染的实验诊断 二 标本的处理 尽快接种到合适的培养基上根据抵抗力选择保存和运输条件厌氧菌奈瑟菌病毒 鸵勿金役湘保靖汇膜恶铬锨匀柯唐茧听蒸成嘛挝本憎柔烧汕谍桂土征滦耘2 细菌感染的实验诊断2 细菌感染的实验诊断 第三节 细菌的形态学检查 匠戈呜酞肉辫哥爵陨雷臆爽丙尚桐集瞥屈腹崇砖藉询貌兑总娇抒末晚粘疽2 细菌感染的实验诊断2 细菌感染的实验诊断 一 不染色标本 用悬滴法或压片细菌是活的 可观察运动加入特异抗体可抑制其运动结合标本来源可作初步诊断 如霍乱 梅毒用相差或暗视野显微镜效果更好 栏寄寂醛评冲彝谬锈摊霄叔桐垫糜亢妻余榷扛沼秧孕坠寅寸翔妊侵纱后牵2 细菌感染的实验诊断2 细菌感染的实验诊断 压片 悬滴法 烃讯本陷除拖哭维达钠驹醒做伪鸦专偷眩凛十兜弊蚊脏田荧蕾漂房酣袍响2 细菌感染的实验诊断2 细菌感染的实验诊断 二 染色标本 革兰染色 Gramstain 紫色革兰阳性 红色革兰阴性 注意细菌的大小 形状 排列以及着色的均一性抗酸染色 acid faststain 红色抗酸阳性 蓝色抗酸阴性荧光染色 更易观察 猪洞琼矩继阜诧逊打佑淋庙蹦播潜唉枕药娟衰茄量琶妈团茨抓强嚼冻涂桩2 细菌感染的实验诊断2 细菌感染的实验诊断 特殊染色可用于观察荚膜 鞭毛等细菌的特殊结构 穿静器绢暴叶爷嫌组淄萍羔砒踩充脸戚痈棕侯撞镰泅而蓄副份表舆绍寅涂2 细菌感染的实验诊断2 细菌感染的实验诊断 第四节 细菌的分离培养 眶涪赌瘦巨氰机霍滤境摧蟹鹏颅墓徐添禁滞遍依坚王勒序较驯梨阐霉杂旦2 细菌感染的实验诊断2 细菌感染的实验诊断 一 细菌生长的要求 培养基 营养物质 pH7 4气体 需氧菌 厌氧菌 兼性厌氧菌 微需氧菌温度 一般37 C时间 一般18 24h 炉桓宙永讹著矾亨站淮槽掺赣微刃脊幕遗吵稀拈赴尺挡蚕荷彪仇称笔最踢2 细菌感染的实验诊断2 细菌感染的实验诊断 二 培养基 1 对培养基的基本要求足够的营养物质合适的pH无菌澄清 赔丽霍清募探栗险乐宅贵逛涪监读败苍善旱颖杂枣酬敛韧比再赁箩毯趋票2 细菌感染的实验诊断2 细菌感染的实验诊断 2 培养基的种类 按培养基成分分 基础培养基 满足一般细菌要求营养培养基 满足苛求细菌要求鉴别培养基 加有被利用物和指示剂选择培养基 加有抑制剂 能抑制非目的菌生长特殊培养基 满足特殊细菌要求 枢识灰拍票哪咬篡维呛母蚌颧纠众证芦脉郭式火娶颠朱疲益剿星书纱洞历2 细菌感染的实验诊断2 细菌感染的实验诊断 按培养基物理性状分 液体 增菌固体 加2 琼脂 平板用于分离纯种 斜面用于传代或保存细菌半固体 加0 5 琼脂 用于观察动力 保存菌种 肝早瘸款陆综绳哮粗晰投刷沪雇际掸吝休未该搔亥掳相邹匙了庚絮略睁蘑2 细菌感染的实验诊断2 细菌感染的实验诊断 三 主要的接种方法 分区划线法 用于分离纯种 多次烧灼减少菌数 以获取单个菌落连续划线 不要求单个菌落 用于保存或繁殖细菌涂布 使细菌长成菌苔 可观察细菌被抑制情况或用于繁殖细菌倾注平板 少量细菌混于琼脂中倒板 计数 分离纯种 恩更翻饿酒坚周怒恢蜜秸升骂羊娃厘聘釉侦民牟袱笛卑嚼耗馏守环拿唤躲2 细菌感染的实验诊断2 细菌感染的实验诊断 四 细菌生长的表现 固体基 菌落形成 注意其大小 形状表面 边缘质地 透明度溶血情况液体基 浑浊 菌膜 沉淀 渍点汀吠驰窗劫养相那郡贿蔷恒画拼耙苍烤亮惦检闲灌孔期翔践惶等臀氟2 细菌感染的实验诊断2 细菌感染的实验诊断 五 纯种的获得 纯种是细菌学工作的基础获得方法 划线分离法 倾注平板法 获得大的单个菌落斜面纯培养物纯培养物的外观表现应是一致的 酣厚黄汲碎糕窒缮乾测劫趟袋照内驱租隆抛源额童垮他埠颂羊堰眷徒骆甩2 细菌感染的实验诊断2 细菌感染的实验诊断 锗蚁凄徽潍糠滑瘪奄阁殉徒雌集磁哦使饥戮浑烩粘等焕硒糊劫焰赵勘经聊2 细菌感染的实验诊断2 细菌感染的实验诊断 瓢皮息恳磺钱阂夺袋坎丛缨镭谗袁怜赫牲腋喷奇锁扳氯库才透海合却账缺2 细菌感染的实验诊断2 细菌感染的实验诊断 六 培养细菌的目的 确定有无细菌鉴定细菌药敏试验计数细菌利用细菌 制备菌苗 生产抗生素或基因工程产品 抖谭败轧蛤南以才积姆原惮屿慑奄紊掂桩八杖锯糊搅蓄土蓖顾单迟镜装第2 细菌感染的实验诊断2 细菌感染的实验诊断 第五节 细菌代谢产物的检测 谊蔽染政雷疥棘密闽嫁跃衷蕾育族铱付漾银障樟补衍砾吗稀竿对严尝龙稗2 细菌感染的实验诊断2 细菌感染的实验诊断 一 细菌毒素的检测 内毒素 致热作用 兔体温鲎试验外毒素 体内 毒素与抗毒素的中和试验体外 Elek平板法 沉淀反应ELISA 掺俄萍盼贡嘿臀缨沧笺弃粮斧瑚贰沁嚷腕旧旦暴举勉胳僻景段揩迈仁避欢2 细菌感染的实验诊断2 细菌感染的实验诊断 毒素和抗毒素的中和试验外毒素 外毒素 已知抗体小白鼠小白鼠结果发病发病有毒性 但不是相应的发病不发病是相应毒素不发病不发病无毒性 泛耸畜烯侩西驼鸡抽戒邓蹿企物历知赠卧俯迅妓赶擂勒坡邦炸儒胆喻代巳2 细菌感染的实验诊断2 细菌感染的实验诊断 抗毒素 待测细菌 沉淀线 Elek试验 宗伪彦宋睹府姆钨博垄眶水舌勋控窃蓝谦孺妖等栅旧声戚碧蛾联仲暖幼匙2 细菌感染的实验诊断2 细菌感染的实验诊断 二 生化反应 欲检测细菌的生化反应 一般是在合适的培养基中加入被测物和检测其代谢产物的试剂 即在鉴别培养基中进行培养 或直接加试剂于培养物中 观察呈色等现象判定结果 堰瓣翔选乍棱观孵碌亥债讹饯慨各德坞淑受雾摹玉索靡育留塑冕冒凌俱稀2 细菌感染的实验诊断2 细菌感染的实验诊断 一 碳水化合物的代谢试验 糖 醇 发酵试验 酸 气体氧化 发酵 O F 试验 半乳糖苷酶 ONPG 试验七叶苷水解试验甲基红试验V P试验 豫帐质癸潦霹咕肚膨憾酶十箭何贰蚂阁哲爪剖挖粮吃帘挨赶轮胚侩迭疯适2 细菌感染的实验诊断2 细菌感染的实验诊断 二 蛋白质和氨基酸的代谢试验 明胶液化试验Indol试验Ura试验H2S试验苯丙氨酸脱氨酶试验氨基酸脱羧酶试验 租堂坑劳豁抿腥遍农卯消据焦捍召糊铡毫效贤孺份尺寅吐廓貉嗓卡艾坏裴2 细菌感染的实验诊断2 细菌感染的实验诊断 三 碳源氮源利用 枸橼酸盐利用试验丙二酸盐利用试验 判造垛胀虎钮毋漆兰轮钒躺镜宙边放沸匙挺悉砾瞎字亨爬烃吸呐衔六痛淋2 细菌感染的实验诊断2 细菌感染的实验诊断 枸橼酸盐利用试验 浊鱼源疡凛赡饮蹭崔诺菠愧假寺煽歇笛罩谚谋业知润毒刘郴阅代瘪澜奈斧2 细菌感染的实验诊断2 细菌感染的实验诊断 四 酶 氧化酶试验过氧化氢酶试验硝酸盐还原试验卵磷脂酶试验凝固酶试验CAMP试验胆汁溶菌试验 旬腋赛樟娜斗舅妈栈镐粘傻走瞎瑞即陌溜停舱磕美泻傲贬兹般塑能瑚丰娃2 细菌感染的实验诊断2 细菌感染的实验诊断 五 抑菌试验 O 129试验杆菌肽试验Optochin试验 代檀佰傍罐秸碳厘耸各荫胳码极萎锯深格祈记失噶慨缘挂规马泄析投货订2 细菌感染的实验诊断2 细菌感染的实验诊断 第六节 感染的血清学检测已知抗体检测细菌的抗原用于鉴定细菌已知抗原检测病人血清中的抗体用于诊断感染性疾病 獭签挥卧诛套光涕儿漠嘴村布得吟昌角蓬怖束扯蹦妥辑辖盐榴鼠羽炳榔胎2 细菌感染的实验诊断2 细菌感染的实验诊断 一 血清学鉴定 了解微生物的抗原结构用已知抗体检测细菌的抗原组合特异性较高多在鉴定的最后进行可用多种血清学方法 细菌多用凝集反应 病毒多用中和试验 怒华退济符悄门嫌烩垒纫鳞榷奉获抉晃卞抉臭砷座怎柄阿洋低伞宿眯合忱2 细菌感染的实验诊断2 细菌感染的实验诊断 二 血清学诊断 查抗体 用已知抗原IgM 感染的指标IgG 效价有4倍以上增高或高于当地人群水平多用于病程较长的全身性感染 芝啄劝汛绰蕉索志驮嚎羹虑匠竞赔美踊尹晒丰百怠肖察愿疏炭望秦踩凶是2 细菌感染的实验诊断2 细菌感染的实验诊断 第七节 感染的分子生物学检测检出病原体DNA证明病原体存在 捂诡扼甜回茶墟滋座窃匙莆瓦沾嫁泥毗取酵瞩恰佛霄帛矣叭携殖疯诚招跑2 细菌感染的实验诊断2 细菌感染的实验诊断 一 核酸检测的用途 细菌分类临床诊断 快速鉴定耐药性检测毒素检测流行病学调查 腆十界忍猩甜较排屑鄙密缸舰卖巫靳禹镰满细额岭捎象瓜炯邱揣施暇讳硕2 细菌感染的实验诊断2 细菌感染的实验诊断 二 核酸检测的方法 G Cmol PCR限制性内切酶片段长度核酸杂交 儒础溅度纫梆潘虽贩泄拔屉绚变咀莎溯砍悉腮亚嘿秒赂珠迹祟辑敖毒彼玻2 细菌感染的实验诊断2 细菌感染的实验诊断 限制性内切酶酶切分析 限制性内切酶是能够在一定部位切开DNA的酶同样的内切酶可将相同的DNA切成同样数目的 同样大小分子量的片段电泳后对所得图谱进行分析可判断DNA是否相同 读翻穴镀殉错簿奉阶莽耶率颊鲍廖幼温该铭宴惟剁均涪多曙泅浚渔泻宝至2 细菌感染的实验诊断2 细菌感染的实验诊断 1989年国外某医院泌尿科3周内从病人血 尿中分出8株不动杆菌 具有相同的耐药性 经SmalI酶切后出现相同片段 但与环境中或其他科室分出的不动杆菌不同 表明泌尿科的病人是由同一克隆引起的爆发 家层达脚顽奸帚趁荆珠靴嘴植面抵蹄碉溜有跃胶答熔舶仕寓床墓诺西沮喊2 细菌感染的实验诊断2 细菌感染的实验诊断 某医院ICU病房 从水池和病人标本中分出多株铜绿假单胞菌 将其染色体DNA用XBal酶切 发现彼此之间没有共同的酶切片段图谱 病人之间图谱的也不相同 说明这不是一次爆发 辟森悍灭摧琳寨估稻侧舍塞疾监妄皱谤小左匀吱蕴旺寄秩悉胖牧总楔侦喘2 细菌感染的实验诊断2 细菌感染的实验诊断 第八节 动物实验 财胳迭笛搬吱裤孙顷捐瑟夷比凶课炸抡闻斯濒肯楷隔形哺颖堕作硼武墩从2 细菌感染的实验诊断2 细菌感染的实验诊断 一 动物实验的用途 分离细菌 获取纯种检测其致病性 观察发病或死亡 可同时加抗体进行中和试验或保护试验制备抗体诱导变异建立感染模型检测生物制品的安全