免疫学检验PPT课件

雅安职业技术学院 1 免疫学检验 雅安职业技术学院药学检验系 检验教研室康雪 雅安职业技术学院 2 第十四章超敏反应性疾病的免疫学检验 第一节激发反应第二节IgE的检测第三节免疫复合物检测第四节抗球蛋白试验第五节药物过敏筛选实验 雅安职业技术学院 3 超敏反应 hypersensitivity 又称变态反应 是指机体再次接受相同抗原刺激后 发生的以组织细胞损伤或生理功能紊乱为主的特异性免疫应答 变应原 allergen 引起超敏反应的抗原称之为变应原 超敏反应 雅安职业技术学院 4 第一节激发试验 激发试验 provocationtest 是模拟自然发病条件 用少量超敏原引起一次较轻的超敏反应发作 达到确定超敏原的一种体内试验 雅安职业技术学院 5 非特异性激发 是用组胺等刺激物做雾化吸入 以观察患者对 型超敏反应的敏感性 进而分析病因或判定疗效 特异性激发 是用抗原如尘螨等做试验 对明确超敏原有一定价值 用于 型和 型超敏反应性疾病的检查 雅安职业技术学院 6 一 皮肤试验 是在皮肤进行的体内免疫学试验 简称皮试 机制 型超敏反应 雅安职业技术学院 7 型超敏反应 雅安职业技术学院 8 皮内试验点刺试验 挑刺或刺痕试验 斑贴试验 一 试验类型及方法 雅安职业技术学院 9 二 结果判定及分级标准 速发型皮肤试验结果判定阳性反应以风团为主 点刺试验的阳性反应以红晕为主 迟发型皮肤试验结果判定阳性结果以红肿和硬结为主 雅安职业技术学院 10 相同超敏原不同稀释度 速发型15 30min内观察 迟发型48 72h内观察 0 01 0 03ml 针 4mm 针 方法 结果 皮内试验 雅安职业技术学院 11 比皮内试验敏感性稍低 但假阳性较少 皮试液浓度要比皮内试验高10 100倍 将试验抗原与对照液分别滴于试验部位的皮肤上 用针尖透过液滴轻挑一下以刺破皮肤而不出血为度 1min后拭 吸 去试验抗原液 点刺试验 雅安职业技术学院 12 雅安职业技术学院 13 雅安职业技术学院 14 第一次读 48小时打开斑试器 间隔30min待斑试器压痕消失后判定结果 第二次读 第3天或第4天 如怀疑光过敏 在斑贴试验的基础上给予紫外线照射 操作过程相似 斑贴试验 雅安职业技术学院 15 雅安职业技术学院 16 三 结果分析及注意事项 假阴性出现的常见原因 皮试液的浓度过低或失效 老年患者或过敏性休克或哮喘大发作之后 皮试前用过抗组胺药或免疫抑制剂 操作不当将皮试液注入皮下或注入量过少等 雅安职业技术学院 17 三 结果分析及注意事项 假阳性出现的常见原因 皮试液含有非特异性刺激物 患者患有皮肤划痕征 操作手法较重 注入量较大或浓度过高 注入少量空气等 雅安职业技术学院 18 询问病史 阳性对照 必备抢救药品和设施 如何避免假性结果的出现 适应证 阴性对照 皮试液浓度 雅安职业技术学院 19 四 应用与评价 预防药物或疫苗等过敏防治 型超敏反应性疾病结核菌素试验评估机体细胞免疫功能预防皮肤接触过敏 雅安职业技术学院 20 结核菌素试验 是用结核菌素进行皮肤试验 通过观察局部是否出现迟发型超敏反应 判断机体有无结核分枝杆菌感染和对该菌的免疫力 雅安职业技术学院 21 阳性 机体已感染过结核杆菌或BCG接种成功 强阳性 可能有活动性结核病 阴性 机体未感染过结核分枝杆菌 但应考虑 感染初期 老年人 重度结核病患者 机体处于免疫反应低下状态 患有其他疾病 雅安职业技术学院 22 二 支气管激发试验 手捏式雾化器 bronchialprovocativetest BPT测定支气管吸入某种刺激性物质后产生收缩反应程度的方法 亦称气道反应性测定 吸入一定量的激发物 比较吸入前后肺通气功能指标 判断气道高反应性程度 雅安职业技术学院 23 雾化抗原颗粒 5微米 测定肺功能指标 用力肺活量 FVC 1秒用力呼气容积 FEV1 最大呼气流速 PEF 比气道传导率 sGaw 射流雾化器 雅安职业技术学院 24 特异性BPT将一定浓度的抗原刺激物装入雾化器中使受试者经口或鼻吸入雾化颗粒 其携带激发物在支气管树及肺泡沉积而起作用 非特异性BPT将一定浓度的激发物装入雾化器中 进行同特异性BPT的操作 吸气流速 雾化颗粒直径的大小以及气道通畅与否均可影响雾化颗粒在气道的沉积 从而影响气道的反应性 一 试验类型及方法 雅安职业技术学院 25 测基础肺功能 激发物稀释液 低浓度 小剂量 双倍浓度 剂量递增 阳性伴明显气促 喘息 口吸入 1 1分半钟 测定肺功能 阳性标准 明显不适 临床症状 直至 激发物达到最高浓度 阴性反应 支气管舒张剂 吸入 技术要点 雅安职业技术学院 26 二 测定指标及结果判断 支气管反应有三种类型 速发 迟发和双重反应 每次观察不能小于24小时 FEV1 重复性好 结果稳定 PEF 峰流速仪价格低廉 方便 不受场地限制 与FEV1有较好的相关性 适合流行病学调查 sGaw 敏感性好 但重复性稍差 雅安职业技术学院 27 变应原的确定常以定性试验判断结果 阳性 气道反应性增高FEV1 PEF较基础下降 20 或sGaw下降 35 有时伴有明显自觉症状或肺部闻及哮鸣音 二 测定指标及结果判断 雅安职业技术学院 28 阴性 气道反应性正常FEV1 PEF或sGaw 上述标准 正常值为阴性 无论激发试验阳性或阴性 均应排除气道反应性的影响因素 可疑者 间隔2 3周后复检或2个月后再测 二 测定指标及结果判断 雅安职业技术学院 29 三 注意事项及禁忌证 受试者在心肺功能不全 高血压 甲亢 妊娠 严重咽喉炎 呼吸道感染或肺炎等情况下一般不适宜作激发试验 有过敏性休克 严重的血管性水肿及严重的喉头水肿病史者 一周之内预防接种 职业性过敏因素的接触等 雅安职业技术学院 30 受试者在检查前 48小时 停 抗组胺药 色甘酸钠及皮质激素类药 12小时 停 支气管扩张剂 15分钟 实验室休息 病史 体检排除BPT的禁忌证 三 注意事项及禁忌证 雅安职业技术学院 31 基础FEV1占预计值70 以上才能进行试验 受试者应为哮喘患者病情稳定时或缓解期 吸入激发物的浓度应从小到大 逐渐递增 应备有急救器械 药品和有经验的临床医生在场 三 注意事项及禁忌证 雅安职业技术学院 32 四 应用与评价 雅安职业技术学院 33 观察症状 症状好转或减轻 导致 三 食物激发试验 基础饮食 吃可疑的过敏食物 症状加重 1周后 疑似 过敏原 重复3次 确定 某食物为过敏原 症状未减轻 1周后 排除 食物所致过敏 雅安职业技术学院 34 四 其他方法 结膜激发试验 将超敏原滴于一眼 阳性反应为结膜充血 水肿 分泌增加 搔痒 甚至眼睑红肿 注意假阳性对结果的干扰 雅安职业技术学院 35 第二节IgE的检测 一 IgE的测定 CLIA敏感度更高 特异性高 定量 测定方法 固相RIA是较传统的IgE检测方法 ELISA双抗体夹心法 操作简便 敏感性很高 是测定血清IgE最常用的方法 雅安职业技术学院 36 临床意义正常人群血清IgE水平受地域环境 种族 遗传 年龄 性别 寄生虫感染 测定法及取样等影响 结果有一定差异 参考值 0 1 0 9mg L 某些过敏体质者高于正常1000 10000倍 血清IgE高 特应症 支气管肺曲菌病 药物性间质性肺炎 麻风 寄生虫病及IgE型骨髓瘤等 雅安职业技术学院 37 二 特异性IgE的测定 用纯化的过敏原去检测相应的IgE抗体的一类试验 酶联免疫吸附试验 常用间接法测特异性IgE 免疫印迹技术 操作简单 能一次性测定多种变 应原的特异性IgE 故临床已普遍采用IBT法 雅安职业技术学院 38 4 底物显色 2 待检特异性IgE抗体 1 已知变应原包被载体 3 酶标动物抗人IgE 洗涤 洗涤 洗涤 结果 ELISA间接法检测特异性IgE 雅安职业技术学院 39 特异性变应原加入待检血清 转印至NC膜 NC膜 待检血清特异性IgE 抗 IgE HRP 底物 特异性抗原条带显色 NC膜 变应原 特异性IgE 抗 IgE HRP IBT检测特异性IgE 雅安职业技术学院 40 第三节免疫复合物检测 免疫复合物 immunecomplex IC 指由抗原与相应的抗体结合而成的复合物 局部免疫复合物 沉积在机体的某一局部 循环IC circulatingIC CIC 血液中存在的IC 型超敏反应 在传染病或性病时 IC沉淀于局部后激活补体 最终导致组织损伤 形成IC病 雅安职业技术学院 41 抗原特异性IC 抗原非特异性IC 检测已知抗原与相应抗体形成的IC 不考虑形成IC抗原的性质 检测未知抗原与相应抗体形成的IC总量 雅安职业技术学院 42 一 抗原非特异性CIC检测技术 CIC 分子量600kDa以上 沉降系数 19S 热聚合人IgG heatagglutinationhumanIgG HAHG 作为参考标准品 绘制标准曲线进行CIC定量或测定A值代表CIC相当于HAHG的含量 雅安职业技术学院 43 CIC的检测方法 按抗体分子在结合抗原后发生的物理学和生物学特性的改变而设计 PEG比浊法 ELISA法 胞法 Raji细胞法 抗球蛋白技术 mRF凝胶扩散试验 雅安职业技术学院 44 一 PEG比浊法 1 基本原理聚乙二醇 polyethyleneglycol PEG 为不带电荷 直链大分子结构的多糖 有强脱水作用 利用2 4 浓度的PEG可选择性沉淀大分子CIC 2 技术要点生物化学检验 雅安职业技术学院 45 2 PEG沉淀大分子CIC 4 PEG沉淀较小分子CIC 超过5 PEG选择性沉淀CIC的特性消失 温度影响极大 需进行温差校正 低密度脂蛋白使浊度增加 空腹采血 高 球蛋白血症和标本反复冻融浊度增加 3 注意事项 雅安职业技术学院 46 二 ELISA法 1 基本原理ELISA法测定的CIC 是能够结合C1q的IgG类抗体与其特异性抗原形成的CIC 2 技术要点将聚苯乙烯包被上C1q 加入受检血清 CIC中IgG的Fc段与C1q结合 再加抗人IgG HRP 形成C1q CIC 抗人IgG HRP复合物 加底物显色 雅安职业技术学院 47 灵敏度高于PEG比浊法 检测到0 1mg L 重复性好等优点 C1q制品不易精制 纯品不稳定 只能检出与补体结合的CIC 3 方法评价 雅安职业技术学院 48 三 细胞法 Raji细胞法 Raji细胞是从Burkitt淋巴瘤分离建株似B细胞系 在体外繁殖传代 细胞表面有高密度的C1q C3b C3d等补体受体 而且不易脱落 1 基本原理 雅安职业技术学院 49 将定量待检血清 HAHG和Raji细胞混合 使补体 CIC或HAHG与Raji细胞形成复合物 加入抗人IgG FIC 形成Raji细胞 补体 CIC 或HAHG 抗人IgG FIC复合物 检测荧光强度 2 技术要点 雅安职业技术学院 50 培养条件能改变Raji细胞其表面受体的数量及亲和性 影响检测敏感性 待检血清中如有抗淋巴细胞的抗体 能和Raji细胞反应 SLE血清中的抗DNA也能和Raji细胞反应 使测定结果偏高 3 影响因素 雅安职业技术学院 51 敏感性高 6mg LHAHG 实用性强 缺点需培养Raji细胞和同位素标记抗人IgG 操作繁琐 Raii细胞培养较困难 不易长期稳定保持其特性 培养条件受限 4 方法评价 雅安职业技术学院 52 四 抗球蛋白技术 mRF凝胶扩散试验 1 基本原理IgG或IgM类自身抗体与IC中IgG的Fc段结合而不与游离IgG结合的特性 mRF与CIC亲和力较强 雅安职业技术学院 53 2 技术要点将mRF和待检血清中的CIC在琼脂凝胶中扩散 mRF CIC结合形成沉淀现象 进行CIC定性或定量 3 方法评价敏感度较低100mg L HAHG mRF来源受限 操作费时 难于常规应用 雅安职业技术学院 54 雅安职业技术学院 55 二 CIC检测方法评价及应用 自身免疫性疾病病程中连续动态观察或辅助诊断 试验方法本身不完善 IC形成的复杂性 如在生理状态下IC是由各种抗原与相应抗体所构成的 维持动态平衡 在病理状态下往往是单一种类IC增高 而此种单一成分增高发展到足以影响IC总体水平情况下 才能被试验检出 一 检测方法评价 雅安职业技术学院 56 肾脏疾病 急性肾小球肾炎 移植肾 IgA肾病 消化系统疾病 慢活肝炎 原发性胆淤性肝硬化 皮肤病 荨麻疹 天疱疮 皮疹性皮炎 型超敏反应性疾病 SLE RA 硬皮症 自身免疫性溶血性贫血等 此外 CIC的检测对于肿瘤 肝癌 白血病 霍奇金病 神经肌肉萎缩性侧索硬化症等疾病的诊断 二 临床应用 雅安职业技术学院 57 固定或沉积于病变局部组织中的IC测定常用免疫组化技术 如荧光免疫组化技术检测到组织标本有Ig和补体 受累组织的成分 构型和特定的部位可为疾病的严重程度和预后提供依据 三 沉积于组织中IC的测定 雅安职业技术学院 58 类型 第四节抗人球蛋白试验 Coombs试验 不完全抗体 抗体分子较短小 只能与颗粒抗原一方相结合 不出现可见的凝集现象 但能封闭抗原决定簇 使其不能再与完全抗体结合 雅安职业技术学院 59 抗人球蛋白试验 antiglobulintest AGT 将人球蛋白注入异种动物 诱导动物产生抗人球蛋白血清 antiglobulinserum AGS AGS加入表面结合有不完全抗体的红细胞复合物中 就能出现可见的凝集现象 雅安职业技术学院 60 作用 检测红细胞表面结合的不完全抗体 临床意义 新生儿溶血症和自身免疫性溶血性贫血的诊断 RBC为Rh 7S的IgG 体内发生 抗IgG 体外测试 抽血 一 直接抗球蛋白试验 雅安职业技术学院 61 检测游离在血清中的不完全抗体或红细胞表面的抗原 RBC为Rh 不完全抗体试剂 抗IgG 体外测试 二 间接抗球蛋白试验 雅安职业技术学院 62 技术要点 雅安职业技术学院 63 凝集为阳性 表明受检血清有不完全抗体或红细胞上有相应抗原 同时具备阳性对照管凝集阴性对照管不凝集 如有不完全抗体 可将血清以作倍比稀释进行效价测定 结果判断 雅安职业技术学院 64 在37 水浴中 抗体吸附相应红细胞上的结合程度 与致敏的时间 离子强度有关 离心速度和时间十分重要 原则应以最小的离心力和最短的离心时间使阳性对照管出现反应为宜 是一种极为敏感的检查不完全抗体的方法 也是RhD检出的确证试验 操作繁杂 受试验条件影响较大 注意事项 方法评价 雅安职业技术学院 65 血液病的检测 鉴定血型和检查血清中不完全抗体 有助于RhD的检出 多用于检测母体RhD抗体 输血前交叉配血试验及其他特殊研究 及早发现和避免新生儿溶血症的发生 红细胞不相容的输血所产生的血型抗体进行检测 临床意义 雅安职业技术学院 66 方法 荧光分光光度法 放射免疫分析法及酶免疫分析法测定 变应原刺激剂致嗜碱粒细胞释放组胺 可以检测出嗜碱粒细胞的释放能力 变应原刺激剂可以特异性确定变应原的类型 类型 第五节药物过敏