细菌的分布及外界因素对细菌的影响--第四军医大学..ppt

细菌的分布及外界因素对细菌的影响 第一节细菌的分布 微生物在自然界分布极为广泛 江河 湖泊 海洋 土壤 空气 矿层等数量不等 种类不一的微生物存在 在人类 动物 植物的体表 以及与外界相通的呼吸道 消化道等腔道中 亦有多种微生物的寄生 一 细菌在人体的分布 一 正常菌群的含义 二 人体正常菌群的分布 三 正常菌群的生理作用 四 条件致病菌和菌群失调 二 细菌在自然界的分布 微生物和其他生物一样 与外界环境有着密切的联系 外界环境适宜 就生长繁殖 条件改变过于剧烈 使微生物的主要代谢发生障碍 或菌体蛋白质变性凝固 会导致生长停顿 甚至死亡 在医学上常用的人工方法 造成微生物极为不利的环境 来达到杀灭微生物的目的 一 土壤中的细菌土壤中的微生物以细菌为主 放线菌次之 另外还有真菌 螺旋体等 二 水中的细菌水中的病菌如伤寒杆菌 痢疾杆菌 霍乱弧菌 钩端螺旋体等主要来自人和动物的粪便及污染物 因此 粪便管理在控制和消灭消化道传染病有重要意义 三 空气中的细菌室外空气中常见产芽胞杆菌 产色素细菌及真菌孢子等 室内空气中的微生物比室外多 尤其是人口密集的公共场所 医院病房 门诊等处 容易受到带菌者和病人污染 目的 通过实验掌握检测细菌分布的方法 熟悉正常菌群的含义 材料 普通琼脂平板培养基 血琼脂平板培养基 生理盐水 碘酊 75 酒精 无菌棉签 目的 通过实验掌握检测细菌分布的方法 熟悉正常菌群的含义 材料 普通琼脂平板培养基 血琼脂平板培养基 生理盐水 碘酊 75 酒精 无菌棉签 方法 一 空气中细菌的检查1 分别在教室 厕所 食堂及无菌室中选择距地面约1米左右的一处桌面 将普通培养基揭开 暴露空气中10min后 再将平皿盖上 2 置37 培养箱24h 观察培养基中菌落的数目及菌落形态的特点 并任选一个菌落作革兰氏染色 镜检观察 二 呼吸道细菌的检查1 将血平板培养基打开 在距口腔10cm 面对培养基用力咳嗽3 5次 再盖上平皿 2 用沾过生理盐水的棉签在咽喉处轻轻擦拭 即咽拭子 然后在血平板培养基上用平板分离化线法接种 3 将上述两个培养板均置37 培养箱24h 观察培养基中菌落的数目及菌落的形态特点 三 皮肤表面细菌的检查1 将普通培养基分为三等份 将未洗的手指 用肥皂洗过的手指 经上碘酊 75 酒精处理的手指在培养基上轻涂 2 将培养板置37 培养箱24h 观察培养基中菌落的数目及菌落的形态特点 第二节外界因素对细菌的影响 细菌在自然界必然不断经受周围环境中各种因素的影响 当环境适宜时 细菌能进行正常的新陈代谢而生长繁殖 若环境条件变化 可引起细菌的代谢和其他性状发生变异 若环境条件改变剧烈 可使细菌生长受到抑制或导致死亡 消毒 杀灭病原微生物的方法 灭菌 杀灭物体上所有的微生物的方法 无菌 物体上或容器内无活菌存在的意思 防腐 防止或抑制微生物生长繁殖的方法 一 物理因素 一 热力灭菌1 湿热灭菌法2 干热灭菌法 二 电磁波与射线1 日光与紫外线2 电离辐射 三 滤过除菌法除菌滤器简称滤菌器 将液体或空气通过含有微细小孔的滤器 只允许小于孔径的物体如液体和空气通过 大于孔径的的物体不能通过 它们可用陶瓷 硅藻土 石棉或玻璃屑等制成 主要用于一些不耐热的血清 毒素 抗生素 药液 空气等除菌 一般不能除去病毒 支原体和细菌的L型 四 超声与超声波每秒钟超过200 000次振动的声波不被人耳感受 称为超声波 微生物对强度高的超声波很敏感 五 干燥多数细菌的繁殖体在空气中干燥时很快死亡 有些细菌抗干燥力较强 尤其有蛋白质等物质保护时 六 低温多数细菌耐低温 在低温状态下 这些细菌的代谢减慢 当温度如回升到适宜范围又能恢复生长繁殖 故低温常用作保存菌种 二 化学因素 化学药物能影响细菌的化学组成 物理结构和生理活动 从而发挥防腐 消毒 甚至灭菌的作用 防腐剂的浓度高或作用时间长 也可达到消毒的目的 消毒及防腐药物对人体组织有害 只能外用或用于环境消毒 一 化学消毒剂 二 防腐剂用于防腐的药物称为防腐剂 生物制剂 如疫苗 类毒素 抗毒素等 中常加入防腐剂 以防止杂菌生长 常用防腐剂有0 5 石炭酸 0 01 硫柳汞和0 1 0 2 甲醛等 三 化学疗剂 三 生物因素 一 噬菌体 Bacteriophage 噬菌体是能感染细菌 放线菌 真菌 螺旋体的病毒 噬菌体分布广泛 凡是有细菌存在的场所 就可能有相应噬菌体的存在 噬菌体有严格的宿主特异性 只寄居于易感宿主菌体内 二 抗生素某些微生物在代谢过程中产生的 能抑制或杀灭其他微生物的一种化学物质 抗生素主要来源于放线菌 某些真菌和细菌 目前生产的抗生素 除从微生物培养液中提取外 有些已能人工合成或半合成 四 实验 一 物理因素对细菌的影响1 温度灭菌试验 原理 温度高低对细菌生长繁殖关系非常密切 温度过高过低都会影响细菌的生长 甚至死亡 细菌生长繁殖的最适温度一般为37 低与此温度是细菌的代谢缓慢 生长受到抑制 但仍可生长 而高温则可杀死细菌 材料 1 大肠杆菌 枯草杆菌斜面培养物 2 肉汤培养基 3 接种环 酒精灯 方法 1 取肉汤培养管6支 平均分成3组 2 每组分别接种大肠杆菌和枯草杆菌 3 第一组经高压蒸气灭菌15min 第二组置100 水浴中10min 第三组不作处理 4 将三组培养管均置37 孵育 24h后观察 2 紫外线杀菌试验 原理 紫外线被DNA吸收后 使DNA两个相邻的嘧啶形成二聚体 DNA的复制被抑制 从而导致细菌变异或死亡 材料 1 大肠杆菌斜面培养物 2 琼脂平板培养基 3 接种环 酒精灯 无菌滤纸片 方法 1 以密集划线法将大肠杆菌接种于琼脂培养基上 2 将镊子浸酒精燃烧灭菌后取灭菌滤纸片一张 置于涂有细菌的平板培养基表面 3 打开培养皿盖 置于紫外灯下一尺处直接照射30 60min4 取出纸片 盖好平板盖 置37 孵育 24h后观察 二 化学因素对细菌的影响 原理 许多化学制剂具有抑制和杀灭细菌的作用 在实际应用中具有杀菌作用的化学制剂称消毒剂 只能外用 用于抑制细菌生长与代谢的制剂称防腐剂 材料 1 2 5 碘酒 75 酒精 1 龙胆紫 5 石炭酸 84消毒液2 滤纸片 固体平板 弯头镊子 L玻棒 吸管3 混合菌液 方法 1 用吸管吸取1滴菌液滴于平板上用L玻棒涂抹均匀 2 将浸有2 5 碘酒 75 酒精 1 龙胆紫 5 石炭酸 84消毒液的滤纸贴于培养皿盖上 3 倒置培养皿 置于37 孵育 4 分别于12h 24h 3h6后观察生长情况 三 细菌抗生素敏感性测定1 纸片扩散法 原理 将含有一定量的抗菌药物纸片 平贴在已经接种被测定细菌的琼脂培养基上 纸片中的抗菌药物溶解于培养基内 并向四周呈球面扩散 药物在琼脂中的浓度随离开纸片的距离增大而降低 同时含菌琼脂经孵育后细菌开始生长 在琼脂内的药物浓度恰高于该药对待检菌的最低抑菌浓度 该细菌的生长就受到抑制 在含药纸片的周围形成透明的抑菌环 目的 本实验要求掌握纸片扩散法试验 材料 1 菌种 金黄色葡萄球菌 埃希大肠杆菌等 2 培养基 水解酪蛋白平板 3 含抗生素 青霉素 链霉素 氯霉素 药敏纸片 方法 1 用棉拭子取菌液涂布整个培养基表面 反复几次 保证涂布均匀 2 镊子分别取含有不同抗生素的滤纸片 贴在已接种的琼脂平板的表面 每个平板上贴4 6片 各纸片中心相距约24mm 纸片距平皿边缘约15mm 各纸片间距离相等 结果 分别测量各种抗生素纸片抑菌圈的直径 以mm表示 判断其敏感度及耐药性 常用抗生素与磺胺药物敏感试验判定标准 2 试管稀释法 原理 以水解酪蛋白 M H 液体培养基将抗生素作不同浓度的稀释 然后种入待检细菌定量测定抗菌药抑制或杀死该菌的最低抑菌浓度 MIC 或最低杀菌浓度 MBC 材料 1 金黄色葡萄球菌液 2 MH肉汤 3 80万单位的青霉素钾盐 方法 1 取无菌小试管10支排于试管架 于第一管加