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cyclin E 与P27蛋白在子宫腺肌病中的表达及临床意义【摘要】目的探讨周期素E(cyclin E)与P27蛋白在于宫腺肌病中的表达及意义。方法对40例子宫腺肌病(观察组)采用免疫组织化学的方法(SP)检测cyclin E 与P27蛋白的表达，并与30例正常宫内膜组织(对照组)相比较。结果cyclin E 在子宫腺肌病中的表达明显高于正常宫内膜组织，P27蛋白在子宫腺肌病中的表达明显低于正常宫内膜组织，经统计学处理差异有显著性(P005)。在子宫腺肌病中，cyclin E 高表达及P27低表达与痛经、异位内膜浸润肌层深度及腺肌瘤的大小有关，而与月经过多无明显关系。结论cyclin E 及P27蛋白与子宫腺肌病的发生、发展关系密切。 【关键词】 子宫腺肌病；周期素E；P27；细胞周期；免疫组织化学子宫腺肌病是指在子宫肌层中存在子宫内膜组织，并伴有不同程度的肌层平滑肌细胞肥大和增生1。子宫腺肌病的发生机制目前并不十分清楚。研究显示子宫腺肌病为雌激素依赖性疾病，并且与免疫、遗传、基因改变等多种因素有关。cyclin E 与P27蛋白是细胞周期重要的调节因子，与多种肿瘤的形成及发生有较为密切的关系。本研究采用免疫组化的方法检测子宫腺肌病组织中cyclin E 与P27蛋白的表达，探讨其在子宫腺肌病的发生发展中的作用及相关关系。1 材料与方法11 研究对象 本研究所用标本来源于解放军第260医院及河北医科大学附属第四医院妇产科2004年6月—2004年11月住院行腹腔镜手术或开腹手术治疗的子宫腺肌病共40例，年龄2847岁，平均433岁。经腹腔镜手术27例，开腹手术13例；对照组主要为其他妇科疾病行手术者。全部病例均经组织病理学证实，术前3个月未进行过激素治疗。12 主要试剂 链霉素抗生物素蛋白过氧化物酶(SP)试剂盒、cyclin E 和P27鼠抗人单克隆抗体均购自北京中山生物技术公司。13 实验方法 观察组取异位于子宫肌层的内膜组织，对照组取正常子宫内膜组织，10%甲醛固定，石蜡包埋，组织切片厚4 μm，免疫组化步骤按试剂盒说明操作。14 阳性结果判定标准 周期素E，P27阳性产物均主要定位于细胞核上。根据着色强度及范围分为：阴性(-)，无阳性染色细胞或细胞着色率50%，由两名有经验的病理科医师双盲读片。15 统计学处理 所有数据经Excel数据库整理，采用Spss 115软件包进行统计分析。两组之间阳性率比较用χ2检验。2 结果21 不同子宫内膜中cyclin E的表达 见表1。表1 子宫腺肌病和正常子宫内膜中cyclin E 阳性表达的比较(略)与正常子宫内膜比较，χ2=919 P0.0522 不同子宫内膜中P27阳性表达 见表2。表2 子宫腺肌病和正常子宫内膜中P27阳性表达的比较(略)与正常子宫内膜比较，χ2=1154 P0.0523 子宫腺肌病中cyclin E ，P27阳性表达与临床症状的关系 见表3。表3 子宫腺肌病中cyclin E ，P27阳性表达与临床症状的关系(略)3 讨论31 cyclin E 在不同子宫内膜组织中的表达及意义 cyclin E 是细胞周期重要的调节因子，在细胞周期呈周期性表达，其mRNA及蛋白质水平在G1→S交界处急剧升高达峰值，在人类细胞的DNA合成启动中起重要作用，也即在控制细胞由G1进入S期过程中起限速作用2。cyclin E 过表达，可在整个细胞周期持续激活CDKs磷酸化其底物，释放转录因子E2F，促进DNA合成，对于细胞周期中G1→S期转换是必需的3。本研究结果显示，cyclin E 在子宫腺肌病组与正常子宫内膜组的阳性表达水平相比，其差异有统计学意义(χ2=919 P005)，提示cyclin E 表达或过高表达可促使异位内膜的生长，可能使异位于子宫肌层的细胞具有更强的分裂增殖及浸润的倾向。32 P27蛋白在不同子宫内膜组织中的表达及意义 P27蛋白是一种广谱CDK抑制剂。P27蛋白基因转染细胞的过量表达可使细胞DNA合成强烈受抑，阻止其从G1进入S期4。在体外P27抑制各种cyclinCDK复合物蛋白激酶活性，对CDK1，CDK4，CDK2的抑制作用依次增加2。在体内可与cyclin ECDK2复合物结合，将细胞阻断于G1期。目前研究发现，P27蛋白的低表达与子宫内膜异位症发生可能有关5。本研究显示P27蛋白在正常子宫内膜组织高表达，在子宫腺肌病组织低表达，其差异有统计学意义(χ2=1154 P005)，说明P27蛋白的表达降低或缺失可能在子宫腺肌病发生发展过程中起重要作用。33 cyclin E 与P27蛋白在子宫腺肌病中的表达与临床症状的关系 cyclin E 与P27蛋白是两个重要的细胞周期调节因子，具有相互拮抗的作用。cyclin E 与CDK2形成复合物促进细胞周期进程，P27蛋白作为细胞周期负调控因子，可抑制cyclin E CDK2等激酶复合物活性，而cyclin E CDK2是细胞通过G1/S限制点的关键6。 本研究显示，cyclin E 高表达及P27蛋白的低表达与痛经、异位内膜浸润宫壁深度和腺肌瘤大小关系密切，经统计学处理差异有显著性(P005)。提示cyclin E 表达升高及P27蛋白表达下降，二者可能在导致异位内膜细胞的增殖及浸润的过程中有协同作用。 本结果提示cyclin E 和P27两种周期蛋白与子宫腺肌病的发生发展密切相关，可能为子宫腺肌病发病机制提供新的线索，并可为今后的治疗提供新的思路。【参考文献】 1徐丛剑.子宫内膜异位症M.北京:人民卫生出版社,2002:41.2温进坤.医学分子生物学理论与研究技术M.北京:科学出版社,2002:358-366.3Geng Y,Eaton E N,Picon M,et al.Regulation of cyclin E transcription by E2Fs and retinoblastoma proteinJ.Oncogerne,1996,12(6):1173-1180.4Singh S P,Lipman J,Goldman H,et al.Loss or altered subcellular localization of P27 in Barretts associated adenocarcionmaJ.Cancer Ras,1998,58(8):1730-1735.5Zhang Y,Lin S C.Molecular characterization of the cyclindependent kinase inhibitor P27 pomoterJ.Biochim Biophys