药物分析第七章芳香胺类药物分析

芳香胺类药物的分析AnalyticalofAromaticamines,Contents,芳香胺(Aromaticamines),芳胺类芳烃胺类,（1）,（2）,（1）,（2）,芳胺类药物分为两类,芳伯氨基未被取代,芳伯氨基被酰化,一、对氨基苯甲酸酯类药物的基本结构与主要化学性质,（一）基本结构与典型药物,苯佐卡因,盐酸普鲁卡因,盐酸丁卡因,盐酸普鲁卡因胺,1.芳伯氨基特性：重氮化偶合反应；芳醛缩合成Schiff碱；易氧化变色等。盐酸丁卡因无此特性。,（二）主要理化性质,水解特性：分子结构中的酯键或酰胺键易水解，除盐酸丁卡因水产物为对丁氨基苯甲酸外，上述均为对氨基苯甲酸。,弱碱性：除苯佐卡因外，其余均含有叔胺氮的侧链，故具有弱碱性，与生物碱沉淀剂反应，非水滴定。,4.其它特性：因结构中有芳伯氨基或同时具有脂烃胺侧链，其游离碱多为油状液体或低熔点固体，难溶于水，可溶于有机溶剂。其盐酸盐则易溶于水。,二、酰胺类药物的基本结构与主要化学性质（一）基本结构与典型药物,对乙酰氨基酚（扑热息痛）,醋氨苯砜,盐酸布比卡因,盐酸利多卡因,1.水解后显芳伯氨基特性：分子结构中含有芳酰氨基，酸水解后显芳伯氨基的特性反应。注意空间位阻的影响。2.水解产物易酯化：对乙酰氨基酚和醋氨苯砜，酸水解生成醋酸，在硫酸中与乙醇反应，发出醋酸乙酯香味。,（二）主要化学性质,3.酚羟基特性：对乙酰基酚有游离酚羟基；醋氨苯砜酸水解有酚羟基，可与FeCl3发生显色反应，可相互区别。4.弱碱性：利多卡因和布比卡因烃胺侧链有叔胺氮，显碱性，可与生物碱沉淀剂发生沉淀反应，可相互区别。5.与金属离子发生沉淀反应：利多卡因和布比卡因酰氨基上氮可与Cu2+,Co2+生成有色配位化合物沉淀。,三、鉴别试验,（一）重氮化-偶合反应分子结构中含有芳伯氨基或潜在芳伯氨基的药物，均可发生此反应。,Ar-NH2,HCl,NaNO2,重氮盐,OH-,-萘酚,橙黄猩红色,直接反应：苯佐卡因、盐酸普鲁卡因、盐酸普鲁卡因胺,间接反应：对乙酰氨基酚、醋氨苯砜,利多卡因和布比卡因由于空间位阻很难发生此反应。,丁卡因虽无芳伯氨基，但可与NaNO2反应生成N亚硝基化合物的乳白色沉淀。,（二）与三氯化铁反应,对乙酰氨基酚+FeCl3,蓝紫色化合物,1.与铜和钴离子反应：利多卡因与硫酸铜生成蓝紫色配位化合物；与氯化钴生成亮绿色沉淀。,（三）与金属离子反应,2.羟肟酸铁盐反应基于普鲁卡因胺分子中的芳酰胺结构。,3.与汞离子反应,盐酸利多卡因+H2NO3+Hg(NO3)2,黄色,对氨基苯甲酸酯H2NO3+Hg(NO3)2,红色或橙黄色,芳酰胺类,对氨基苯甲酸酯类,1.盐酸普鲁卡因的鉴别,(四)水解产物反应,2.苯佐卡因的鉴别,苯佐卡因+NaOH,乙醇,乙醇+I2+NaOH,CHI3（碘仿臭气，黄色沉淀）,(五)制备衍生物测熔点,1.三硝基苯酚衍生物的制备：利多卡因和布比卡因,2.硫氰酸盐衍生物的制备：盐酸丁卡因,（六）紫外特征吸收光谱,（七）红外吸收光谱,盐酸普鲁卡因盐酸普鲁卡因胺,波数cm-1波数cm-1,酯羰基C=O1692酯基C-O1271,1170,1115二乙胺盐N-H25852645（略向高波数）1550（N-H酰胺带）1280（N-H酰胺带）,（一）对乙酰氨基酚中的特殊杂质检查1.乙醇溶液的澄清度与颜色：因其生产工艺用铁粉作还原剂，可能带入，致使乙醇溶液产生混浊，中间体对氨基酚易氧化产生有色化物，在乙醇溶液中显橙红色或棕色。,四、特殊杂质检查,检查方法：配制0.1g/ml本品乙醇溶液，溶液应澄清，无色；如显混浊，与1号浊度标准液比较，不得更浓；如显色，与棕红色2号或橙红色2号标准液比较，不得更深。,2.有关物质检查：Ch.P是以对氯苯乙酰胺为对照品，采用TLC法中的杂质对照品法。,3.对氨基酚检查：利用对氨基酚在碱性条件下可与亚硝基铁氰化钠生成蓝色配位化合物，采用比色法。,(二)盐酸普鲁卡因注射液中对氨基苯甲酸的检查,为什么要检查？,怎样检查？,TLC法，对氨基苯甲酸对照品对照，对二甲氨基苯甲醛溶液显。,容量分析方法,色谱法,分光光度法,亚硝酸钠滴定法,非水溶液滴定法,五、含量测定,spectrometry,sodiumnitritemethod,non-aqueoustitrimetry,volumetricanalysis,chrometography,（一）亚硝酸钠滴定法Ar-NH2;Ar-NHCOR;Ar-NO2均可采用此法Ch.P中的苯佐卡因；盐酸普鲁卡因和盐酸普鲁卡因胺及其制剂可直接采用本法；醋氨苯砜及注射液水解后用本法。,原理：,条件：1、加入适量溴化钾加快反应2、加入过量盐酸1:2.563、室温10304、滴定管尖端插入液面下滴定,终点指示方法：1、永停法2、外指示剂法（碘化钾淀粉）,测定主要条件：,(1)加KBr增加反应速度,重氮化的反应历程为：,NaNO2+HCl,HNO2+NaCl,HNO2+HCl,NOCl+H2O,KHCl,KBr+HCl,HBr+KCl,HNO2+HCl,NOBr+H2O,KKBr,KHBr比KHCl大300倍,生成NOBr量大得多加快反应速度,(2)加过量HCl加速反应：重氮化速度加快；重氮盐在酸性介质中稳定；防止生成氨基偶氮化合物。Ar-N2+Cl-+H2N-ArAr-N=N-NH-Ar+HCl一般摩尔比为Ar-NH2:HCl=1:2.56。,(3)室温条件下滴定:温度高反应速度快；每升高10加快2.5倍,太高,可使Ar-N2+Cl-+H2O,Ar-OH+N2+HCl,(4)滴定管尖端插入液面下滴定,3.指示终点的方法(1)用停滴定法溶液检流计终点前：无过量无电流HNO2终点时：有过量有电流（使指针偏离零HNO2永停在某一位置）(2)外指示剂法用KI-淀粉指示剂指示终点的原理：2NaO2+2KI+4HCl2NO+I2+2KCl+2NaCl+2H2O,盐酸丁卡因盐酸利多卡因,侧链烃胺的叔胺氮,侧链哌啶环的叔胺氮,弱碱性,高氯酸非水滴定,注：滴定前滴加醋酸汞溶液，以除去氢卤酸的干扰,盐酸丁卡因加醋酐以突出终点；例：盐酸利多卡因的非水滴定反应过程：,指示剂：结晶紫,指示剂：萘酚苯甲醇,盐酸布比卡因,(二）非水溶液滴定法,1.对乙酰基酚原料的含量测定在0.4%NaOH介质中；257nmD%E1%1cm样E1%1cm标100；E1%1cm7152.对乙酰基酚片溶出度测定（测定条件同上）1片稀HCl24ml+H2O1000ml精密量取5ml+0.4%NaOH10ml+H2O100ml257nm测定A。W110005100100C（g/100ml)W(g)=200C;C=A/715溶出度W标示量10080为合格,（三）分光光度法,中性条件下的重氮化反应,（四）比色法,盐酸普鲁卡因+1,2-蒽醌-4-磺酸钠,pH4-9,棕红色化合物，max482nm处测定A,（五）盐酸普鲁卡因胺的快速荧光测定,ex400nm（激发波长）、em485nm（发射波长）处测定荧光强度，标准曲线法定量。,盐酸普鲁卡因胺+荧胺,pH7.5,荧光物,以苯甲酸为内标，可以同时测定盐酸普鲁卡因注射液中的普鲁卡因及其降解产物对氨基苯甲酸（PABA），不需分离提取，准确简便。色谱条件（色谱柱、流动相、检测器）测定方法（供试品溶液、对照品溶液的制备，进样量，计算方法）,（六）HPLC法,第二节苯乙胺类药物的分析,一、苯乙胺类药物的基本结构与主要化学性质（一）基本结构与典型药物,*,拟肾上腺素类药物，分子结构中具有苯乙胺基本结构,肾上腺素(adrenaline)盐酸克伦特罗(clenbuterolhydrochloride)硫酸沙丁胺醇(salbutamolsulfate)盐酸麻黄碱(ephedrinehydrochloride),R1R2R3HX,常见的苯乙胺类药物,（二）主要化学性质,1.弱碱性本类药物结构中有烃氨基侧链，为仲胺氮显弱碱性。2.酚羟基特性本类药物结构中有酚羟基，可与FeCl3;发生氧化。3.光学活性多数药物结构中有手性碳原子，具有旋光性。4.苯环取代基特性如盐酸克伦特罗芳伯氨基；紫外、红外吸收特性进行定性、定量分析。,与三氯化铁反应、与甲醛硫酸反应,二、鉴别试验,氧化反应（酚羟基，易被碘、过氧化氢、铁氰化钾氧化呈现不同颜色）,肾上腺素,碘或过氧化氢,中性或酸性,肾上腺素红,放置,棕红色多聚体,盐酸异丙肾上腺素,偏酸性条件,碘,异丙肾上腺素红,硫代硫酸钠,重酒石酸去甲肾上腺素,酒石酸氢钾饱和液,pH3.56,碘试液,放置5min,硫代硫酸钠,溶液为无色或仅显微红色或淡紫色,肾上腺素或盐酸异丙肾上腺素,明显的红棕色或紫色,淡红色溶液,(四）紫外特征吸收与红外吸收光谱,例如：盐酸异丙肾上腺素0.05mg/mlmax=280nmA=0.50,这一类药物均可采用红外吸收光谱进行鉴别,(五）与亚硝基铁氰化钠(Rimini试验）是鉴别脂肪伯氨基的特殊反应；可用于重酒石酸间羟胺鉴别。,D亚硝基铁氰化钠丙酮Na2CO3,红紫色,(六)双缩脲反应是鉴别芳环氨基醇的特殊反应；可用于盐酸麻黄碱，盐酸伪麻黄碱鉴别：,DCuSO4+NaOH,显蓝紫色,乙醚，醚层(紫红色)水层(蓝色),(一)酮体检查本类药物在生产过程中多采用酮体氢化制得，若氢化不完全，易引入酮体杂质。采用UV法检查：利用酮体在310nm有吸收，本类药物无吸收。例如：肾上腺素本项检查配2.0mg/ml=310nmA0.05盐酸去氧肾上腺素配2.0mg/ml=310nmA0.02盐酸异丙肾上腺素配2.0mg/ml=310nmA0.15,三、特殊杂质检查,(二)有关物质的检查采用TLC法中的高低浓度对比法进行检查。,(三)盐酸苯乙双胍中有关双胍的检查采用PC法中的杂质对照法进行检查。,原料：非水溶液滴定法、溴量法制剂：,比色法,提取容量法,紫外分光光度法,高效液相色谱法,四、含量测定,1、非水溶液滴定法弱碱性冰醋酸为溶剂醋酸汞消除氢卤酸的干扰结晶紫为指示剂（盐酸甲氧明的指示剂为萘酚苯甲醇，也可电位法指示终点）若碱性较弱则加醋酐使突跃明显,例：重酒石酸去甲肾上腺素直接滴定盐酸克伦特罗加醋酸汞消除氢卤酸干扰；由于碱性较弱，电位法指示终点硫酸沙丁胺醇加入醋酐以增大突跃，结晶紫为指示剂,注：加入醋酐注意防止氨基被乙酰化，所以在冰醋酸溶解样品后应放冷后再加醋酐。,(二)溴量法本类药物重酒石酸间羟胺、盐酸去氧肾上腺素及其注射液用此法。,基本原理：,(三)比色法利用药物分子结构中的Ar-OH与Fe3络合显色，进行比色测定；也可利用药物分子结构中的Ar-NH2重氮化偶合显色，进行比色。,例如：盐酸克伦特罗栓的含量测定,上述偶合剂可与HNO2显色，干扰比色测定，可先加氨基磺酸铵分解过量的HNO2。,HNO22H2NSO3NH4,2N2+(NH4)2SO4+H2SO4+H2O,(四)提取酸碱滴定法,硫酸苯丙胺的含量测定：,BH2SO4+NaOH+NaCl,乙醚,提取B,+H2SO4,蒸去乙醚,终点,(五)荧光分光光度法,肾上腺素测定：,ex410nm、em520nm处测定荧光强度，对照法定量。,肾上腺素+I2,肾上腺红,一定条件下,N-甲基-3,5,6-三羟基吲哚,(六)HPLC法例一、重酒石酸去甲肾上腺素注射液的测定采用R-HPLC-UV法；用外标一点法进行定量测定。例二、血浆中儿茶酚胺类（肾上腺素类）药物的测定采用R-HPLC-EChD法；用标准曲线法进行定量测定。,练习与思考,A型题,1盐酸普鲁卡因注射液中检查的特殊杂质是A.水杨醛B.间氨基酚C.水杨酸D.对氨基苯甲酸E.氨基酚2对乙酰氨基酚中检查的特殊杂质是A.水杨醛B.间氨基酚C.对氨基酚D.苯甲酸E.苯酚3肾上腺素和盐酸去氧肾上腺素中检查的特殊杂质是A.水杨醛B.间氨基酚C.对氨基酚D.酮体E.苯甲酸,B型题,A。硫酸铜反应B.氧化反应C.还原反应D.水解后重氮化-偶合反