【毕业学位论文】（Word原稿）甘蓝枯萎病菌生物学特性、病害田间消长规律及物理防治技术研究植物病理学硕士论文

密级： 论文编号： 中国农业科学院 学位论文 甘蓝枯萎病 菌 生物学特性 、 病害 田间消长规律及物理防治技术研究 要 甘蓝枯萎病是一种毁灭性病害，其 症状主要表现为叶片黄化和萎蔫，叶基变为紫色或褐色，感病部位的维管束变褐。为了解甘蓝枯萎病的发病机理和流行规律，为防治此病提供更有效的技术方法， 本试验对甘蓝枯萎 病病原菌的生物学特性进行了系统的研究。通过对其大小分生孢子的大小、形状，菌落特征，对不同寄主的发病率，参考前人的报道初步断定甘蓝枯萎病病原菌为尖孢镰刀菌粘团专化型 ( 菌丝的适宜生长温度为20，在 25 时菌丝生长最快；当温度低于 15 ，菌丝生长缓慢。当温度低于 10 时，菌丝生长极为缓慢。甘蓝枯萎病菌在 在 在 时生长最快 。在不同光照条件下，甘蓝枯萎病菌均能生长，菌落生长直径均达到 24小时黑暗、 12小时光照、 12小时黑暗条件下，病菌菌落生长量差异不显著，但在 24小时光照下，菌落生长量 小 ， 与其他两种处理相比 达到了极显著水平。添加作物秸秆 或牛粪、覆膜对培养的甘蓝枯萎病菌及土壤中甘蓝枯萎病菌都有明显的抑制和杀死作用。随着作物 秸秆 添加量的增加，其抑菌效果更加明显。在施牛粪的条件下，随着覆膜数的增加抑菌效果更加显著。施牛粪、覆膜对土壤中的立枯丝核菌、镰刀菌、轮枝菌、腐霉菌也有较好的抑菌作用。 以中甘 21和中甘 9号、 希望、北农早生、 8132、百惠 6个甘蓝品种为供试品种，以不同的浓度梯度，用拌土法、根系浸菌液法、伤根灌菌液法、土表灌菌液法（浇注法） 4个抗性鉴定方法进行 研究。结果表明，这几种接菌法都可用于甘蓝枯萎病的抗性鉴定上，但以拌土法最为快速准确，也适合于鉴定不同品种抗病性。在 2005和 2006年按 5级调查法对在北京延庆县北农早生品种的枯萎病进行了调查，结果显示， 在 2005、 2006两年间 甘蓝枯萎病发病趋势逐年加重；在同一年份中， 6月中旬枯萎病发生接近最高峰。 通过对甘蓝枯萎病菌生物学特性以及流行规律的研究，对甘蓝常 用品种的抗性鉴定， 为甘蓝枯萎病的综合防治技术的制定提供了一定的理论依据。 关键词 甘蓝枯萎病，病菌分离 鉴定 ， 病害田间消长规律， 抗性鉴定 ， 阳光杀菌， is a or at to 0 30 , 5 . is 5 ， or 0 is 0 , is .0 to pH of pH is is of to be to be no 4h 2h 2h 4h of or in as as to of a on in 1 , 8132, , ui to be to to be as it is to be of on 005 006. by by 录 第一章 文献综述 . 1 蓝的重要性 . 1 蓝种类与分布 . 1 蓝的价值 . 1 蓝主要病害 . 1 蓝枯萎病的研究 . 2 物枯萎病的研究 . 2 孢镰刀菌的分类地位 . 3 孢镰刀菌的寄主范围 . 3 孢镰刀菌专化型生理小种 . 3 孢镰刀菌的生物学特性 . 4 害循环 . 5 病机理 . 6 刀菌毒素 . 7 萎病的防治 . 8 第二章 甘蓝枯萎病菌的分离鉴定及生物学特性研究 . 12 状及病原物的分离鉴定 . 12 状 . 12 原菌的分离 . 12 原菌的致病性检测 . 12 原菌的鉴定 . 12 原物生物学特性 . 13 度对病原菌菌丝生长的影响 . 13 对病原菌菌丝生长的影响 . 13 照对病原菌菌丝生长影响 . 13 果与分析 . 13 原菌的致病性 . 13 原菌的鉴定 . 14 度对病原菌菌丝生长影响 . 15 对病原菌菌丝生长的影响 . 16 照对病原菌菌丝生长的影响 . 17 第三章 病害田间消长规律 . 18 . 18 V 验材料 . 18 验方法 . 18 果分析 . 18 第四章 甘蓝 枯萎病的抗性鉴定方法研究 . 20 料 . 20 试菌 . 20 蓝品种 . 20 验方法 . 20 种方法 . 20 内管理 . 21 蓝枯萎病病情调查 . 21 果与分析 . 22 同浓度拌土法对甘蓝枯萎病的影响 . 22 同接菌方法对甘蓝枯萎病的影响 . 23 第五章 阳光消毒对纯培养的枯萎菌及土壤中枯萎菌的 影响 . 24 膜、添加作物秸秆对纯甘蓝枯萎菌的影响 . 24 验处理 . 24 蓝枯萎病菌生长存活检测 . 25 膜、添加作物秸秆对土壤中枯萎菌的影响 . 25 验处理 . 25 膜、添加牛粪对培养的枯萎菌的影响 . 25 验处理 . 25 蓝枯萎病菌生长存活检测 . 25 膜、添加牛粪对土壤中病菌的影响 . 26 验处理 . 26 果与分析 . 26 膜及加入作物秸秆对甘蓝枯萎病菌生长与存活的影响 . 26 膜、添加作物秸秆对土壤中病菌的影响 . 27 膜、添加牛粪对培养枯萎菌的影响 . 28 膜、添加牛粪对土壤中病菌的影响 . 30 第六章 全文结论 . 34 蓝枯萎病症状 . 34 蓝枯萎菌分离鉴定 . 34 蓝枯萎菌生物学特征 . 34 害田间消长规律 . 35 蓝枯萎病抗性鉴定方法研究 . 35 光杀菌作用对培养枯萎病菌及土壤中的枯萎病菌的影响 . 35 参考文献 . 37 附 录 . 42 致 谢 . 49 作者简历 . 50 中国农业科学院 硕 士学位论文 第一章 文献综述 1 第一章 文献综述 蓝的重要性 甘蓝属十字花科 (薹属，又名包心菜、洋白菜。 起源于地中海沿岸 ， 在欧美各国栽培历史悠久 （方智远， 2002） ， 世界各地普遍栽培， 是世界许多国家的主要蔬菜作物 ， 欧、美洲国家为主要蔬菜。 自 16 世纪开始传入我国以来 ， 经过 300多年的发展 ， 我国各地均有栽培，是东北、西北、华北等较冷凉地区春、夏、秋的主要蔬菜，华南等地冬、春也大面积栽培。 目前我国每年种植面积约 40万 在蔬菜周年供应以及出口贸易中都占有重要地位。 蓝种类 与分布 甘蓝家族十分庞大 ， 分为结球甘蓝、皱叶甘蓝、抱子甘蓝、羽衣甘蓝 ， 还有观赏甘蓝。结球甘蓝又称洋白菜 ， 球状 ， 主要有绿色、紫色 ， 外表光滑 ， 在世界各地都普遍栽培；皱叶甘蓝也是球状 ， 但外表粗糙 ， 是欧、美国家的主要蔬菜；抱子甘蓝则主要分布在欧洲、北美洲 ， 是当地的重要蔬菜之一，抱子甘蓝呈绿色小球状 ， 外观碧绿诱人 ， 风味独特。抱子甘蓝喜冷凉 ， 耐霜冻 ，不耐高温；羽衣甘蓝则主要产于英国、荷兰、德国、美国东南部，叶状 ， 有绿色、紫色；观赏甘蓝主要呈花状 ， 有红色、粉红色、白色、黄色等颜色 ， 如同盛开的鲜花一样 ， 在 万花凋谢一叶稀 的严冬 ， 盛开如牡丹的观赏甘蓝 ， 成为一道靓丽的风景。 蓝的价值 甘蓝食用价值：甘蓝是一种主要的蔬菜，可清炒、清烧、凉拌、作汤料、火锅配菜、泡菜等。日益成为人们餐桌上的一道佳肴。 营养价值：甘蓝的营养价值很高，而且是一种天然的防癌良药，所含的维生素比番茄多 3 倍，维生素 U 在绿色蔬菜中居于首位，维生素 P 的含量也在蔬菜中名列前茅，还含有多量的维生素 具有抗癌作用。甘蓝族蔬菜中均含有吲哚类化合物，实验研究证明， 吲哚 具有抗癌作用，世界上许多国家都对甘蓝科蔬菜作了研究，一致认为，这些蔬菜中确实 含有保护人类免患肠癌的物质。美国一个专家组研究发现，甘蓝中有多达 15 种具有不同程度抗癌作用的化学成分，其中最令人鼓舞的是一种名叫 萝卜硫素 也称 莱菔子素 成分，它能刺激人或动物细胞仅产生对身体有益的 酶，使细胞形成对抗外来致癌物侵蚀的膜，是迄今为止所发现的蔬菜中最强有力的抗癌成分。采用鲜甘蓝汁成分的本食疗方，是肠癌的劲敌，中老年大肠癌患者坚持服食鲜甘蓝汁，可使其在治疗过程中发挥强有力的辅助治疗作用，有助于早日康复，即使健康老人也应在平时食谱中增加甘蓝汁等饮品菜肴，以充分发挥它的防癌作用。 蓝主要病害 甘蓝常见病害有霜霉病、黑斑病、菌核病、灰霉病、黑腐病、软腐病、病毒病、白斑病、黑根病、根肿病、芜青花叶病毒病、黄瓜花叶病毒病等。 中国农业科学院 硕 士学位论文 第一章 文献综述 2 蓝枯萎病的研究 甘蓝枯萎病是一种重要的蔬菜病害，该病害多年来在日本等国均有报道 （ A.， 1986） 。 由于该病难于防治，往往造成十分严重的损失，成为植病工作者关注的对象。 2001年在北京延庆县等地发现该病 （ 李明远 ， 2003）， 2002年在湖北武汉市华中农业大学的校园里 ，发生该病 ， 受害作物为大叶芥菜。同年 ， 该病在延庆县 大榆树镇簸箕营、新保庄、岳家营 3个村的春茬甘蓝上发生 ， 发病面积 13.3 2003年发展到 4个村的 202004年已发展到 2个乡 (镇 )中 6个村的 602005年仍在继续发展 ， 达大榆树、延庆、康庄 3个乡 (镇 )10个村的 80蓝枯萎病发病面积逐年呈上升趋势。由于该病害的发生 ， 造成甘蓝减产 30%左右。 2004年和 2005年部分发病严重地块毁种 ， 毁种面积分别为 2开始发病的簸箕营村的甘蓝种植受到严重影响，其种植面积严重萎缩 ， 由发病前的 减少到了现在的不 到 字花科蔬菜枯萎病成了当地菜农最害怕的病害。 甘蓝枯萎病是一种在温暖季节中发生的一种病害，在较凉爽的季节中，枯萎病并不是甘蓝的主要病害（ T.， 1992）。一种甘蓝的栽培变种 第一次报道对枯萎病有抵抗能力（ . 2001）。 这种抗性由营养元素决定。如果温度上升到 20 以上时，这种抗性就被破坏（ W. B.， 1924）。 这种抗性类型被定义为 J. C.， W. J. ， 1945） 述报道了另一种更加重要的抗枯萎病的甘蓝栽培变种 种变种对枯萎病的抗性是由一个优势基因决定的，而且温度在 26 28 时，仍能 稳定调控（ J. C.， R. ， 1930）。这种抗性类型被定义为 基因控制的抗性的例子被经常引用（ G. R. ， 1981）。 A、 . 号小种有较好的抵抗效果。 1号小种是引起甘蓝枯萎病的主要小种。 F. 2号小种主要在萝卜上被发现（ G. M.， J. K. ， 1952）；小种 3常出现在加利福尼亚的普通树干上； 4号小种在纽约的普通树干上被发现（ G. M.， J. K.， 1965.）； 5号小种只侵染有 仅在加利福尼亚被发现（ J.， 1985）。 物枯萎病的研究 引起植物枯萎病的病原菌主要分为细菌性病原菌和真菌性病原菌两大类 （刘波， 2004） ，其中以镰刀菌属引起的枯萎病研究最多。 镰刀菌是一种世界性分布的土传病原菌 （朱乾浩， 1994） ， 各个种广泛地分布在土壤和有机体内，并且曾从北极的永久冻土中和撒哈拉大沙漠的砂土中分离到。它们在温带和热带地区的耕作土壤中生长良好，是经常被植物病理学家分离到的真菌之一。镰刀菌也可以造成人类和动物的疾病，大量的贮存物的腐烂，常常产生有毒物质，污染人们的食物和牲畜的饲料。正如其 他许多土壤真菌一样，它们适用于在土壤中存活，其机能之一是能够在形态学和生理学上对于新的环境具有很快的变化和适用能力。它们能够生活在广阔范围的深层底土之中，也可以从许多贮存的食物和化学物品中分离出来，甚至在飞机的油箱内，也曾同树脂芽枝霉（ 道分离出来 （ 其煐译 ， 1982） 。在镰刀菌属中以尖孢镰刀菌为主要病菌种。 中国农业科学院 硕 士学位论文 第一章 文献综述 3 孢镰刀菌的分类地位 尖孢镰刀菌是 1913 年建立镰刀菌属 6 个群中的一个。 1940 年 菌属美丽组内的种合并为 1 个种，即尖孢镰刀菌 ( ，尖孢镰刀菌属半知菌亚门（ 瘤座菌目（ 镰刀菌属(尖孢镰刀菌是在经济上有重要作用的镰刀菌的成员，也是一个十分易变和不稳定的种。这种变异可能表现了演化的形态亲缘只是相对稳定的。 孢镰刀菌的寄主范围 尖孢镰刀菌有着广泛的寄主范围，可引起上百种植物维管束萎蔫病害。目前，在世界范围已报道的 尖孢镰刀菌的寄主有（ 1）花卉：香夹兰 （ 孔琼 ， 2005） 、一品红 （ 姜子德， 1996） 、 新几内亚凤仙 （宫俊华， 2004） 、 香石竹 （ 王继华 ， 2004） 、仙客来 （康黎芳 ， 2002） 、 康乃馨、郁金香、圆叶肿柄菊、非洲菊、鸢尾、水仙、翠菊、合欢、百合 (李诚 ， 1996)（ 2）水果：西瓜、甜瓜、哈密瓜、白瓜、节瓜、草莓、柑橘、沙棘、甘蔗、香蕉、荸荠（ 3）蔬菜：芦笋、莴苣、黄瓜、冬瓜、 苦瓜 （朱天圣， 1998） 、瓠瓜、葫芦、 南瓜、丝瓜、 莲藕 （ 鲁红学， 1998） 、 茄子、番茄、西葫芦、马铃薯、甘薯菜豆、豇豆、大豆、鹰嘴豆、蚕豆（ 4）经济作物：亚麻、蓖麻、胡麻、棉花、烟草、小麦、大蒜、姜、 沙打旺 (周洪友 ， 2004)、 草坪草、芝麻（ 5）树木：松树、相思树、水杉、 马占相思 （詹小红 ， 1997） 、 铁线莲属植物、梨树、松柏等。 孢镰刀菌专化型生理小种 尖孢镰刀菌的在世界范围内广泛存在。这个种的许多致病株系表明在尖孢镰刀菌中有专化型的存在，其中有些已被发现，并划分为两个或更多的小种。目前已报道的专化型有：尖孢镰刀菌尖萼荷专化型 （ 、尖孢镰刀菌海枣专化型 （ 、尖孢镰刀菌莳罗专化型（ 、尖孢镰刀菌芹专化型 （ 、尖孢镰刀菌石刁柏专化型（ 尖孢镰刀菌番薯专化型（ 尖孢镰刀菌甜菜专化型（ 尖孢镰刀菌翠菊专化型（ 尖孢镰刀菌大麻专化型（ 尖孢镰刀菌红花专化型（ 尖孢镰刀菌山扁豆专化型（ 、尖孢镰 刀菌兰 花专化 型（ 尖孢镰刀菌洋葱专化型（ 尖孢镰刀菌菊专化型（ 尖孢镰刀菌鹰嘴豆专化型（ 尖孢镰刀菌咖啡专化型（ 尖孢镰刀菌粘团专化型（ 尖孢镰刀菌香蕉专化型（ 尖孢镰刀菌黄瓜专化型（ 尖孢镰刀菌莳罗专化型（ 尖孢镰刀菌仙客来专化型（ 尖孢镰刀菌翠雀专化型（ 国农业科学院 硕 士学位论文 第一章 文献综述 4 尖孢镰刀菌石竹专化型（ 尖孢镰刀菌束毛专化型（ 尖孢镰刀菌胡颓子专化型（ 尖孢镰刀菌油椰专化型（ 尖孢镰刀菌桉树专化型（ 尖孢镰刀菌蚕豆专化型（ 尖孢镰刀菌草莓专化型（ 尖孢镰刀菌大丁草专化型（ 尖孢镰刀菌唐菖蒲专化型（ 尖孢镰刀菌大豆专化型（ 尖孢镰刀菌水苦荬专化型（ 尖孢镰刀菌葡萄专化型（ 、 尖 孢 镰 刀 菌 葫 芦 专 化 型 （ 尖孢镰刀菌小扁豆专化型（ 尖孢镰刀菌百合专化型（ 尖孢镰刀菌 亚麻专化型（ 尖孢镰刀菌丝瓜专化型（ 尖孢镰刀菌羽扇豆专化型 (尖孢镰刀菌番茄专化型 (尖孢镰刀菌紫罗兰专化型 (尖孢镰刀菌苜蓿专化型（ 尖孢镰刀菌茄专化型（ 尖孢镰刀菌甜瓜专化型（ 尖孢镰刀菌水仙专化型（ 尖孢镰刀菌莲专化型（ 、 尖 孢 镰 刀 菌 烟 草 专 化 型 （ 尖孢镰刀菌西瓜专化型（ 尖孢镰刀菌仙人掌专化型（ 尖孢镰刀菌西番莲专化型（ 、 尖 孢 镰 刀 菌 合 欢 专 化 型 （ 尖孢镰刀菌菜豆专化型（ 尖孢镰刀菌新西兰麻专化型（ 尖孢镰刀菌松专化型（ 尖孢镰刀菌豌豆专化型（ 尖孢镰刀菌番石榴专化型（ 尖孢镰刀菌栎专化型（ 尖孢镰刀菌萝卜专化型（ 尖孢镰