L04094蔡少希

项目类别项目批准号BL04094附件3 华南农业大学大学生科技创新活动项目结题书项目名称： 水稻幼穗细胞分裂素峰的生理意义 申 请 人： 蔡少希 赵秀彩 所在院部： 生命科学学院 专业年级： 02生物技术（1） 联系电话：指导教师: 张东方 巫光宏 职称 实验师 副教授 立项日期： 二四 年 四 月 十 日 结题日期： 二六 年 三 月 十五日华南农业大学大学生科技创新活动项目指导中心 填 表 说 明 一、 填写结题报告书前，请先咨询指导教师或有关专业教师。申请书的各项内容要求实事求是，逐条认真填写。表达明确、严谨，一律要求用打印稿件。 二 、申请书为A4复印纸，于左侧装订成册。一式三份（至少一份原件），由指导教师和所在院（部）审查并签署意见后报大学生科技创新活动项目指导中心。三 、一级标题三号宋体加粗，用“一、二、三”标示；二级标题四号楷体加粗，用“（一）（二）（三）”标示；三级标题四号仿宋加粗，用“1、2、3”标示；四级标题四号仿宋，用“”标示。示例：一、XXXX课题立项与研究的目的意义（一）XXXX课题立项与研究的目的的意义1、XXXX课题立项与研究的目的意义XXXX课题立项与研究的目的意义四、如表格不够，可以加附页。一、简表项目简况项目名称水稻幼穗细胞分裂素峰的生理意义 项目类别 B、理科类；申请经费1500元起止年月2004.4.10项目组成员姓 名性别出生年月年级专业班级所在学院上学年综合测评分项目中的分工本人签字赵秀彩女1982年11月01生物技术3班生命科学学院82.16负责人蔡少希男1983.0702生物技术1生命科学学院67.92负责人林慧娜女1984.1003生物技术2生命科学学院77.34黄春暖女1984.0203生物科学2生命科学学院75.36指导教师情况姓名张东方 巫光宏性别男女学位职称实验师副教授研究方向水稻生理生化授课名称项目简介 本项目以华航1号和华航8号与原品种特籼粘13和粤香粘为材料，研究它们幼穗细胞分裂素峰与幼穗DNA、RNA、蛋白质和淀粉含量关系，从而找出细胞分裂素峰的生理意义。二、项目研究的内容与方法（一）项目研究的内容 通过对四个品种的水稻灌浆期籽粒的蛋白质和淀粉含量的测定来探索水稻幼穗细胞分裂素峰提前的生理意义。（二）研究的方法 1实验材料 华南农业大学空间诱变品种华航1号，华航8号和它们各自的原品种特籼占13与粤香占四个品种的水稻幼穗。2实验方法（1）蛋白质含量的测定1，称取新鲜材料100mg放入研钵中，加入1ml蒸馏水研成匀浆，转移到离心管中，再用4ml蒸馏水分次洗涤研钵，洗涤液收集在同一离心管中，放置3060分钟以充分提取，然后3500rpm离心20min，弃去沉淀，上清液转入10ml量筒中，以蒸馏水定容至6ml。2，测定：（1）01000ug/ml标准曲线的绘制：取6支试管，按下表数据配制01000ug/ml牛血清白蛋白溶液各1ml。 管 号 试 剂1 2 3 4 5 61000ug/ml牛血清白蛋白溶液（ml）0 0.2 0.4 0.6 0.8 1.0 蒸馏水（ml）1.0 0. 8 0.6 0.4 0.2 0蛋白质浓度（ug/ml）0 200 400 600 800 1000准确吸取所配各管溶液0.1ml，分别放入10ml具塞试管中，再加入5ml考马斯亮蓝G250蛋白试剂，盖塞，将试管中溶液纵向倒转混合，放置2min后用10mm光径的比色杯在595nm下比色，作出标准曲线。（2）吸取提取液0.1ml放入具塞刻度试管中，加入5ml考马斯亮蓝G250蛋白试剂，充分混合，放置2min后用10mm光径比色杯在595nm下比色，记录消光值，并通过标准曲线查得每毫升溶液中蛋白质的含量，以蒸馏水作空白样。（2）淀粉含量的测定1，从试验田中取回样品后，110烘箱烘一小时，然后置于70烘箱过夜，称重，磨碎，称取50mg，倒入10ml离心管中，加入80乙醇6ml，置于80水浴中不断搅拌40分钟，8000rpm离心15分钟。2，上步离心后的沉淀加蒸馏水3ml，放入100水浴中，糊化15分钟，冷却后在冰水浴中加入72的冷高氯酸2ml，搅拌40分钟，3500rpm离心10分钟，上清液定容10ml，用于淀粉含量测定。3，淀粉测定：2分样品各2ml及0，10，20，30，40，50ug/ml的葡萄糖溶液各2ml做标准曲线，置于8支试管中，置于冰水浴中，各加入蒽酮试剂4ml，加完后倾倒摇匀，然后置于100水浴中7.5分钟，快速冷却，测定OD630，从标准曲线查得的待测样品含量乘于系数0.9为淀粉含量。（3）激素的测定1样品中激素的提取：准确称取300g鲜重的植物样品，置于预冷的研钵中，加入1ml80的甲醇提取液（内含10ml/l的丁羟甲苯BHT）研磨成匀浆，转入离心管，洗涤研钵3次，洗涤液并入离心管，离心（9000rpm，0）10min，取上清液，残渣加一定量的提取液搅匀，离心10分钟（条件同上），合并上清，20保存。（整个过程在低温弱光下操作）2激素的纯化与测定：纯化采用过C18胶柱法，测定用ELISA法，具体参照南京农业大学ELISA试剂盒说明书和吴颂如等酶联免疫测定内源植物激素，ELISA的激素试剂盒购自南京农业大学。三、项目研究过程与资料查阅情况结果与分析1（每克新鲜材料中蛋白质的含量）单位：（g/g）品种天数华航1号华航八号粤香粘特籼占第一天0.1760.1270.1310.159第二天0.2470.2120.2160.209第三天0.1300.1250.1040.098第四天0.1190.1290.1130.129第五天0.1030.1220.1020.095第六天0.0890.0940.1150.121第七天0.1030.1270.1200.131第八天0.1220.1280.1190.1022（每克干材料中淀粉的含量）单位：（g/g）品种天数华航1号华航八号粤香粘特籼占第一天0.2120.1930.2120.187第二天0.4020.3510.3290.376第三天0.5950.5830.5230.554第四天0.7130.6570.6830.674第五天0.7560.8210.7360.777第六天0.8130.8210.8220.835第七天0.8890.8560.8340.847第八天0.8870.9030.8950.8953（每克鲜材料中淀粉的含量）单位：（g/g）品种天数华航1号华航八号粤香粘特籼占第一天0.0770.0840.1180.086第二天0.0680.0950.0690.093第三天0.0640.1160.0980.097第四天0.1740.1460.1390.115第五天0.2790.1670.2500.157第六天0.2730.2350.3450.184第七天0.3620.2900.3470.260第八天0.4680.4610.4690.4444灌浆期iPAs5灌浆期ZRs分析：（1）如图1所示：四个品种iPAs含量都出现了个显著高峰期（粤香占出现在第4天，特籼占13和华航1号出现在第三天，华航8号出现在第34天），高峰时激素含量：华航8号华航1号特籼占13粤香占，而且在前五天，华航1号和华航8号的iPAs含量都高于其原品种，前4天尤甚。峰期过后第68天，iPAs含量变化趋于平缓。此外，粤香占在第7天还出现了小峰。（2）如图2所示：跟iPAs一样ZRs在四个品种中也出现一个高峰期（粤香占第5天，特籼占13第4天，华航1号第2天，华航8号第三天），且华航1号和华航8号都比各自原品种提前2天。高峰时激素含量：华航1号华航8号粤香占特籼占13。（3）内源细胞分裂素和淀粉含量变化的关系 从淀粉含量的变化趋势图和两种细胞分裂素变化趋势图的比较得知：华航1号幼穗淀粉干中增加比特籼占13提前，与ZRs峰提前一致；但华航八号淀粉增加比粤香战滞后，与华航八号细胞分裂素峰提前不一致。由此可见，内源细胞分裂素可能和水稻幼穗细胞淀粉的合成存在一定的相关性，但没有直接的关系。（4）内源细胞分裂素和蛋白质含量的变化的关系从蛋白质含量的变化趋势图得知，四个品种在第二天都有出现一个高峰期，高峰期时蛋白质的含量四个品种都没有明显的差异。而图1中四个品种iPAs细胞分裂素出现的高峰是在第34天之间;图2中四个品种ZRs细胞分裂素出现的高峰期差别较大：粤香占是第5天，特籼占13是在第4天，华航1号是在第2天，华航8号是在第3天。且两个航天品种都有明显的峰值提前。由此可知：内源细胞分裂素的变化和水稻籽粒蛋白质的含量变化没有直接的关系。四、项目成果完成形式和价值1航天育种新品种华航一号和华航八号细胞分裂素iPAs比原品种特籼占13和粤香占峰值较高，峰出现时间与原品种没有差别。2航天育种新品种华航一号和华航八号细胞分裂素ZRs比原品种特籼占13和粤香占峰值较高，峰出现时间与原品种提前。3蛋白质峰出现在细胞分裂素峰之前，可见细胞分裂素峰不是促进蛋白质合成。4华航一号幼穗淀粉干中增加比特籼占13提前，与ZRs峰提前一致；但华航八号淀粉增加比粤香战滞后，与华航八号细胞分裂素峰提前不一致。五、经费使用情况试剂费1000元仪器费300元资料费100元杂费100元六、申请人对该项目研究工作完成后的认识总结本实验主要是对航天新品种水稻幼穗细胞分裂素峰提前的生理意义的初步探讨。包括对航天品种与其原品种iPAs和ZRs两种细胞分裂素的测定，幼穗细胞DNA，RNA，淀粉，蛋白质含量的测定，从中找出相关的规律。实验结果表明，航天新品种华航1号和华航8号水稻幼穗细胞分裂素峰的提前可能和淀粉的合成有一定的相关性，但和蛋白质的合成就相关性不大。目前只完成对细胞分裂素，淀粉和蛋白质含量的测