【毕业学位论文】（Word原稿）中西药结合新制剂“痢宝”质量控制及稳定性研究基础兽医学硕士论文

密级 ： 论文编号 ： 中国农业科学院 硕士学位论文 中西药结合新制剂 “痢宝” 质量 控制 及 稳定性研究 of of I 摘 要 “痢宝”是经过多年 临床实践并结合中兽医理论而研发的一种中西结合口服液体制剂， 主要用于 犊牛 急慢性腹泻的治疗。 为了完善“痢宝”的生产工艺，建立规范的 质量控制体系，准备新药申报材料， 以及为 检验和监督管理部门 提供检测依据 ， 本文 从以下几个方面 进行了“痢宝”质量标准和稳定性的研究 ： 处方方解 及 煎煮工艺研究。 本方具有健脾燥湿，清热解毒，调气活血的功能，用于治疗外邪入侵或脾胃虚弱所致 “ 泄泻 ” 。 秦皮为方中主药。 以制剂中秦皮甲素和秦皮乙素的含量为指标，利用正交试验，筛选和优化了本药的煎煮工艺： 煎煮 3 次， 每次 均 加 7 倍量的水， 煎煮 时 。 药材 及原料药质量标准 研究 。根据中国药典（ 2005 年）收录的方法对复方中各药材进行了薄层鉴别 ，结果各药材均符合处方要求。 利用 测定了秦皮中秦皮甲素和秦皮乙素的含量 ； 建立了原料药中痢菌净鉴别及含量测定的方法。 根据实验结果规定： 按干燥品计，含 秦皮甲素 和秦皮乙素的总量 应不低于 ； 痢菌净原料药 含量应不低于 成药 “痢宝” 质量标准研究 。 主要进行了制剂中秦皮、痢菌净的薄层鉴别和秦皮甲素、乙素及痢菌净的 含量测定研究。建立的鉴别方法直观、简单、专属性强；含量测定方法准确、重现性好。 根据实验结果规定： 制剂中 秦皮甲素 和秦皮乙素 含量不得低于 痢菌净含量不得低于 制剂 稳定性研 究 。 主要考察了光照、 度对秦皮甲素、乙素、痢菌净含量的影响；并通过 经典恒温试验，对药物的有效期进行了预测。 结果：制剂应做成 酸性 溶液 ， 右最好 ； 应避光和避免高温放置 ；应保 存 在酸性环境 。 关键词 ： 痢宝 ， 中西结合口服液体制剂 ， 煎煮工艺 ， 质量标准 ， 稳定性 as a of of by of It to on to to to in on of in of i, It to by of or of By of as by of on of LC of 2005). in of of of be of be ,of . on of It of as as of in of of be of be of on of of pH on of of by be at of 录 摘要 文缩略表 第一章 绪论 . 1 1 研究目的和意义 . 1 究目的 . 1 究意义 . 1 2 犊牛腹泻概述 . 2 国传统医学对犊牛腹泻病因及治疗的概况 . 2 代医学对犊牛腹泻病因及治疗的研究进展 . 4 3 复方中重要药材及痢菌净的研究进展 . 6 皮 . 6 头翁 . 9 齿苋 . 12 术 . 15 楂 . 19 芪 . 24 菌净 . 28 4 中（兽）药合剂稳定性研究概述 . 29 第二章 “ 痢宝 ” 方解及生产工艺研究 . 30 1 处方组成 . 30 2 处方分析 . 30 3 煎煮工艺的筛选 . 30 器与试药 . 30 谱条件 . 31 法 . 31 果 . 33 4 生产工艺 . 33 第三章 “ 痢宝 ” 质量控制的研究 . 34 1 药品原料（药材）质量控制的研究 . 34 材和原料药的鉴别 . 34 材和原料药的含量测定 . 36 论 . 38 “痢宝”的质量控制研究 . 39 称 . 39 方 . 39 法 . 39 状 . 39 别 . 39 痢宝”中秦皮甲素和秦皮乙素的含量测定 . 41 痢宝”中痢菌净的含量测定 . 47 能与主治 . 50 法与用量 . 50 格 . 50 藏 . 50 第四章 “ 痢宝 ” 稳定性研究 . 51 1 仪器与试药 . 51 器 . 51 药 . 51 2 方法 . 51 照对秦皮甲素、乙素和痢菌净含量的影响 . 51 H 对秦皮甲素、秦皮乙素和痢菌净含量的影响 . 52 度对秦皮甲素、秦皮乙素和痢菌净含量的影响 . 53 物有效期预测 . 53 3 结果 . 54 稳定实验结果 . 54 3.2 药物稳定性的影响 . 54 度对药物稳定性的影响 . 55 物有效期预测结果 . 55 4 讨论 . 55 第五章 结论 . 57 参考文献 . 58 致谢 . 62 附图 . 63 作者简介 . 68 V 英文缩略表 英文缩写 英文全称 中文名称 替三线性分解 水型肝癌 氏腹水瘤 头翁水提液 头翁醇提液 头翁注射液 甲肼 氧化物歧化酶 胱甘肽过氧化物酶 殖细胞核心抗原标记指数 瘤坏死因子 氧化值 4 白细胞三烯 多糖 否氏细胞 腔巨噬细胞 5烯基苯氧聚乙氧 乙醇 基苯氧聚乙氧乙醇 细胞介素 清谷丙转氨酶 脂扩散敏感试验 胆固醇 油三脂 密度脂蛋白胆固醇 . 齿苋多糖 二醛 文缩写 英文全称 中文名称 氧化氢酶 蛋白脂酶 氧化物酶增殖激活体受体 氧化物酶增殖体反应元件 化型低密度脂蛋白 皮细胞对单核细胞 脉粥样硬化 皮素 2 血栓素 列环素 酸脱氢酶 酸激酶 管内皮细胞 环内皮细胞 s 芪茎叶总黄酮 癌浸润淋巴细胞 芪多糖 磷脂胆固醇酰基转移酶 岛素抵抗 白蛋白 氨酸转氨酶 酰甲喹 （ 痢菌净 ） 层色谱 效液相色谱 国食品与药品管理局 对标准偏差 中国农业科学院硕士学位论文 第一章 绪论 1 第一章 绪 论 1 研究目的和意义 究目的 本课题组依据中兽医 “辨证论治 ”理论，结合中药学现代研究成果，研制出一种治疗犊牛腹泻的中西药结合复方 口服 液体制剂，并在临床上取得了 较 好的治疗效果 。 临床资料统计表明，一次用药治愈率在 80左右，二次用药治愈率在 90左右。 因此， 本论文的研究目的为： 通过对“痢宝”的 质量控制 及稳定性进行研究， 从而指导该药的生产及贮存，确保本药的质量和 疗效稳定可靠 ，进而推动“痢宝”的申报。 究意义 进犊牛腹泻的防治 ，保证养牛业的持续健康发展 犊牛腹泻是新生犊牛的杀手，约占犊牛发病率的 80，常侵害出生后 2 周内的犊牛，如治疗不及时，会造成犊牛死亡， 严重威胁着我国 养 牛业的持续健康发展及相关产业的发展。 目前对该病的治疗，现代医学主要采用抗生素治疗并结合支持疗法，但疗效不理想，且 合成药物的弊端（耐药性、毒副作用等）不可忽视。中兽药对该病的治疗已取得较好的效果 ，但缺少高效、使用方便的制剂，不利于中兽药的推广及其大规模防控疾病作用的发挥。 本课题组研 制 的 “痢宝” 已取得较好的 临床 治疗效果 ，有必要建立相应的质控技术以确保其疗效 。 因此， 对本药 质量控制 和稳定性的研究，将为其质量可控和疗效稳定提供更多的理论和技术支持，从而促进本药在犊牛腹泻 防治中的 应用，保证养牛业的持续健康发展，进而取得更大的经济和社会效益。 应中兽药的国内外 市场发展趋势，促进中兽药的现代化 从总体上看，目前我国中兽药 制剂的现状是：制剂品种少，水平低，质量不够稳定，缺乏规模化生产，缺乏创新产品， 重复生产严重， 缺乏竞争力，远远满足不了国内市场的需要，更谈不上走出国门与世界同类先进产品相抗衡。 进入新世纪以来 ，中兽药正面临着一个前所未有的大好 发展 机遇。有关资料表明，随着国际畜产品贸易技术壁垒不断增高，我国的一些禽类产品由于病原、兽药残留等技术指标超过欧盟及主要进口国日本的控制指标，曾被拒收、扣留、终止合同甚至封关等。同时欧盟也在大力开发天然植物药、免疫调节剂等绿色环保型天然植物药作为替代产品，在养殖生产中推广。在此严峻的形势下，安全 、 优质 、 绿色畜禽产品生产呼唤中兽药产品替代 合成 药物，呼唤中西结合的畜禽防疫技术模式。与西药相比，中兽药 整体调节动物机体， 药效慢，副作用少，不会形成对人们身体有害的药物残留。由于中兽药 的这一传统优势，中兽药的应用前景越来越广阔，中兽药正在朝着现代化、国际化以及中西结合的方向发展。 在日韩等国家，中药用于人的医疗保健有较长历史，但用于动物不多 ； 欧美国家过去只对针灸感兴趣，动物诊疗上应用中药则很罕见 ； 近年来，在欧、美、日、韩以及我国的港澳台等国家中国农业科学院硕士学位论文 第一章 绪论 2 和地区，中兽药开始逐渐被认同。 现代化的中兽药是高效、优质、安全、稳定、质量可控、给药方便、具有现代化剂型而又不失中药特色的新一代动物用药 ， 包括单味、复方及以中药为主的中西结合制剂。 人用 中药现代化和国际化发展 过程 中的一条深刻教训就是： 只有具备有效质控技 术的产品，才能抢占较多的国内外市场份额，否则只能出售低附加值的原料或半成品。 中兽药要现代化 ,首先 就得 标准化 ,中兽药 质量控制 已 成为中 兽 药现代化的前提 ； 中兽药 要国际化 ， 必须首先现代化。因此，加强中兽药 质量控制 的 研究 对中 兽 药现代化和国际化的实现都具有至关重要的作用。 讨中西结合制剂 质量控制 及稳定性研究的理论和方法 中兽药的研究和应用正越来越多的朝着中西结合的方向发展。一方面， 西药 具有 品种多、作用强且 迅速等特点，被广 泛地应用于兽医临床， 但西药 毒副作用及耐药性问题日渐突出 ；另一方面， 中 兽 药的特色和优势 不仅 在于预防 、 增强免疫功能、减少应激、延迟发病、缓减症状、促进病变恢复、防治并发症或继发感染 ，即中兽医所讲的 扶正又祛邪，标本兼顾 ，而且 毒副作用小，不会产生耐药性 。 两者相结合，可以取长补短，内外并重，整体与局部并重，起到相得益彰的效果。中西药结合应用已为多数兽医 (药 )工作者应用并取得良好的治疗效果。中西药的结合，是发展 中兽药 的重要举措。 目前，对纯中药制剂 质量控制 和稳定性 研究， 已经有许多较为成熟的理论和方法，并在控制制剂 质量和疗效等方面发挥了巨大的作用。但是，对中西结合制剂 质量控制 和稳定性的研究，却少见 ，难度也较大 。 一方面 证明 中西结合 制剂 疗效优于纯中药制剂或单一西药制剂 有难度 ；另一方面，确定中西结合制剂 中药理效应的物质基础即有效成份有难度。 “痢宝” 经临床拆方试验证实：中西结合制剂的疗效优于纯中药或单一西药制剂。在此基础上， 本论文进行 了该药 质量控制及稳定性的研究 ； 在理论和方法上，对中西结合制剂的上述研究内容进行了一定程度的研究和探讨。 至于中西结合制剂药理效应的物质基础，需要进行后续研究。 2 犊牛腹泻概述 腹泻 (新生犊牛的常见病之一， 发病率高，易致死亡 。 多种 细菌、病毒 和 寄生虫等病原微生物感染以及一些非感染性因素 均可引起腹泻。 大多数致命的腹泻病发生在出生后的 前 2周。随着 犊 牛的生长， 犊 牛对传染性疾病的抵抗力明显增强，但 3 4周龄的 犊 牛对该类传染性疾病仍具有较高的易感性。 国传统医学对犊牛腹泻病因及治疗的概况 泄泻，是指排粪次数增多，粪便稀薄，甚至泻粪如水样 1,2。 病因病 理 的认识 泄泻的主要病变部位在脾胃和大小肠。但其他脏腑疾患，如肾阳不足等，也能导致脾胃功能失常，发生泄泻。泄泻发生的原因很多主要有以下几个方面： 中国农业科学院硕士学位论文 第一章 绪论 3 受寒湿 外感寒湿，传于脾胃，或内伤阴冷，直中胃肠，致使运化无力，寒湿下注，清浊不分，遂成泄泻。 积胃肠 多因 暑月炎天，劳役太重，乘热饲喂草料，郁而生热，损伤脾胃，津液不能化生，水反为湿，湿热下注，乃成其患。 食停积 因采食过量草料，致宿食停滞，损伤脾胃，不能运化水谷精微，则水反为湿，谷反为滞，致使合污下降而成泄泻。 胃虚弱 因长期饮喂失调，使役过度，或草料劣质，致使脾胃虚弱，胃弱不能腐熟消导，脾虚不能运化水谷精微，以致中气下陷，清浊不分，故而作泻。 证施治 泻 主证：发病较急，泻粪稀薄如水，耳鼻 俱冷，肠鸣如雷，尿少；口色青白或青黄，口内滑利，脉象沉迟。 治则：温中散寒，利水止泻。 方药：五 苓散加干姜、茴香。水泻严重者，加诃子、乌梅、天仙子止泻。 针治：火针脾俞、后海等穴。 泻 主证：泻粪稀薄或粘腻，气味恶臭；患畜精神沉郁，草料减少或不食，发热，有时腹痛不安，尿赤短；口色赤红，舌苔黄腻，口臭，脉象沉数。 治则：清热燥湿，利水止泻。 方药：五苓散加干姜、茴香。水泻严重者，加诃子、乌梅、天仙子止泻。 针治：火针脾俞、后海等穴。 食 泻 主证：食欲废绝，牛反刍停止，肚腹微胀 ，粪便稀软酸臭，含有未消化的谷料，间有轻微疼痛，泻后痛减；口色红，舌苔厚，脉象沉紧。 治则： 消食导滞 。 方药： 保和丸加味 。 食 滞 重者，加 大黄 、 枳实 、 槟榔；水泻甚者，加猪苓、木通、泽泻；热盛者，加黄芩、黄连。 针治： 同热泻 。 虚泻 主证：体瘦毛焦，精神倦怠，四肢无力，肷软，慢草；泻粪粗糙，完谷不化，或粪中带水，中国农业科学院硕士学位论文 第一章 绪论 4 肠鸣如雷，尿少；口色青黄，脉象沉细。 治则：补中益气，利水止泻。 方药：补中益气汤加味。水泻重者，加茯苓、猪苓；完谷不化的，加山楂、麦曲、建曲。 针治：针脾俞、后海。 虚泻 主证： 病程较长 ， 夜间（特别是在黎明之前）作泻 ， 粪便稀软 ， 甚至完谷不化；四肢发凉 ，腰腿无力 ， 肛门松弛；口色淡白 ，脉象沉细 无力 。 治则： 温补肾阳 ， 涩肠 止泻 。 方药： 巴戟散，去槟榔，加 茯苓、猪苓 等 ； 或用四神丸 。 针治： 火 针脾俞、 白会、 后海 等 。 代医学对犊牛腹泻病因及治疗的研究进展 病因的认识 引发犊牛腹泻的病因多且复杂，常常是多种致病因素同时作用于机体。 染性因素 菌感染 刘明春等 3从患病犊牛粪便中分离出的主要致病菌为大肠杆菌， 药敏试验结果表明，该分离菌对头孢哌酮、头孢他啶、妥布霉素、卡那霉素、庆大霉素、丁胺卡那、呋喃妥因、氟哌酸、利福平等高度敏感；对红霉素、氨苄西林中度敏感；对四环素、万古霉素和复合磺胺耐药。喻华英等 4从腹泻犊牛粪便样品中分离 到得到 5株沙门氏菌 （ 占 ） ，其余 均为大肠杆菌；药敏试验发现该场的沙门氏菌对青霉素，红霉素，庆大霉素等中度敏感 ； 对环丙沙星，诺氟沙星敏感度极高。何昭阳等 5研究证实 ， 腹泻或即将腹泻时，大肠杆菌数增加，双歧杆菌和乳杆菌数下降；腹泻康复或即将康复时，大肠杆菌减少，双歧杆菌、乳杆菌数增加。 毒感染 引起犊牛腹泻的病毒包括轮状病毒，冠 状 以及黏膜病病毒。轮状病毒进入犊牛胃肠道后，在酶 (胃蛋白酶、胰酶 )的作用下被激活，然后侵入小肠绒毛上的柱状上皮细胞，并在胞浆内繁殖，致使细胞功能 丧失 ，最后死亡。同时轮状病毒通 过肠壁的变化而使其对细胞感染更敏感。由冠 状病毒引起的犊牛腹泻通常发生在 5日龄以上，病毒进入犊牛消化道后，即进入小肠前段的绒毛上皮细胞，感染并迅速扩大到后段，致 时表现腹泻 ； 继