植物组织培养基配制.doc

培养基的配制植物组织培养中常用的一种培养基是MS培养基。MS培养基的配制包括以下步骤。培养基母液的配制和保存 MS培养基含有近30种营养成分，为了避免每次配制培养基都要对这几十种成分进行称量，可将培养基中的各种成分，按原量的20倍或200倍分别称量，配成浓缩液，这种浓缩液叫做培养基母液。这样每次使用时，取其总量的1/20(50 mL)或1/200(5 mL)，加水稀释，制成培养液。现将制备培养基母液所需的各类物质的量列出，供配制时使用。大量元素(母液) mgLNH4NO3 33 000KNO3 38 000CaCl22H2O 8 800MgSO47H2O 7 400KH2PO4 3 400微量元素(母液)KI 166H3BO3 1 240MnSO44H2O 4 460ZnSO47H2O 1 720Na2MoO42H2O 50CuSO45H2O 5CoCl26H2O 5铁盐(母液)FeSO47H2O 5 560Na2-EDTA2H2O 7 460有机成分(母液)A肌醇 20 000B烟酸 100盐酸吡哆醇(维生素B6) 100盐酸硫胺素(维生素B1) 100甘氨酸 400以上各种营养成分的用量，除了母液为20倍浓缩液外，其余的均为200倍浓缩液。上述几种母液都要单独配成1 L的贮备液。其中，母液、母液及母液的配制方法是：每种母液中的几种成分称量完毕后，分别用少量的蒸馏水彻底溶解，然后再将它们混溶，最后定容到1 L。母液的配制方法是：将称好的FeSO47H2O和Na2-EDTA2H2O分别放到450 mL蒸馏水中，边加热边不断搅拌使它们溶解，然后将两种溶液混合，并将pH调至5.5，最后定容到1 L，保存在棕色玻璃瓶中。各种母液配完后，分别用玻璃瓶贮存，并且贴上标签，注明母液号、配制倍数、日期等，保存在冰箱的冷藏室中。MS培养基中还需要加入2，4-二氯苯氧乙酸(2，4-D)、萘乙酸(NAA)、6 苄基嘌呤(6BA)等植物生长调节物质，并且分别配成母液(0.1 mg/mL)。其配制方法是：分别称取这3种物质各10 mg，将2，4-D和NAA用少量(1 mL)无水乙醇预溶，将6BA用少量(1 mL)的物质的量浓度为0.1 mol/L的NaOH溶液溶解，溶解过程需要水浴加热，最后分别定容至100 mL，即得质量浓度为0.1 mg/mL的母液。配制培养液 用量筒或移液管从各种母液中分别取出所需的用量：母液为50 mL，母液、A和B各5 mL。再取2，4-D 5 mL、NAA 1 mL，与各种母液一起放入烧杯中。配制培养液时应注意：在使用提前配制的母液时，应在量取各种母液之前，轻轻摇动盛放母液的瓶子，如果发现瓶中有沉淀、悬浮物或被微生物污染，应立即淘汰这种母液，重新进行配制；用量筒或移液管量取培养基母液之前，必须用所量取的母液将量筒或移液管润洗2次；量取母液时，最好将各种母液按将要量取的顺序写在纸上，量取1种，划掉1种，以免出错。溶化琼脂 用粗天平分别称取琼脂9 g、蒸糖30 g，放入1 000 mL的搪瓷量杯中，再加入蒸馏水750 mL，用电炉加热，边加热边用玻璃棒搅拌，直到液体呈半透明状。然后再将配好的混合培养液加入到煮沸的琼脂中，最后加蒸馏水定容至1 000 mL，搅拌均匀。需要注意的是，在加热琼脂、制备培养基的过程中，操作者千万不能离开，否则沸腾的琼脂外溢，就需要重新称量、制备。此外，如果没有搪瓷量杯，可用大烧杯代替。但要注意大烧杯底的外表面不能沾水，否则加热时烧杯容易炸裂，使溶液外溢，造成烫伤。调pH 用滴管吸取物质的量浓度为1 mol/L的NaOH溶液，逐滴滴入溶化的培养基中，边滴边搅拌，并随时用精密的pH试纸(5 47 0)测培养基的pH，一直到培养基的pH为5 8为止(培养基的pH必须严格控制在5 8)。培养基的分装 溶化的培养基应该趁热分装。分装时，先将培养基倒入烧杯中，然后将烧杯中的培养基倒入锥形瓶(50 mL或100 mL)中。注意不要让培养基沾到瓶口和瓶壁上。锥形瓶中培养基的量约为锥形瓶容量的1/51/4。每1 000 mL培养基，可分装2530瓶。培养基分装完毕后，应及时封盖瓶口。用2块硫酸纸(每块大小约为9 cm9 cm)中间夹1层薄牛皮纸封盖瓶口，并用线绳捆扎。最后在锥形瓶外壁贴上标签。高压灭菌 培养基的高压灭菌包括以下几个步骤。第一，码放锥形瓶。将装有培养基的锥形瓶直立于金属小筐中，再放入高压蒸气灭菌锅内。如果没有金属小筐，可以在两层锥形瓶之间放一块玻璃板隔开。第二，放置其他需要灭菌的物品。将其他需要灭菌的物品也放入高压蒸气灭菌锅内，如装有蒸馏水的锥形瓶、带螺口盖的玻璃瓶、烧杯、广口瓶(以上物品都要用牛皮纸封口)，用牛皮纸包裹的培养皿、剪刀、解剖刀、镊子、滤纸、铅笔等。第三，灭菌。待需要灭菌的物品码放完毕，盖上锅盖。在98 kPa、121.3 下，灭菌20 min。灭菌后取出锥形瓶，让其中的培养基自然冷却凝固。最好放置1 d后再使用。MS培养基配方:成分 分子量 使用浓度(mg/L)硝酸钾KNO3 101.11 1900硝酸铵NH4NO3 80.04 1650大量元素 磷酸二氢钾 KH2PO4 136.09 170硫酸镁MgSO4.7H2O 246.47 370 氯化钙CaCl2.2H2O 147.02 440碘化钾KI 166.01 0.83硼酸H3BO3 61.83 6.2硫酸锰MnSO4.4H2O 223.01 22.3微量元素 硫酸锌ZnSO4.7 H2O 287.54 8.6钼酸钠Na2MoO4.2 H2O 241.95 0.25硫酸铜CuSO4.5 H2O 249.68 0.025氯化钴CoCl2.62 237.93 0.025铁盐 乙二胺四乙酸二钠Na2.EDTA 372.25 37.3硫酸亚铁FeSO24.7H2O 278.03 27.8 肌醇 100 甘氨酸 2有机成分 盐酸硫胺素VB1 0.1盐酸吡哆醇VB6 0.5烟酸VB5或VPP 0.5蔗糖sucrose 342.31 30g/LB5培养基的组成和配方组成成分 数量(mg/l） KNO3 2500 大量元素 CaCl22H2O 150 MgSO47H2O 250 (NH4)2SO4 134KI 0.75H3BO4 3.0MnSO44H2O 10 微量元素 ZnSO47H2O 2.0 Na2MoO42H2O 0.25 CoCl26H2O 0.025 CuSO45H2O 0.025铁盐 Na2-EDTA 37.3 FeSO47H2O 27.8 肌醇 100烟酸 1.0 有机成分 盐酸吡哆醇 1.0 盐酸硫铵 10 N6培养基配方组成成分 数量(mg/l）硝酸钾(KN03) 2830硫酸铵(NH4SO4) 463大量元素 氯化钙(CaCl22HzO) 166硫酸镁(MgSO47H20) 185磷酸二氢钾(KH2PO4) 400硫酸亚铁(FeSO7H20) 27.8硫酸锰(MnS044H20) 4.4微量元素 硫酸锌(ZnSO47H20) 1.6硼酸(H2BO3) 0.8碘化钾(KI) 1.6 甘氨酸 2有机成分 烟酸 0.5盐酸硫胺素(维B1) 1.0盐酸吡哆素(维B6)本发明涉及一种适宜蓝莓试管苗增殖的培养基组合物及其方法，步骤如下：）培养基包括基本培养基和组培各阶段培养基的各组分与每升所含重量为：（）基本培养基：，其中白糖，琼脂，；（）诱导培养基：；（）叶片诱