组织学与胚胎学之组织学绪论a.ppt

组织学绪论IntroductionofHistology 第1章 组织学 histology 研究机体微细结构及其相关功能的科学研究水平 组织 细胞 亚细胞和分子 例 心脏 研究内容 发展简史 学习方法 技术简介 组织学 组织 意义 图1 组织 tissue 构成 细胞群和细胞外基质细胞 机体结构和功能的基本单位 成人约有1015个 200余种细胞外基质 由细胞分泌形成类型 上皮组织 结缔组织 肌组织和神经组织 组织以不同的种类 数量和方式组合形成器官 若干功能相关的器官构成系统 研究内容 发展简史 学习方法 技术简介 组织学 组织 意义 促进了生理学的进步是病理学的基础促进人类对自身的深入了解 研究内容 发展简史 学习方法 技术简介 组织学 组织 意义 简称光镜 lightmicroscope LM 16世纪末荷兰人发明 1665年胡克命名 细胞 马尔比基观察了脾 肺 肾 表皮 列文虎克发现红细胞 精子 肌纤维 格拉夫发现卵泡 1801年比沙提出 组织 概念 光学显微镜 细胞学说 电子显微镜 当代组织学 研究内容 发展简史 学习方法 技术简介 提出 施万 施莱登 1838 1839 内容 细胞是一切动 植物体的基本结构和功能单位 细胞内进行着复杂的化学反应 新细胞由原有细胞产生 光学显微镜 细胞学说 电子显微镜 当代组织学 研究内容 发展简史 学习方法 技术简介 简称电镜 electronmicroscope EM 发明 1932年卢斯卡 科诺尔 使分辨率提高到0 2nm超薄切片术 50 80nm 超微结构 ultrastructure 即细胞膜 细胞器 染色体等亚细胞结构 光学显微镜 电子显微镜 当代组织学 研究内容 发展简史 学习方法 技术简介 细胞学说 新仪器 新技术的发明和应用免疫组织化学技术 原位杂交技术将组织学引入分子水平组织工程学技术拓展了组织学的临床应用前景 光学显微镜 电子显微镜 当代组织学 研究内容 发展简史 学习方法 技术简介 细胞学说 审视角度组织水平 层次顺序 特征性结构和细胞细胞水平 主要细胞的分布 结构特点 含重要细胞的超微结构 及功能形态和结构相统一结构是功能的基础 功能是结构的必然表现培养观察能力 重视实习课和图像观察培养空间思维能力 将二维图形还原为三维构像 研究内容 发展简史 学习方法 技术简介 石蜡切片术 paraffinsectioning 取材 固定 脱水 包埋 切片 5 10 m厚 染色苏木精 伊红染色法 hematoxylin eosinstaining HE染色法 苏木精为碱性染料 使染色质和核糖体着紫蓝色 伊红为酸性染料 使胞质和细胞外基质着红色嗜酸性 acidophilia 嗜碱性 basophilia 中性 neutrophilia 特殊染色 光镜技术 电镜技术 组织化学 放射自显影术 图像分析 研究内容 发展简史 学习方法 技术简介 图3 4 细胞培养组织工程 图2 透射电镜术 TEM 用于观察组织细胞的超微结构 需制备超薄切片 50 80nm厚 并经电子染色 根据电子束在不同结构上被散射程度的差异表现为电子密度高 黑或深灰色 和电子密度低 浅灰色 扫描电镜术 SEM 用于观察组织细胞表面结构 具有真实的立体感 无需制备切片 光镜技术 电镜技术 组织化学 放射自显影术 图像分析 研究内容 发展简史 学习方法 技术简介 细胞培养组织工程 图5 图6 组织化学术 histochemistry 为应用化学 物理 生物化学 免疫学或分子生物学的原理和技术 与组织学技术结合而产生的技术 在组织切片显示某种物质的存在和分布状态分类 一般组织化学术免疫组织化学术原位杂交术 光镜技术 电镜技术 组织化学 放射自显影术 图像分析 研究内容 发展简史 学习方法 技术简介 细胞培养组织工程 一般组织化学术 组织中的某种结构成分与所加试剂发生化学反应并呈现某种颜色 在显微镜下可观察到糖类 PAS 过碘酸希夫 反应 显示多糖和糖蛋白 呈紫红色脂类 锇酸固定染色 呈黑色核酸 福尔根反应显示DNA 甲基绿 派若宁反应同时显示DNA与RNA酶类 酶与特异性底物的反应产物 再与捕捉剂反应 形成有色的沉淀物 光镜技术 电镜技术 组织化学 放射自显影术 图像分析 研究内容 发展简史 学习方法 技术简介 图7 细胞培养组织工程 免疫组织化学 immunohistochemistry 根据抗原 抗体特异性结合原理 检测组织切片中的肽和蛋白质用标记的抗体与组织中的抗原结合 标记物可于显微镜下观察 标记物有荧光素 荧光显微镜观察 辣根过氧化物酶 光镜或电镜观察 胶体金 多用于电镜观察 光镜技术 电镜技术 组织化学 放射自显影术 图像分析 研究内容 发展简史 学习方法 技术简介 图8 10 细胞培养组织工程 原位杂交术 insituhybridization 即核酸分子杂交组织化学术 检测基因 DNA片段 的有无 基因的表达活性 mRNA 原理 用带标记物的已知碱基顺序的核酸探针与细胞内待测核酸按碱基配对原则进行特异性原位结合 杂交 并通过对标记物的显示而获知待测核酸的有无及相对量常用标记物有放射性核素和地高辛 光镜技术 电镜技术 组织化学 放射自显影术 图像分析 研究内容 发展简史 学习方法 技术简介 图11 细胞培养组织工程 放射自显影术 autoradiography 概念 通过活细胞对某种放射性物质的特异性摄入 以显示该物质在组织和细胞内的分布 含量和代谢过程 借以反映细胞的功能状态应用举例 用3H标记的胸腺嘧啶核苷研究DNA合成和细胞增殖状态 用125I观察甲状腺滤泡内碘化部位 光镜技术 电镜技术 组织化学 放射自显影术 图像分析 研究内容 发展简史 学习方法 技术简介 图12 细胞培养组织工程 图像分析术 imageanalysis 又称形态计量术 morphometry 应用数学和统计学原理对组织切片提供的平面图像进行分析 从而获得立体的组织细胞内有形成分的数量 体积 表面积等参数 从量的角度显示结构与功能的关系体视学 stereology 根据连续的组织切片应用计算机进行三维重建 以获得微细结构的立体模型 光镜技术 电镜技术 组织化学 放射自显影术 图像分析 研究内容 发展简史 学习方法 技术简介 细胞培养组织工程 图13 细胞培养术 cellculture 把从机体取得的细胞在体外模拟体内的条件下进行培养 培养组织块或器官则称组织培养术或器官培养术用于研究细胞 组织的代谢 增殖 分化 形态和功能变化 各种理化因子对活细胞的影响培养条件 营养 生长因子 pH值 渗透压 O2和CO2浓度 温度 控制污染用相差显微镜观察 光镜技术 电镜技术 组织化学 放射自显影术 细胞培养组织工程 图像分析 研究内容 发展简史 学习方法 技术简介 图14 15 组织工程 tissueengineering 用细胞培养术在体外模拟构建机体组织或器官的技术正在构建的有皮肤 软骨 骨 肌腱 骨骼肌 血管 角膜等 其中以组织工程皮肤较为成功 已成为商品用于治疗烧伤 皮肤静脉性溃疡等疾病 光镜技术 电镜技术 组织化学 放射自显影术 细胞培养组织工程 图像分析 研究内容 发展简史 学习方法 技术简介 研究包括四个方面 种子细胞 即增殖旺盛的细胞 多为干细胞 细胞外基质 可用生物材料 如牛胶原 和人工合成高分子材料 构建组织或器官 即把细胞置于细胞外基质中进行三维培养 并形成所需要的形状 将构建物移植机体的方法 光镜技术 电镜技术 组织化学 放射自显影术 细胞培养组织工程 图像分析 研究内容 发展简史 学习方法 技术简介 图16 组织学 组织 嗜酸性 嗜碱性的概念组织学学习方法要点石蜡切片术和超薄切片术的基本原理HE染色法 本章重点 图1A心脏 左 器官右 组织光镜像 图1B心脏 心肌细胞光镜像 图1C心脏上 肌丝结构电镜像下 肌丝蛋白质构成模式图 图2HE染色 垂体远侧部 图3镀银染色 大脑皮质神经元 图4甲苯胺蓝与醛复红染色 肥大细胞和弹性纤维 图5透射电镜像 浆细胞 图6扫描电镜像 血细胞 图7PAS反应 小肠上皮杯状细胞的粘原颗粒 图8免疫组织化学 荧光素标记 毛细血管内皮细胞呈vWF阳性 图9免疫组织化学 辣根过氧化物酶标记 胰岛B细胞呈胰岛素阳性 图