VFA测定操作规程-比色法.doc

VFA分析操作规程 -比色法VFA是厌氧发酵中微生物代谢的重要中间产物，甲烷菌利用VFA形成甲烷，属于产甲烷的原料，但厌氧反应器中过多积累VFA抑制甲烷菌的活性，测定VFA含量作为分析厌氧发酵好坏的重要指标一.实验原理含挥发性脂肪酸的样液，在加热的条件下，与酸性乙二醇作用生成酯，此酯与羧胺反应，形成氧肟酸。在高铁试剂存在下，氧肟酸转化为高铁氧肟酸的棕红色络合物，其颜色的深浅在一个较大的范围内与反应初始物挥发性脂肪酸的含量成正比，故可用比色法测定。二.试验药品1. 1：1硫酸浓硫酸（相对密度1.84，C.P.）加到同体积蒸馏水中稀释配制。2. 4.5mol/L的氢氧化钠称取180g氢氧化钠(C.P.)溶于水中，冷后以蒸馏水稀释至1L3. 10%硫酸羟胺溶液称取硫酸羟胺(C.P.)10.0g，溶于100mL蒸馏水中。4. 酸性氯化铁试剂将20.0g分析纯FeCl3 6H2O溶于500mL水中，准确加入20.0 mL浓硫酸并以蒸馏水稀释至1L。5. 乙二醇分析纯 乙二醇三. 试验仪器及设备800B型离心机25ml比色管电炉752紫外分光光度计PH计容量瓶、移液管、烧杯四、测定步骤1、 采样测定脂肪酸的样品应特别注意样品的代表性，采集的样品应尽快分析测定，如需放置，应密闭储存在4冷藏冰箱中，保存时间不能超过24h。2、 步骤2.1 乙酸标准液的配制及标准曲线的绘制2.1.1 精确称取乙酸（分析纯，相对密度1.045，含量99.0%）1.010g，以蒸馏水稀释至100mL，此溶液含乙酸10mg/mL。2.1.2 准确吸取10 mg/mL乙酸标准溶液1.0mL、5.0mL、10.0mL、15.0mL、20.0mL、25.0mL、30.0mL，分别置于100.0mL容量瓶内，以蒸馏水定容至刻度，摇匀，即得100mg/L、500 mg /L、1000 mg /L、1500 mg /L、2000 mg /L、2500 mg /L、3000 mg /L的乙酸标准系列液。2.1.3 分别吸取0.5 mL乙酸标准溶液分置于比色管中（12.5cm1.5cm），同时吸取0.5ml蒸馏水作空白管，每管中准确加入1.5mL乙二醇和0.2mL稀硫酸，于沸水浴中加热3min，然后立即以冷水冷却；再加入0.5mL硫酸羟胺和2.0mL4.5mol/L的氢氧化钠，充分摇匀，放置1min，然后滴入10mL酸性氯化铁，用蒸馏水定容至25ml，并充分摇匀，静置5min，用分光光度计以500nm波长测定光密度，以纵坐标表示浓度值，横坐标表示光密度值绘制标准曲线。2.2 样品的测定2.2.1 样品预处理：样品先经果汁机打匀2.2.2 取打匀样品于离心管中（2-6个），用800B型离心机离心约15min，倒出上清液并混合均匀。2.2.3 依椐脂肪酸含量的高低决定稀释倍数。准确量取25ml上清液于250ml或500ml容量瓶中，并用蒸馏水稀释至刻度，混匀，将水样倒入烧杯中。2.2.4取稀释的待测水样0.5ml，按标准曲线做法2.1.3进行操作，一式两份并同时做空白试验一份。2.2.5 计算两份光密度平均值，查标准曲线上的脂肪酸含量五.注意事项1. 此方法是挥发性脂肪酸总量的经验测定法，比蒸馏法测定更为简便、快速。除150mg/L以下的低浓度范围外，其测定值相对误差与气相色谱法测定总值的相对误差相近。2. 此法中的反应是在严格的pH值条件下进行的，最适pH值为1.60.1。pH值高于2.0时，色度加剧，pH值低于1.0时，颜色难以稳定，易消失。3. 如果所做的空白测定含量酸量超过200mg/L时必须用氢氧化钠蒸馏提纯己二醇 。4. 酸性氯化铁配制好后，应静置过夜，弃去沉淀。5.必