组织因子相关微粒与肿瘤相关血栓的研究进展.doc

组织因子相关微粒与肿瘤相关血栓的研究进展2011年4月第l7卷第7期MedicalRecapitulate,Apr2011V0l_7.7组织因子相关微粒与肿瘤相关血栓的研究进展唐云龙,秦燕(综述),滕镕(审校)(南通大学附属医院血液内科,江苏南通226001)中图分类号:R730.6文献标识码:A文章编号:1006-2084(2011)07-0976-04血栓形成是恶性肿瘤患者常见的并发症,是仅次于恶性肿瘤本身引起患者死亡的第二位原因,严重影响了肿瘤患者的生存时问和生活质量,因此恶性肿瘤租血栓形成的相关性引起临床的广泛关注.早在19世纪中期,有学者认识到肿瘤患者易患静脉栓塞,其中某些类型(如恶性神经胶质瘤,卵巢癌,胰腺癌,淋巴瘤等)有更高的倾向性,同时,临床上首发表现为特发性静脉栓塞的患者存在肿瘤的可能性为10%-20%,尸检结果可高达50%L3,4j,这些证明肿瘤和血栓之间存在不可分割的联系.肿瘤患者在使用了细胞毒药物后发生静脉血栓的风险进一步增加.肿瘤患者易发生血栓的机制尚不明确,可能因素包括炎性细胞因子,循环细胞一组织因子相关微粒等.组织因子相关微粒(mieropartieletissuefactor,MPTF)是细胞生长巾的脱落质膜片段,有研究表明其升高预示着血栓风险的增加,现就MPTF与恶性肿瘤发生血栓的关系予以综述.1MP.TF1.1MPTF的来源Chargaff和West在1946年发现血小板游离血浆中存在一种促进血栓生成的因素,但循环微粒的概念是Wolf在电子显微镜下观察特发性血小板减少性紫癜患者血浆第一次提出来的,当时命名为”血小板粉尘”.微粒大小不等,其直径波动于0.051.0Ixm,主要由蛋白和脂类组成.微粒又名微泡或细胞粉尘,是炎症,易凝状态下细胞基金项目:江苏省”科教兴卫工程”开放课题(Kb200948)激活和凋亡释放于血浆的质膜片段,来源于红细胞,白细胞,血管内皮细胞,单核细胞,血小板等.无核细胞(如血小板和红细胞)不进行典型的凋亡,但在激活状态下,例如血小板在补体,ADP,胶原,凝血酶激活下也易产生微粒.健康者血浆中80%以上微粒来源于血小板,在病理状态下,红细胞,白细胞等可相对于正常生理状态下产生更多微粒.这些不同来源的微粒具有不同的磷脂结构,且分别特异性表达不同的抗原标志,其促凝活性也是不同的.组织因子表达于血浆中的质膜组成的结合体就是MPTF,其形成是由于细胞膜不对称分布的磷脂在断裂的同时会以出芽方式脱落形成的小泡状结构.静息细胞中,细胞质的小叶主要是由磷脂酰丝氨酸和磷脂酰乙醇胺构成,胞外小体主要是鞘磷脂和磷脂酰胆碱合成的,这些磷脂的分布是由氨基磷脂转位酶调控的,当细胞被激活时,通常是钙通道的激活伴随着酶控下磷脂酰丝氨酸易位,磷脂酰丝氨酸由质膜内层进入外层产生微粒,另外,血小板激活产生微粒过程中,需要激活VlIa,IXa,Va和Xa凝血因子”.1.2MPTF的生理学和病理学功能Giesen等第一次发现了循环血中组织因子的促凝血潜在功能,随着免疫电子显微镜检测的发展,Falati等利用激光诱导内皮损伤模型,观察损伤修复中血栓形成,发现有大量MPTF聚集在血小板表面,这一团队随后又证明伴随着MP-TF聚集的血栓形成是依赖于P一选择素结合血小板上P一选择素糖蛋白配体1(Pselectinglycoproteinligand1,PSGL.1)163.Butenas等发现,在正常人血浆中MPTF聚集不会激发体内血栓的形成,血小板激活也不会导致组织因子抗原活性增多.除了肿瘤相关血栓,MPTF与其他血管性疾病也有关联.2型糖尿病患者MPTF的数目比健康者增加2倍以上,还有研究发现,糖化血红蛋白水平欠佳的糖尿病患者体内MPTF促凝性医学综述2011年4月第17卷第7期MedicalRecapitulate.Apr2011.Vo1.17.No.7是上升的,糖尿病患者发生急性心肌梗死期间,血小板,内皮细胞,单核细胞源性的MPTF是增多的,可能是加重血管闭塞的原因.另外,心脏移植手术后发生急性排斥的患者,MPTF的促凝性是显着增加的.自身免疫性疾病导致的血栓也有相关报道,Combes等研究发现,抗磷脂综合征和狼疮继发的血栓与内皮细胞源性微粒的升高相关,还有血小板源性微粒升高与系统性红斑狼疮疾病活动和抗磷脂抗体存在无关.1.3MPTF标本的留取和保存血中微粒数目相当少,检测准备过程的标准化要求相当重要.实验检测前内容包括血样本采集,分离和储存.分离又包括微粒悬液的离心和悬浮.抗凝剂的选择目前尚有争议,现在最常用的是枸橼酸盐,也有认为其他抗凝剂可同样用来抗凝,其他的可能影响包括血浆微粒采集时使用止血带导致的静脉阻滞,储存微粒悬液温度和采集完成到检测之间的储存时间等.微粒是通过提取乏血小板血浆或血液超离心得到的,研究表明,经乏血小板血浆提取途径,40%的健康者通过流式检测不出MP-TF,另外,储存过程中微粒悬液冻融会给实验结果带来影响,数据表明磷脂酰丝氨酸表达的annexin+在冻融后表达提高20倍,说明冻融可以促使微粒表面膜上磷脂酰丝氨酸向血浆中释放.1.4MPTF的检测目前检测MPTF的研究方法都存在各种各样的干扰,没有标准化实验检测方法.目前研究检测血小板微粒的方法最多,其中流式细胞术被认为是最普遍实用的手段,流式检测血小板微粒时通过锁定annexinv这一结合位点标志和血小板特异性抗原(CD.,CDCD6CD6),这样可以有效地排除白细胞和红细胞源性微粒的干扰.Robert等通过流式实验证明,利用0.5m和0.9m荧光小球以2:1的比例设门,并锁定annexinv和CD两个标志,同一标本在不同时间检测出的微粒数变异小,可重复性强.流式细胞术缺点在于噪声环境下检测微粒的特异性和敏感性不足,其他方法如激光介导荧光毛细管电泳法和声抗流式细胞术,利弊正在评估中.另外一些研究团队运用酶联免疫吸附测定法以磷脂酰丝氨酸特异性抗原作为靶点检测微粒,这种方法的好处是可以直接检测微粒,但是不易分辨微粒的来源.2MP?rF在肿瘤方向的临床研究2.1实体肿瘤活性组织因子的复合产物通过A因子在体内引起凝血,不同的组织学的肿瘤细胞都可以表达组织因子,Khorana等发表了回顾性研究,MPTF高的11例胰腺癌患者中有2例发生了?977?血栓,组织因子的高表达与26%发生血栓的胰腺癌患者有关,组织因子表达低的发生血栓的仅有4.5%.还有学者的研究表明,卵巢癌患者中1O例存在静脉血栓的患者都有组织因子高表达,大部分没有血栓的患者组织因子低表达.Hron等报道,结肠癌患者循环MPTF数目是正常健康者的2倍,同时伴有D一二聚体水平的升高,而且,增高的循环微粒主要是来自血小板.Tesselaar等论证了相对于不存在静脉血栓栓塞的恶性肿瘤患者和特发性静脉血栓栓塞患者,并发静脉血栓栓塞的转移性乳癌和胰腺癌有更多的循环微粒和其表面附着的组织因子活性,研究还论证了微粒表面附着的组织因子活性强和附膜蛋白的高表达与预后差呈正相关.Zwicker等得出了相似的结论,转移性胰腺癌和转移性乳癌患者体内MPTF促凝活力是显着提高的,还有运用声阻流式检测发现胰腺癌,卵巢癌,乳癌,直肠癌患者血中MP-TF数目明显升高,而且在手术后MPTF数目有明显的下降,另外,最初没有静脉血栓的60个癌症患者,1年内发生血栓的有38%,为MP-TF高者,不高者发生率为0.2.2血液系统疾病循环微粒在血液系统疾病中得到了进一步研究,Hugel等通过数据表明,来源于内皮细胞,血小板,单核细胞的微粒促凝性的增加可某种程度解释阵发性睡眠性血红蛋白尿患者的趋血栓状态,还有带有CD.”和CD.的微颗粒增多是阵发性睡眠性血红蛋白尿导致慢性溶血相关的内皮损伤结果.2.3化疗和抗血管生成治疗有研究表明,运用化疗和抗血管生成治疗的肿瘤患者相对于没有治疗的肿瘤患者发生血栓的概率明显增加.内皮细胞是化疗和抗血管生成的主要靶点,但目前还无有力的证据说明化疗和抗血管生成治疗会导致内皮细胞和(或)血小板源性微粒增高而使血栓发生.Lechner等通过体外研究发现,予以顺铂抗内皮细胞治疗,内皮细胞释放的微粒具有非组织因子依赖的促凝活性,但患者内皮细胞源性和血小板源性微粒数除第二和第三次化疗后有短暂的回跳外,总体趋势是减少的.在另一个体外实验中,肿瘤患者接受SU5416(主要机制是通过作用于酪氨酸激酶受体来抑制内皮生长因子受体)抗血管生成治疗和化学治疗后,检测体内内皮细胞激活标志(vonWiUebrand因子,可溶性E选择素,组织因子)和血浆凝血活性标志(凝血酶一抗凝血酶复合物,凝血酶原碎片1+2,内源性凝血酶),单用SU5416的患者,内皮细胞激活标志明显升高,单用化疗的凝血活性标志明显异常,但在这项研究中没有检测循环微粒,这项实验表明化医学综述2011年4月第17卷第7期MediealRecapitulate.Aor2011.Vo1.17.No.7ATP敏感性钾通道开放剂的脑保护作用研究陈晓仰(综述),林霓阳(审校)(汕头大学医学院第一附属医院儿科,广东汕头515041)中图分类号:R614文献标识码:A文章编号:1006-2084(2011)074)979-03摘要:细胞上存在两种三磷酸腺苷敏感性钾(KATP)通道,一是位于细胞膜上的ATP敏感的钾通道;二是位于线粒体膜上的ATP敏感的钾通道.KATP通道广泛存在于各种脑区,若给予KA口开放剂则可以使其开放发挥对脑的保护作用.越来越多的研究表明,K通道在脑缺氧缺血等病理状态下被激活开放,使大量l(+外流,细胞膜超极化,从而使Na+,Ca”内流减少,避免或减轻钙超载,减少能耗,减轻兴奋性氨基酸及氧自由基释放,保护脑细胞.关键词:三磷酸腺苷敏感性钾通道;开放剂;保护作用RoleofATP-sensitivePotassiumChannelOpenersinBrainProtectionCHENXiao-yang,LINNiyang.(DepartmentofPediatrics,theFirstAffdtedHospitalofMedwdCollegeofShantouUniversity,Shantou515041,China)Abstract:Twodistinctactivatedinpathologicalconditions,suchascerebralhypoxlaandischemia,resultinginthemassiveoutflowofpotassiumcurrentandcellmembranehyperpolarization.Theconsequentdecreaseintheinflowofttdiunlandcalciumcurrentsisreduced,whichpreventsorminimizescalciumoverload,lowemenergyconsumption,reducestheleaseofexeitoryaminoacidsandoxygenfreemcals,andprotectsbraincells.Keyords:ATP-sensitiveKchannel;Openers;Protectivefunction三磷酸腺苷敏感性钾(ATP-sensitive,KA口)通道是电压非依赖性配体门控通道,由Noma于1983年首先在豚鼠心肌细胞上发现,随后的研究还发现该通道也存在于血管,胰腺,骨骼肌,神经元等组织,其开放可使血管扩张并对心脏及神经细胞产生保护作用,关闭则促进胰岛素分泌.到目前为止,K口通道开放剂是研究最多,应用最广的钾通道开放剂,它已有18个化合物进入临床实验阶段,并被成功地应用于抗高血压,抗心肌缺血和治疗非胰岛素依赖型糖尿病等多种疾病.最近研究显示,K册通道也广泛存在于中枢神经系统中,而且,K册通道开放剂在脑缺血损伤中同样可以发挥重要的保护作用.1KTP通道的分类与结构K册通道分为两类:位于细胞膜上的膜K册通基金项目_2009年广东省科技计划项目(200911030801326)?979?道;位于线粒体膜上的线粒体K通道.分子生物学和电生理学实验证实,膜K册通道是由四个内向整流钾通道(inwardlyrectifiedKchannels,I(iI6.x家族)亚基和四个调节性磺脲类受体(sulfonyluresreceptor,SUR)组成的八聚体,I(iI6.x家族有l(iI6.1及I(iI6.2两组成员,由390个氨基酸组成,含有两个疏水跨膜区段,分别由一个孔球与胞质侧氨基,羧基末端相连,l(ir6.X构成的K册中心孑L道包含ATP结合位点.SUR有SUR1,SUR2A,SUR2B三种类型,属于ABC(ATPbindingcassette)结合蛋白家族成员.在心肌细胞主要为SUR2A/Kir6.2,在神经细胞主要为SUR1/Kir6.2.膜K通道主要生理功能包括调节糖稳态和参与调解细胞电活动使之适应细胞能量代谢的需要.线粒体K通道可能也属于Kit6.X家族,其分子结构仍处于研究中,其亚基组合可能为SUR1/Kil1.1,该通道的主要生理功能是:维持线粒体内钾稳态,调节线粒体体积;在线粒体能量化过程中维持一定跨膜电位.该通道在对细胞缺氧损伤的保护机制中可能占重要地位.2K通道在中枢神经系统的分布K椰通道广泛分布于中枢神经系统,其在脑中的分布情况极不均衡,通过放射自显影定量分析方法arandomizedtrialofadiuvanttherapyforwomenwithbreastcancel”.NationalC卸cerInstituteofCanadaClinicalTrialSGroupBreastCance