Gen-Probe结核分支杆菌检测仪介绍(

Gen Probe分枝杆菌快速检测仪 分枝杆菌 用Gen Probe产品检测程序和时间 Gen Probe检测分枝杆菌试剂类型 扩增 杂交检测结核分枝杆菌复合菌 AMPLIFIEDMTD Gen Probe 临床痰标本 涂阳或涂阴 杂交检测分枝杆菌 ACCUPROBEGen Probe培养阳性标本 菌落或肉汤 MTD AMPLIFIEDMycobacteriumTuberculosisDirect 检测 结核分枝杆菌复合菌 M tuberculosis结核分枝杆菌M bovis牛分枝杆菌M bovisBCG牛分枝杆菌BCGM africanum非洲分枝杆菌M microti田鼠分枝杆菌M canetti卡氏分枝杆菌 Gen ProbeMTD检测 以16SrRNA为靶核酸TMA 转录介导扩增HPA 杂交保护分析 RNA与DNA DNA非常稳定 在死亡生物内也可存在双链结构RNA只存在于活细胞非常脆弱 RNA容易受破坏 单链结构 结核菌核酸 RNA是DNA的4 5倍rRNA占80 Gen Probe扩增 3个主要步骤标本处理释放rRNATMArRNA扩增物HPA检测扩增物 超声波裂解 样品 细胞溶解 目标rRNA释放 TMA转录介导扩增 2条引物 2种酶 逆转录酶 双功能 逆转录和RNAseH酶 RNAseH 一种核糖核酸内切酶 特异性水解DNA RNA杂交链上RNA链的磷酸二酯键 产生5 核苷酸 该酶对单链核酸 双链DNA或双链RNA没有作用 RNA聚合酶等温扩增 42 逆转录酶 TMA原理 敏感 10000拷贝rRNA DNA RNA聚合酶 eg E coli 扩增产物检测 HPA技术 HPA 杂交保护分析技术标记丫啶酯 Acridiniumester 的DNA探针与RNA扩增产物杂交 形成DNA RNA双螺旋结构保护荧光物丫啶酯不被选择试剂淬灭 水解 HPA步骤 丫啶酯标记的特异DNA探针与RNA扩增物杂交使用生化水解方法 分离杂交及未杂交探针检测 化学发光检测试剂1 0 001N硝酸中含0 1 过氧化氢 试剂2 1NNaOH 杂交 60 杂交 rRNA 探针 杂交温度的影响 60 61 59 非特异结合 无杂交 假阴性高 假阳性高 选择 60 选择试剂 CH3 N O O R H2O2 OH light 检测 敏感度比较 化学发光10 19mole辐射同位素10 18mole荧光10 12mole比色10 9mole 总结 靶核酸 rRNA等温扩增 2种酶是关键 逆转录酶 RNAseH RNA聚合酶 扩增原理 TMA 转录介导扩增 液相杂交 HPA 杂交保护分析 化学发光法 检测杂交信号 MTD方法 STEP1 标本预处理超声波降解标本STEP2 扩增 TMA 扩增试剂 石腊油 经过预处理的标本 消化95 15分钟 水浴42 5分钟 加入酶试剂 扩增42 30分钟STEP3 探测 HPA 加入探针试剂 杂交60 15分钟 选择60 15分钟 在发光仪读数 扩增 TMA加入试管 扩增试剂 石腊油经过预处理的标本消化95 15分钟水浴42 5分钟加入