土壤农化分析实验.doc

土壤农化分析实验目录实验一 土壤有机质测定(外加热法) 实验二 土壤全氮量测定实验三 水解氮的测定(碱解扩散法)实验四 土壤铵态氮的测定(一)蒸馏滴定法(二)奈氏比色法 实验五 土壤硝态氮的测定(一)硝酸银电极法(二)酚二磺酸比色法 实验六 土壤有效硫的测定 实验七 土壤全磷的测定 (一)NaOH碱熔钼锑抗比色法 (二)HCl十H2S04酸溶钼锑抗比色法 实验八 土壤速效磷的测定 (一)中性和石灰性土壤速效磷测定 (二)酸性土壤速效磷的测定 实验九 土壤全钾测定 实验十 土壤速效钾的测定 (一)火焰光度法 (二)1molNaN03提取四苯硼钠比浊法 实验十一 土壤阳离子交换量测定 (一)1mol中性NH40Ac法 (二)BaCl2H2S04快速法 实验十二 土壤交换性盐基测定 (一)交换性盐基总量测定 (二)交换性钙、镁的测定(EDTA容量法) (三)交换性钾钠的测定(火焰光度法) 实验十三 活性酸和交换性酸的测定 (一)活性酸(pH)测定 (二)交换性酸的测定(总量测定)实验十四 土壤水溶性盐总量测定(电导率测定) 实验十五 植物样品消化(一) H2S04H202法(二)混合加速剂消煮法 实验十六 植物样品中氮的测定 (一)奈氏比色法 (二)半微量蒸馏法 实验十七 植物样品中全磷测定(钡钼黄比色法) 实验十八 植物样品中全钾测定(火焰光度法) 实验十九 植物钙镁的测定(EDTA络合滴定法) 实验二十 土壤和植物中硼的测定 (一)姜黄素比色法 (二)甲亚胺H比色法 (三)植物样品干灰化及硼测定 实验二十一 土壤和植物锰的测定(KMn04比色法) (一)土壤有效锰测定(二)植物中锰的测定 实验二十二 土壤和植物中铜、锌的测定(原子吸收分光光度法) (一)土壤中有效铜、锌测定 (二)植物中铜、锌测定 实验二十三 土壤和植物中钼的测定 硫氰酸盐比色法 实验二十四 土壤和植物中铁的测定(邻菲罗啉比色法) (一)土壤有效铁测定 (二)植物中铁的测定实验二十五 纯蛋白质的测定 (一)沉淀分离后消化测定 (二) 染料结合法 实验二十六 氨基酸总量的测定(茚三酮比色法) 实验二十七 水溶性糖的测定(葸酮法) 实验二十八 淀粉的测定(HCl水解一菲啉碘量法) 实验二十九 粗脂肪的测定(残余法) 实验三十 果蔬总酸度的测定 实验三十一 维生素C的测定 (一)2，6二氯靛酚滴定法 (三) 荧光测定法 实验三十二 氮肥的测定 (一)甲醛法(铵态氮肥中氮的测定) (二)蒸馏法(尿素含氮量测定) 实验三十三 磷肥的测定 (一)喹啉钼酸重量法(过磷酸钙有效磷测定)(二)喹啉钼酸容量法 (三)过磷酸钙中游离酸测定 (四)钒钼黄法(磷矿粉中有效磷测定) 实验三十四 钾肥测定 (一)火焰光度法 (二)四苯硼钠重量法 实验一 土壤有机质测定(外加热法)一、方法原理:在恒加热条件下(175180，5分钟)，用定量K2Cr2O7H2S04溶液氧化有机质，剩余的K2Cr207用标准FeS04滴定，由氧化有机质消耗的K2Cr2O7的量计算有机质含量。反应式为：2K2Cr2O7+3C+8H2S0 2K2S04 + 2Cr2(S04)3+3C02+8H2OK2Cr207+6FeS04+7H2S04 K2S04 + Cr2(S04)3+ 3Fe2(S04)3 + 7H20此法氧化率只有90，所以测得结果乘上校正系数1.1，计算有机碳含量。 二、试剂10.4000MOL.L-1（1/6K2Cr207H2S04）：40gK2Cr2O7溶于1000mL水中，冷却后，将1000mL浓硫酸慢慢加人，搅匀。20.2 MOL.L-1 FeS04：224gFeS047H20，溶于3000mL水，慢慢加入浓H2S04 20mL(或6mol.l-1(1/2H2S04)120mL)，加水至4000ml。3邻菲锣啉指示剂：2.970g邻菲锣啉和1.390gFeS047H20溶解于200mL水中。40.1000 MOL.L-1（1/6K2Cr2O7）：分析纯K2Cr2O7在130烘3小时后，冷却。准确称取2.4517g，少量水溶解，加浓H2S04 35ml，冷却后移人500ml容量瓶，用水定容。5FeS04溶液的标定：取0.1000 MOL.L-1。K2Cr207溶液10ml(分别取三份)放人三角瓶中，加邻菲锣啉3滴，用配制的FeS04溶液滴定至砖红色，计算FeS04溶液的浓度，该溶液每天使用前应重新标定。 C(FeSO4)=(O.1000 * lOml)/V = 1/V 式中：V为滴定所用FeS04溶液的体积FeS04浓度取三份测定结果的平均值。三、仪器油浴锅、温度计、硬质试管、滴定管、天平。四、操作步骤1称取100目土样0.5g左右(用1万天平)放人干的硬质试管内。2准确加人0.4MOL.L-1(1/6 K2Cr2O7H2S04)溶液10ml，摇匀。 3盖上小漏斗，放人铁丝笼中。4。油浴加热至185190，将铁丝笼放人，控制温度在170180，从冒气泡开始计时，加热5分钟。5取出铁丝笼，待试管冷却后，将内容物倒入250ml三角瓶中，用水洗试管和小漏斗，洗液也倒入三角瓶(共用水5060ml，分34次洗试管，最后三角瓶中溶液体积约6070m1)。6。在三角瓶中加指示剂(邻菲锣啉)3滴，用标准FeS04溶液滴定，颜色由橙一灰绿一浅绿砖红为终点。向时作空白：即取10ml 0.4MOL.L-1(1/6 K2Cr207H2SO4) 溶液，不加土样(或加灼烧过的石英砂)，同操作26进行。五、计算结果有机c=(Vo-V) *C *0.003 * 1.1/W式中：Vo：空白滴定用FeS04体积(ml)V：样品滴定用FeS04体积(ml)C：标准FeS04浓度(MOL.L-1) W：土重(g)0.003：碳的毫克当量数有机质=有机C*1.724六、注意事项 1为了使油浴煮沸温度在170180，放入铁丝笼前油浴应加热至185190(夏天) 瓤952000C(冬天)，从试管内开始冒大气泡开始计时，煮沸5分钟，计时应准确。反应时由 于有CO2放出，溶液可能剧烈上冲，要防止冲出，可以将铁丝笼稍提起，再放下，控制反应程 度。 2。加热方法可用油浴(植物油)，升温均匀，但有污染的可能；或用石腊油，无污染，但易挥发；或用磷酸，无污染，比较清晰易看，但需用玻璃容器加热；也有用砂浴的，无污染，但受热不均匀。3消煮好以后，溶液应为桔黄色或黄中稍带绿色，如为绿色，则K2Cr2O7用量不足，须重 做。 4邻菲锣啉作指示剂，滴定开始时为橙色，中间应有灰绿色变化过程，最后为棕红色(砖 红色)(E = 1.06V)。滴定时溶液酸度有影响，应维持在1MOL.L-1(1/2H2S04)左右，所以消煮溶液稀释 体积应为6070ml，不要太浓或过稀。5FeS04溶液在空气中易氧化，所以配好后不要放太长时间，在每次使用前(一、二天内) 应重新标定浓度。七、思考题：1重铬酸钾外加热法测土壤有机质的基本原理和主要条件是什么，该法有何优缺点?2，测定土壤有机质，对土样有何要求?用1mm土样可否?用新鲜土测定好不好?测水稻土有机质应如何处理样品，为什么?3测有机质时，土样的量和K2Cr2O7H2S04溶液的加入量有何要求? 4如果消煮时少量溶液冲出，结果会如何?消煮后试管未洗净，结果如何?加入土样前 试管不干，少量土沾在试管上边，会有什么影响?加热温度只有165，结果如何?加热时间 超过5分钟，会有什么影响? 5加入指示剂用FeS04滴定，滴了不到1ml，颜色就变为砖红色(一般应用l0ml以上)， 这可能是什么原因造成?如何改进?实验二 土壤全氮含量测定一、 方法原理土壤样品用浓H2S04催化剂加热消煮，使各种形态的氮都转化为NH4+N，然后加碱蒸馏 ,用硼酸吸收NH3，用标准酸滴定，计算样品含N量。 主要反应： 含N化合物+H2S04 (NH4)2S04+CO2+SO2 + H20(NH4)2S04+2NaOH 2NH3+ Na2S04+2H20 NH3+H3B03NH4H2B032NH4H2B03 + H2S04一(NH4)2S04+2H3B03二、试剂1，混合催化剂：1g硒(Se)粉，10gCuS04.5H20，100gK2S04磨细混匀。2浓H2S04。340NaOH：400gNaOH，加水至1000ml。4硼酸吸收液(2)：60g硼酸(H3B03)溶于2500ml水，加60ml混合指示剂，用0.1molNaOH调节pH为4.55.0(紫红色)，然后加水至3000ml。5混合指示剂：0.099g溴甲酚绿和0.066g甲基红，溶于100ml乙醇。60.010.02MOL.L-1标准酸(1/2H2SO4)：3ml浓H2S04加入10000ml水中，混匀。标定：准确称取硼砂(Na2B204)1.9068g，溶解定容为100ml，此为硼砂溶液。取此液10ml，放人三角瓶中，加甲基红指示剂2滴，用所配标准酸滴定由黄色至红色止，计算酸浓度。三、仪器。开氏瓶、电炉、定N蒸馏器、滴定管(半微量)。四、操作步骤1称土样(100目)0.51g，放入开氏瓶底。加入混合催化剂2g，加几滴水湿润，再加入浓H2S04 5ml，摇匀。2，在通风柜内加热消煮，至淡兰色(无黑色)后再消煮0.51小时。取下冷却后，加水约50ml。3取20ml硼酸吸收液(2H3B03)放人250ml三角瓶中，三角瓶置于定N蒸馏器冷凝管下，管口浸入吸收液中。4开氏瓶(内有消煮液)接在定N蒸馏器上，由小漏斗加人2025ml 40浓度的NaOH溶液，夹紧不使漏气。5通水冷凝，通蒸气蒸馏15分钟左右。在临近结束前，使冷凝管口离开吸收液，再蒸馏2分钟，并用纳氏试剂或pH试纸检查是否蒸馏完全。如已蒸馏完毕，用少量水冲洗冷凝管下口，然后取出三角瓶。 6用0.01 MOL.L-1标准酸溶液滴定，由兰绿色滴暮紫红色为终点。五、计算土壤全N(g.Kg-1)= (V-V0)*C*14*10-3*103/W式中：C：标准酸浓度(MOL.L-1)。V、Vo：分别为滴定样品和空白所用标准酸体积（ml）14：N的摩尔质量（g/mol）W：土样重(g) 六，注意事项：1土样应避免沾在开氏瓶颈部，如因颈部不干而沾丁土样，应用H2S04或少量水冲入瓶底，否则会因消煮不到而使结果偏低或失误。2加入少量水湿润的目的是为了防止土与H2S04不能混匀而成团粒，不利于充分消化。但水份多了会降低消煮温度，延长消化时间。所以不可加入太多水。可将土样在瓶底摇动散开，然后加H2S04，这样土样不至成团粒，能与H2S04混匀。3。消煮过程中，应摇动开氏瓶数次，让土样集中在瓶底与H2S04充分反应。消化开始时，由于有机物炭化，溶液为棕黑色等深颜色，随有机物氧化，颜色变浅，至出现兰绿色时(此为CuS04的颜色)，大部分有机物都已分解，再消化半小时以上，使一些难转化的含氮化合物也转化为NH4+N。如果开氏瓶内还有黑色或棕色，必须继续消化至该色消失。4有时某些土样消化时会有溶液溅动现象，应控制温度不使反应局部过剧烈。消化土样也可以用硬质试管铝锭消化器或其它定氮消煮仪器。催化剂中Se有毒，且在高温下易挥发，消化过程中还有S02等毒气产生，所以消煮必须在通风柜内进行。5。消化后开氏瓶内为浓H2S04，应冷却后小心加入水稀释，否则会因水与浓H2S04激烈作用，而使消化溶液冲出，造成损失或失败。6，如用常量蒸馏器，可将开氏瓶直接接在蒸馏器上蒸馏。如用半微量定氮蒸馏器，可将消化溶液全部转移人lOOml容量瓶中，用水洗几次开氏瓶，洗液也转入容量瓶。用水定容后，取1020ml溶液加入半微量定氮蒸馏器进行蒸馏测定，最后计算时需乘上分取倍数(105倍)。7常量定氮蒸馏时，由于蒸出NH3，H20量较大，冷凝管下口(可接皮管或塑料管加长些)应插入硼酸吸收液，避免可能有的挥发损失。最后为避免管口沽有硼酸吸收液，所以结束前2分钟将冷凝管口离开硼酸吸收液，让蒸馏溶液11)，实验中通过什么来达到这一要求的?如果样品提取液不是中性，应如何办? 实验五土壤硝态氮的测定(一)硝酸根电极法一、原理用2K2S04溶液提取土壤N03N，用硝酸根电极法测定N03N。 E = EO (2.303RT/nF)*log(NO3-)二、试剂12 K2SO4 ：lOOgK2S04溶于5000ml水。2N03- N标准溶液：取0.6071gNaN03，放人100ml容量瓶，用2K2S04定容，此溶液含N03N1000ppm。依次将此标准原液用2 K2S04稀释为NO3N标准系列溶液，浓度分别为：100、50、10、5、1ppm。三、仪器硝酸根电极、离子计或pHS2型酸度计，甘汞电极，振荡机四、操作步骤1。称土样10.0g放人150ml三角瓶中，加入50ml 2 K2SO4溶液，塞紧塞子，振荡15分钟。2干过滤，取滤液约25ml，放人小烧杯中。3放硝酸根电极和甘汞电极在溶液中，测读电位(mv)，查标准曲线，得溶液NO3-N浓度。标准曲线：分别取1、5、10、50、100ppmN03-N标准溶液20 25ml放人小烧杯中，同操作3测电位(mv)，在二联半对数纸上以电位正(mv)为纵轴，浓度M为横轴作曲线。也可将mv与N03-N浓度的负对数(PNO3-)在方格纸上作图。五、计算N03-N( mgkg) = (查曲线得ppm * 50 * 1000)/(10 * 1000)六、注意事项 1测N03-N用1mm风干土或新鲜土。旱地土壤测NO3-N，水田土壤一般不测NO3N。2测定时所取滤液体积不必准确，以电极响应部位能浸入液中即可。硝酸根电极响应很快，一般几秒钟后即可达到平衡，读数。3该法测定范围为10-1 10-5mol.l-1(N03)。测定时电极pH范围为4 9.5。每次测定后，电极应清洗至“空白”电位附近。 4CI、ClO3-、H2PO4-等离子有一定干扰，C1超过NO3-浓度100倍时干扰。 七，思考题1可否用标准添加法测定NO3-N浓度?如何进行?2为什么水田土壤一般不测NO3-N含量? (二)酚二磺酸比色法一、方法原理N03N提取液在微碱性条件下蒸干，加酚二磺酸反应，生成硝基酚二磺酸，反应为：HN03 + C6H30H(HS03)2C6H20H(HS03)2N02+ H20经碱化后生成黄色溶液，颜色深浅与N03N含量在一定范围内正相关，在波长400 425nm处比色测定。二，试剂 1酚二磺酸：25.0g苯酚在500ml三角瓶中，加入225ml浓H2SO4，在沸水浴上加热6小 时。冷却后如有结晶析出，用时须重新加热溶解，不要加水。试剂贮于棕色瓶中，密封防吸湿。2粉状固体：CaS042H20，CaCO3，Ca(OH)2，MgCO3，Ag2S04，活性炭。31 : 1 NH4OH4：NO3-N标准溶液(10ppm)：0.722gKN03溶解定容为1000ml，为100ppmN03-N溶液。再稀释10倍，得10ppm NO3-N标准溶液。三、仪器分光光度计，水浴锅，蒸发皿四、操作步骤。1。称取新鲜土样50.0g，放人500ml三角瓶中，加0.5gCaS042H20和250ml水，塞紧塞子夕振荡均分钟，放置几分钟后将上部溶液过滤。2取滤液2550ml，放入蒸发皿中，加0.05gCaC03，在水浴上蒸干，冷却。3加入酚二磺酚2ml，轻轻摇动使蒸干物充分接触反应，放置10分钟。4加水20ml，用玻棒搅拌使蒸干物溶解，冷却。边加边搅慢慢加入1 ：1NH4OH，至溶液显黄色(微碱性)再多加2ml 。5将溶液移入100ml容量瓶，加水定容。用波长420nm比色测定。标准曲线：分别取10ppmN03-N标准溶液0、1、5、10、15、20ml，于蒸发皿中，同操作2 5同样进行，作标准曲线。NO3-N浓度分别为：0，0.1，0.5，1.0，1.5，2.0ppm 。五、计算NO3N ppm(ug.ml-1 )= 查标准曲线ppm * 土水比 * 稀释倍数 =ppm * (250/50) * (100/25)(取25ml溶液)六、注意事项1土样风干时N03-N会发生变化，所以要用鲜土测定，如需用干土重计算，同时另取样测水分。 2滤液必须澄清，因此提取N03-N时加入凝絮剂CaS04，CaC03等。如滤液有色，可加少许活性炭摇动后过滤去色。 3如土样C1多(超过15ppm)，提取液需用Ag2S04处理去C1。方法是：100ml滤液中加0.1gAg2S04，振荡15分钟。再加0.2g Ca(OH)2和0.5gMgC03，沉淀多余的Ag+，振荡5分钟后过滤，取滤液测N03-N。 4。蒸干过程中为防止N03-N损失，加入少量CaC03，保持溶液弱碱性。5N03-N与酚二磺酸反应必须在无水条件下进行，反应前必须蒸干。已经蒸干时不要 再继续加热。 6碱化时用NH40H，不要用NaOH或KOH。七、思考题1酚二碘酸比色法测NO3-N的反应条件要求有哪些?2该法可能有些什么干扰测定?如何克服?3操作过程中加CaS04和CaC03各起什么作用?实验六土壤有效硫的测定Ca(H2P04)22NHOAc提取-BaS04比浊法 一、方法原理 用Ca(H2P04)22NHOAc溶液提取土壤有效硫，(包括可溶性硫酸盐和翠附性硫酸盐)，用H202氧化除去溶液中少量有机质，然后用BaS04比浊法测定。 二、试剂 1Ca(H2P04)22NHOAc浸提液：取5.1gCa(H2PO4)2H20溶于2500m1 2N HOAc溶液中(145mlHOAc加水至2500ml)。 2H202(30)，HCI(1 : 4) 30.25阿拉伯胶水：0.25g阿拉伯胶，溶于lOOml热水。 4，BaCl22H20晶粒(0.25 0.5mm)。 5S 标准溶液(100ppmS)：0.5436gK2S04溶解定容为1000ml，此为100ppmS溶液。再用水稀释为25ppmS(吸25m1 100ppmS溶液稀释为lOOml)。 三、仪器 振荡机，分光光度计，电热板 四、操作步骤 1取lmm土样10.00g，放入150ml三角瓶中，加50ml浸提剂,塞紧塞子，振荡1小时，过虑。 2取20ml滤液，放人lOOml三角瓶中，电热板上加热，滴加5滴30H202氧化有机质，反应后再煮沸一会，去尽H202，加入1:4HCl 1ml。 3溶液全部移入25ml容量瓶，少量水洗三角瓶数次，洗液也移入容量瓶。加入0.25阿拉伯胶2ml，用水定容。 4加入BaCl22H20晶粒1.0g，塞紧摇动1分钟。 5在530分钟内，比色测定，波长为440nm，用3cm比色皿。从标准曲线上查出溶液浓度。 标准曲线绘制： 吸取25ppmS溶液0，1，2，3，4，5ml，分别放人25ml容量瓶，加入1 ：4HCl lml，0.25阿拉伯胶2mL，用水定容，同操作4，5进行，绘制标准曲线，标准系列S浓度为0，1.0,2.0, 3.0，4.0，5.0ppm。五、计算 土壤有效sppm = (ppmS * 50 * 25)/(10 * 20) = ppmS * 6.25 六、注意事项l.Ca(H2P04)22NHOAc提取法适用于酸性土壤，对多数作物的临界值范围大致为812ppm。如测定中性、石灰性土壤，可用0.5 MOL.L-1 NaHC03(pH8.5)为浸提剂 。2浸提温度最好在20 25OC。3Ba2C122H20晶粒需先研细，取0.25 0.5mm粒径的用。可加入容量瓶用力振摇反应，也可将溶液倒入烧杯，加晶粒，用磁力搅拌反应。4. 悬浊液稳定时间30分钟，所以应在30分钟内比浊完，如悬浊度较高也可用2cm或1cm比色皿。 5在S浓度低时(lppm)，曲线部分不成直线关系，所以尽量不用低浓度部分。如溶液含S量低，可以多取滤液浓缩后测定，或是在溶液中添加标准溶液(例如加入25ppmS标准溶液lml，浓度提高lppm)，使溶液含S浓度增加，比浊读数在标准曲线上的线性部分，在计算时，再将添加的量减去。七、思考题1为什么要用H202除去滤液中的有机物?2.比浊法测S在反应条件方面应注意些什么?实验七 土壤全磷的测定(一)NaOH碱熔一钼锑抗比色法一、方法原理用NaOH熔融分解土样，使磷转化为可溶性磷酸盐，制备待测溶液。取待测液在一定酸度条件下与钼锑抗反应生成磷钼杂多酸，其中Mo5+被抗坏血酸还原为Mo6+，生成钼兰，比色测定可得溶液磷浓度。该法测定范围为0.1 1.4pm(P)。二、试剂1NaOH(固体)2. 4MOL.L-1(1/2H2SO4):120ML浓H2SO4慢慢加入960ml水中,搅拌,冷却后装瓶.32，4二硝基酚：0.4g 2，4二硝基酚溶于200ml水中。4，10 Na2C03：40gNa2C03加水至400ml。55 H2S04：，20ml浓H2S04，慢慢加入380ml水中。66.5mol.l-1钼锑贮备液：180ml浓H2SO4慢慢加入400ml水中，冷却。20g(NH4)2Mo04加入300ml水中(60OC)溶解，冷却。0.5g酒石酸锑钾溶于100ml水。将慢慢加入中，搅匀；再将加入，冷却后加水至1000ml，贮于棕色瓶中。7钼锑抗溶液(使用当天配) 1.5g抗坏血酸加入100ml钼锑贮备液中，溶解。8P标准溶液：KH2P04在105OC烘2小时。取0.4390g，溶于水，加入3mlH2S04，移入1000ml容量瓶，用水定容，此为100ppmP标准液。取此液5ml放人100ml容量瓶，水定容，得5ppmP标液。 三、仪器马福炉，银坩埚，分光光度计，电炉。四、操作步骤(1)样品处理，待测液制备：1称取100目土样0.3g左右，称准至1万。 2用台秤取2g NaOH固体，将其中一半小心放入银坩埚底，铺散开。将土样倒在NaOH上，再将剩下的NaOH倒在上面。3先在电炉上加热，去除水分，然后将银坩埚放人马福炉，盖上盖子。逐步升温至720OC保持20分钟。4取出坩埚，用少量水溶解熔块(可稍加热)，溶液转入100ml容量瓶。多次进行上述操作直至熔块完全溶解。最后用4 MOL.L-1 H2S04洗坩埚，洗液也转入容量瓶。 5加入10ml4 MOL.L-1(1/2 H2S04)，冷却后用水定容。澄清或过滤后，供测全P、全K用(可过滤于干净三角瓶中)。(2)测定：取待测溶液5ml，放入25ml容量瓶中，加水约10ml。加入2，4二硝基酚2滴，用10Na2C03或5 H2S04调节pH至刚显微黄色。加入钼锑抗溶液250ml，摇动去气泡，用水定容，放置15分钟后比色测定。波长660nm。由标准典线上查出溶液P浓度(ppm)。标准曲线绘制：分别取5ppm磷标准溶液0、1、2、3、4、5ml，放人25ml容量瓶中，同测定进行，该标准系列浓度依次为0，0.2，0.4，0.6，0.8，1.Oppm(P)。作标准曲线。五、计算：P(g/kg) = (ppm * l00 * 25 * 1000)/(W * 5 * 106) =( ppm * O.5 )/W六、注意事项1土样和NaOH比例约为1:8，土样量多时，NaOH量应相应增加。称取的土样放人银坩埚中要散开不要堆成团粒，以便土样与NaOH充分接触反应。也可以将土样放在坩埚底，滴几滴乙醇使土散开，然后盖上NaOH。2NaOH易吸水，称量后要尽快放入坩埚并在电炉上烘干。也可以放人马福炉中先升温至2003000C，停10分钟，使水分去尽，然后再升温至7200C，否则会因NaOH会水分多而在熔融过程中样品和NaOH从坩埚边溢出。 3银坩埚只能在9500C以下使用，否则会熔化。所以必须校正和控制马福炉温度，在7200C熔融。 4熔融好的样品冷却后表面平滑无气泡，颜色多呈兰绿色(Mn2+的颜色)，如仍为土黄色或黑色，说明还未熔融好，可以再放人马福炉在720熔融10 20分钟。 5银坩埚的盖子在熔融过程中应盖上，但边上露出一小缝以便出气和空气流通。冷却后溶解样品熔融物时，盖子也应用少量水洗净。 6熔融物不易很快溶解，可以稍加热，但不可煮沸，否则会溅出损失。每次用510ml水溶洗，用玻棒搅动加速溶解，多进行几次可全部溶出。也可以在坩埚中加较多水，放置过夜则熔融物很容易溶解。7加入1/2H2SO4(4 MOL.L-1)是为了中和多余的NaOH，使溶液呈酸性(约0.3mol.l-1)，让硅沉淀下来。加入H2S04量应根据所用NaOH量多少而加减。8所取待测液体积根据磷含量多少而适当变化，含量低(钼兰色浅)的可取10ml，含量高的可取2ml，在计算时按实际取用量计算。 9为了使显色溶液酸度适宜，待测液要先调pH近中性，且指示剂在酸性条件下应无色。2. 4二硝基酚在pH3.8以下为无色，pH4.0左右为微黄色。用10Na2C03溶液调节溶液刚由无色显微黄色即可。如加多了变成黄色，可用稀H2SO4反滴至黄色刚刚消失或微黄色。10钼锑抗应当天配制，冬天时可二天内有效，时间长了因抗坏血酸氧化等原因而失效。加入的量要准确，否则显色液酸度等会变化。11加入钼锑抗后，会有C02气泡放出，必须摇动使气泡放完，再加水定容，否则可能有溶液溢出。12定容后放置时间，20以下应放15分钟以上，20C以上只需放5 10分钟即可显色完全。稳定时间可达8小时以上，低温时，尤其是磷浓度较高时，可能会有兰色沉淀生成，可以稍加温(30)待兰色溶解后再比色。 七、思考题1用碱熔法处理土样的理由是什么?碱熔处理样品时要注意些什么?如何判断熔融是否成功?2钼兰法测磷显色反应的适宜酸度是多少?实验中如何来达到这一适宜范围的?3碱熔钼锑抗法测磷在土样称样量，NaOH用量，显色时所取待测液体积：显色剂用量等方面有什么关系及规定?(二)HCl04H2S04酸溶钼锑抗比色法一、方法原理 土壤样品用HCl04H2S04消煮，使矿物态和有机态磷都转化为磷酸，然后用钼锑抗比色法测定。二、试剂1浓H2S04、HCl04(70 72)24 MOL.L-1 NaOH：80g NaOH溶于500ml水中 其它试剂同实验七(一)、试剂38。三、仪器开氏瓶、电炉、分光光度计。四、操作步骤1称土样(100目)05010OOg，放人100ml开氏瓶中，加几滴水湿润，加5ml浓H2S04，摇匀，再加HCl04lml，放在电炉上捎煮20分钟。2再滴加HCl0410滴左右，消化1020分钟，使HCl04分解完全。冷却。3小心加20 30ml水于开氏瓶中，冷却后，将溶液转入100ml容量瓶，再用水少量多次洗净开氏瓶，洗液也全部移人容量瓶。冷却后水定容。4用无磷滤纸过滤于干的三角瓶中，待测。5。取滤液5 10ml，同实验七，操作步骤(2)测定步骤进行。中和时用NaOH调至微黄色。 五、计算P(g/kg) = 待测液P(ppm) * V * V2 * 10-3 /(W * V1)式中：P(ppm)，比色测定后由标准曲线查得浓度 V：消化液定容体积(100m1) V1：吸取滤液体积(5 10m1)V2：显色溶液体积(25m1)W：土样重(g)六、注意事项1。HCl04与有机质作用剧烈，易发生爆炸，所以含有机物多的土壤，可以先用H2S04消化510分钟，然后再加HCl04消化。”2消化好的土样应无黑色或棕色，如不是白色或灰白色，应再加HCl04继续消化。最后应消化使HCl04全部分解。3消化后开氏瓶中为浓酸，加水稀释应小心，瓶口不要对人。4中和H2S04时用4 MOL.L-1 NaOH，不用Na2C03溶液。 5该法只能分解97 98土样，结果比碱熔法低。七、思考题1酸解法消煮土样测磷有何优缺点?消煮操作中应注意什么?2钼锑抗比色法测磷的适用范围多少?如何使比色溶液磷浓度在此范围内?实验八 土壤速效磷的测定(一)中性和石灰性土壤速效磷测定 一、方法原理 用0.5 MOL.L-1 NaHCO3溶液提取土壤速效磷，用钼锑抗比色法测定。 二、试剂 10.5 MOL.L-1 NaHC03：称84g NaI-IC03溶于1500ml水中，用0.5 MOL.L-1 NaOH调节pH为8.5，然后加水至2000ml。 2无磷活性炭：新购的活性炭，用2 MOL.L-1 HCl浸泡过夜，用水冲洗多次，再用0.5 MOL.L-1NaHC03浸泡过夜，在平瓷漏斗上抽气过滤，用蒸馏水淋洗多次，并检查至洗液无磷为止。然后烘干装瓶备用。 3其它试剂同实验七(一)试剂6、7、8。 三、仪器 振荡机、分光光度计 四、操作步骤 1称取lmm风干土样2.50g，放人150ml三角瓶中，加入0.5 MOL.L-1 NaHC03溶液50ml，加无磷活性炭一小勺，塞紧塞子，在振荡机上振荡30分钟。2干过滤于三角瓶或烧杯中。3吸取滤液5.00ml放人25ml容量瓶中，加2、4一二硝基酚2滴，用2 MOL.L-1(1/2H2S04)调溶液至微黄色或微黄色刚褪，边加边摇，使CO2气泡放出。如H2S04加入过多，用NaOH反调至微黄色。 4加水至20ml左右，再加入钼锑抗溶液2.50ml，用水定容，放置15分钟，用波长700nm比色测定。标准曲线：分别取5ppm标准P溶液0、1、2、3、4、5ml，放人25ml容量瓶中，加水至20ml，加钼锑抗溶液2.50ml，水定容，放置15分钟后与样品溶液同样比色测定，P标准系列浓度为0，0.2，0.4，0.6，0.8，1.0ppm，作标准曲线。五、计算有效P(ppm) = 显色溶液P(ppm) * 50 * 25 /(2.5 * 5)=ppm * l00六、注意事项1称土样量可为5g，这时提取液NaHC03用量为100ml，即土液比必须保持1:20。2活性炭应无磷，新买来的活性炭大多数都含许多磷，必须除磷处理后才能用。由于活性炭对磷有吸附作用，虽然在NaHC03溶液中HC03会抑制对PO4-3的吸附，但仍应注意活性炭用量不可太多，否则会使结果偏低。 3温度对提取的磷量有影响，所以尽可能在2025温度币提取，同一批样品应在同一温度下提取测定。 4振荡时间长短也会影响提取量，所以统一振荡时间为30分钟。振荡后立即过滤不要长时间放置。5中和时由于大量CO2放出，要小心不让溶液喷出，要让CO2放完后再加钼锑抗试剂和定容，否则还会再放出C02而使溶液溢出。 6如不中和NaHC03而加钼锑抗试剂，显色液酸度为0.45 MOL.L-1，也在该法显色酸度范围内，所以操作中也可以取5.00ml滤液於25ml容量瓶中加lOml水，然后加2.5ml钼锑抗试剂，摇动使反应生成的C02去尽，再用水定容，比色测定。用此法时，标准曲线绘制必须取5ppmP标准溶液0、1、2、3、4、5ml，各加入5m1 0.5 MOL.L-1 NaHC03溶液，然后加钼锑抗试剂，使标准溶液和样品溶液的酸度条件相同。也有的实验中另行配制7.5 MOL.L-1钼锑抗溶液(比上述实验所用钼锑抗溶液酸度高1 MOL.L-1)用于显色测定，这样不经中和过程直接加显色剂，显色溶液酸度仍为0.65 MOL.L-1。七、思考题1中性、石灰性土壤为什么用pH8.5 NaHCO3,溶液来提取速效磷? 2振荡提取过程哪些因素会影响提取量?3活性炭在提取过程中的作用及使用注意事项。4在选择和调节显色溶液的酸度方面你认为如何做较好?(二)酸性土壤速效磷的测定(0.03 MOL.L-1NH4F0.025 MOL.L-1HCl法)一、方法原理酸性土壤的磷多以FeP和A1P形态存在，F-在酸性溶液中能络合土壤活性磷酸铁铝中的Fe+3，A1+3，而释放出PO4-3，提取出来的磷再用钼锑抗比色法测定。二、试剂1，0.03 MOL.L-1NH4F0.025 MOL.L-1HCl：2.22gNH4F溶于1000mL水中，加人主NHCl 50ml，然后加水至2000ml，放塑料桶中。20.8 MOL.L-1H3B03：25gH3B03溶于500ml热水。30.5 MOL.L-1NaOH：4gNaOH溶于200ml水，装入滴瓶中。4其它试剂同实验七