乳制品中硫氰酸根的测定-标准草案(离子色谱法).doc

原料乳及乳制品中硫氰酸根的检测Determination of thiocyanate ion in raw milk and dairy products国家食品质量安全监督检验中心（北京海淀区产品质量监督检验所）2前 言本标准的附录A为资料性附录。本标准由 提出。本标准由 归口。原料乳及乳制品中硫氰酸根的检测-离子色谱法1 范围本标准规定了离子色谱电导检测器（或紫外检测器）检测原料乳及乳制品中硫氰酸根的方法。本标准适用于原料乳及乳制品中硫氰酸根的测定。本标准方法的定量限：液态乳2.0mg/kg，乳粉和其他乳制品10.0mg/kg。2 规范性引用文件下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有的修改单（不包括勘误的内容）或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准。3 原理 样品经水提硫氰酸根后，乙腈沉淀蛋白，过脱脂柱净化，进阴离子分析柱，通过抑制器后进入电导检测器或紫外检测器进行检测，外标法定量。4 试剂在分析中所使用试剂按下述说明，用水为GB/T 6682-2008中规定的一级水。4.1 乙腈（色谱纯）。4.2 硫氰酸钠（优级纯）。4.3 氢氧化钾（分析纯）。4.4 45 mmol/L氢氧化钾溶液：称取2.52 g氢氧化钾用水定容至1000 mL。4.5 70 mmol/L氢氧化钾溶液：称取3.92g氢氧化钾用水定容至1000 mL。4.6 标准储备液：称取硫氰酸钠0.1397g，用水定容至100 mL，硫氰酸根离子含量为1000mg/L，贮存于4冰箱中，有效期3个月。4.7 标准工作液：准确吸取硫氰酸根离子的标准储备液（4.5）1.0 mL于1000 mL 的容量瓶中，用水定容至刻度，硫氰酸根离子含量为1.0mg/L，贮存于4冰箱中，有效期3个月。4.8 标准系列：准确吸取硫氰酸根离子的标准储备液（4.6）0.0、4.0、8.0、20.0、40.0 mL于一组100 mL 的容量瓶中，用水定容至刻度，配得硫氰酸根离子浓度分别为0.0、0.040、0.080、0.200、0.400g/ mL的标准溶液。使用时现配。4.9 滤膜：0.45 m，水相。4.10 聚二乙烯基苯聚合物反相填料柱（或等效的脱脂柱，或商品化RP小柱）：250mg/3mL。4.11 海砂（分析纯）。5 仪器5.1 离子色谱仪（IC）：带电导检测器和抑制器（或紫外检测器），可进行二步梯度淋洗。5.2 分析天平：感量0.01 g和0.0001 g。5.3 冰箱：带4冷藏。5.4 超声波清洗器。6 分析步骤6.1样品前处理称取乳粉样品1.0g于10 mL比色管中，加水4mL使其充分溶解混匀，再加入乙腈定容至刻度，超声萃取10min后，于4冰箱中静置10min以沉淀蛋白。准确吸取上清液1mL，用水定容至10mL，将稀释后的溶液经过RP柱和0.45mm滤膜后，滤液待上机分析。称取4.0g液体乳于10 mL比色管中，再加入乙腈定容至刻度，超声萃取10min后，于4冰箱中静置10min以沉淀蛋白。准确吸取上清液1mL，用水定容至10mL，将稀释后的溶液经过RP柱和0.45mm滤膜后，滤液待上机分析。 称取其他乳制品（奶酪、奶油等）0.50g，加入2g海砂研磨均匀，转移至10 mL比色管中，加水4mL使其充分溶解混匀，再加入6mL乙腈振荡混匀，超声萃取10min后，于4冰箱中静置10min以沉淀蛋白。准确吸取上清液1mL，用水定容至10mL，将稀释后的溶液经过RP柱和0.45mm滤膜后，滤液待上机分析。6.2 离子色谱分离条件离子色谱柱参数：阴离子保护柱 IonPac AG 16 (50 mm4 mm)或相当者；阴离子分析柱IonPac AS 16 (250 mm4 mm)或相当者流速：1.0mL/min电导检测器：配4mm的阴离子抑制器，外接水抑制模式紫外检测器：波长220nm进样量：100 L淋洗液：氢氧化钾溶液梯度洗脱淋洗液梯度参考程序：时间/min氢氧化钾浓度/(mmol/L)0.045.013.045.013.170.018.070.018.145.023.045.06.3 测定取滤液和标准工作液各100 L(或相同体积)分别注入离子色谱仪，电导检测器或紫外检测器进行检测。以其标准溶液峰的保留时间定性，以其峰面积求出样液中被测物质的含量，供计算。7 结果计算试样中硫氰酸根的含量由色谱数据处理软件或按式（1）计算获得： C V f X= 。（1） m式中：X 试样中硫氰酸根的含量，单位为毫克每千克，mg/kg；C 试样中硫氰酸根峰面积对应的浓度，单位为微克每毫升（g/mL）；V 试样定容体积，单位为毫升（mL）；m 试样的量，单位为克（g）；f 稀释倍数。计算结果保留三位有效数字。8、 精密度在重复性条件下获得的两次独立测定结果的