标准菌株的复活、传代及性能确认操作规程.doc_第1页
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文档简介

1标准菌株复活 购回的标准菌株一般为安培装冻干粉剂,依照随产品附有的菌种复活方法,以及人间传染病微生物分类目录和实验室生物安全通用要求,在相应的生物安全水平下,开启包装。用75%酒精棉球擦拭安培瓶上部,可用砂轮或锉刀在安培瓶上部划一小痕迹,用无菌纱布包住安培瓶,两手分别捏住安培瓶上下两端,稍向外用力便可打开安培瓶。依据菌株特性选择合适的培养基和培养条件,用无菌吸管吸适量的液体培养基加到冻干块上,吹打混匀成悬液,将全部悬液移入含有5ml合适的液体培养基中,将管中残留的几滴悬液移种到斜面上,适宜的温度培养一定的时间。观察生长状况,可适当延长培养时间。2菌株的性能确认2.1纯度检查菌落形态取复活后的培养物,在相应的鉴别平板或非选择平板上划线分离,培养出单菌落,观察菌落形态是否符合该菌株要求,同一平板上的单菌落大小,形状、颜色、质地、光泽是否相似,对于出现两种以上形态的菌株,应再分别挑取单菌落划线,检测是否出现相同特征。2.2细胞形态取划线平板上的单菌落,革兰氏染色反应应符合要求,且呈现一致性。2.3生化鉴定必要时进行生化鉴定2.4污染处理 如发现菌株有污染,挑选目标菌培养成功后,将培养物灭菌销毁(12130min)3菌株的传代3.1标准储备菌株的制备标准储备菌株是在经多次传代后制备的多份相同的菌株。将复活后经过性能确认的菌株的斜面培养物,用0.85%的灭菌生理盐水0.5ml洗斜面菌苔成菌悬液将上述菌悬液吸入灭菌管中,加入0.5ml40%的灭菌甘油,混匀,密封。保藏温度为183.2工作菌株的制备由冻干或超低温保存的标准储备菌株经一次传代得到的菌株。工作菌株不宜再传代,工作菌株使用和储存过程中严格遵守无菌操作,即不存在交叉污染,可以多次使用

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