粮食检验 储粮真菌的检测-孢子计数法-编制说明

粮食检验   储粮真菌的检测  标准编制说明  国家粮食局标准质量中心  国家粮食局科学研究院   2 / 7 粮食检验  储粮真菌的检测 1. 工作概况  目背景和来源  我国是粮食储备大国，储备粮的安全是关系国计民生的头等大事。 在储粮过程中真菌的危害是造成粮食损失的一个主要原因。预防储粮真菌危害最为有效的方法，就是早发现、早处理，将危害控制在萌芽状态。 因此 ，储粮真菌危害的早期检测是解决这个问题的关键，但目前这项技术仍是制约全球各国安全储粮的一个瓶颈。近几十年来，国内外相 关研究有很多报 道 ，利用真菌某些特定的化学成分或代谢物质检测，进行储粮真菌危害的预报，是用的最多的一种方法 ， 如 细胞壁多糖、麦角甾醇、真菌酶类及一些真菌挥发性物质等的检测。但这些成果多数仍处于研究阶段，实际应用较少。  项目承担单位 对储粮真菌危害早期检测方法进行了研究，并建立了一个储粮真菌危害快速的早期检测方法。 该 方法的特点是在传统的细胞计数法基础上， 通过对真菌孢子检测浓度设限（ 105 个 /g），消除了样品自身携带真菌孢子的干扰，达到仅检测在储粮中生长的危害真菌的目的。 方法 可用于检测粮堆发热之前真菌生长变化 的情况。  本标准的研究工作经历 5年多的时间，包括三个阶段的研究过程。首先 进行方法条件优化 ； 通过 12 家检测单位进行方法验证，最后通过了标准中心组织的方法比对试验 。  在上述几个阶段研究的基础上，编制了 粮食检验  储粮真菌的检测 （征求意见稿）标准文本及其编制说明 。   要工作过程  准研究  本标准 历经 5 年多时间，研究工作共分三个阶段 ， 首先进行方法条件优化；通过12家检测单位进行方法验证，最后通过了标准中心组织的方法比对试验。  第一阶段的研究 ，主要是对 检测方法进行优化 ， 通过不同 粮食样 品的检测 ，对称样量、振荡时间、筛网孔径等因素进行优化； 第二阶段 研究 ， 主要开展 多家单位的方法验证， 国家、省、直辖市八家检测单位参加了验证工作，考察方法的再现性 。 第三阶段研究 3 / 7 主要开展 方法的比对试验，由标准中心组织， 9 家省粮油质检站技术骨干参加方法比对试验，反映 该方法与粮食微生物的相关性 。  准制定  成立标准工作组；  编写标准讨论稿；  编写标准征求意见稿和编制说明，征求粮油标委会全体委员及国家有关管理部门意见；  制原则   粮食检验  储粮真菌的检测 是建立在科学研究基础上，为 储粮行业服务，切实保障我国储备粮安全及企业经济利益的一项技术性标准。标准编制过程中主要遵循以下原则：  以大量的实验室及 基层检测人员检测 数据为基础，首次制定 粮食检验  储粮真菌的检测  标准。  广泛征求行业主管部门和储藏安全评价技术专家的意见，并进行修改完善。  文本编写按照   准化工作导则   第 1部分：标准的结构和编写规则及  准化工作导则   第 2 部分：标准中规范性技术要素内容的确定方法的要求进行。  3 主要研究内容及试验结果综述  要  本方法是在传统的细胞计数法基础上，经改进，建立的一种用于储粮真菌危害早期快速检测的新方法。本方法特点是，对样品真菌孢子提取浓度设在 105个 /消除了样品中携带真菌孢子的干扰，达到对储粮危害真菌快速检测的目的。  究内容  取 条件优化   4 / 7 1） 称样量   称取同一被感染小麦样品 行样品量对检测结果的影响的试验。研究结果表明，在本试验条件下，称样量对测试结果无明显的影响。本方法称样量定为  2） 提取时间   称取同一被感染的小麦样品 择 个梯度，进行提取条件的优化，结果表明，提取时间对样品危害真菌孢子计数无明显的影响，本方法提取时间定为 1 3） 过滤孔径   选择 60、 100、 200、 300、 400、 500 目滤布，进行不同滤布孔径过滤，对检测结果的影响试验。结果表明，采用不同孔径滤布过滤对最终检测结果无明显的影响，但对观察的显微镜视野有显著的影响，在本方法中推荐滤介质孔径为 300目。  复性  选择了三个不同感染水平的小麦和稻谷样品，进行方法的重复性试验（ n=8）， 结果见表 1。  表 1 重复性实验（ n = 8）  样品  真菌孢子数 /105 个 /g 小麦  稻谷  1        6.0 x  由 上 表可知，三个感染水平的小麦和稻谷样品，八次重复，相对标准偏差（ 变化在   这一结果对于微生物常规检验，误差处于一个较低的水平。由此可看出，本方法具有 较 好的重复性。  法验证  选择了 8家省级粮油质量监督检验站（北京、天津、山东、江苏、浙江、江西、湖北、安徽）和 4家相关分析检测中心，按危害真菌孢子计数方法，对四个不同感染水平的小麦、稻谷、玉米、大豆样品进行检测，检测结果见表 2   5 / 7 表 2 再现性实验（ n=12）  检测单位       粮种  真菌孢子数 /105 个 /g 小麦  稻谷  玉米  大豆  1         0 1 2 .3 x  D 表 2可知，小麦、稻谷、玉米、大豆四个样品，每个样品经 12家相关检测单位，测定三个平行样品取其平均值，检测结果相对标准偏差（ 变化在 这一结果对于微生物常规检验，误差处于一个较低的水平。由此可看出，本方法具有较好的再现性。  平板菌落计数法比较  根据储粮安全水分项目研究需要，国家粮食局粮油标准质量中心主持，由国家粮食局科学研究院和 9个省级粮油检测站（中心）参加，对危害真菌孢子计数法 与经典平板菌落计数法 进行 了 2 次比对试验 ，届时三个多月 ， 危害真菌孢子计 数法验证结果及与经典 平板菌落计数法结果进行线性分析，结果见下图。   6 / 7 0 100000 200000 300000 400000 500000 6000000500000010000000150000002000000025000000Y =34  5 1 5 X+23 5 2 2 9 0R = 5 5从图可看出，两种方法检测结果具有良好的一致性。  根据 大量研究和 相关研究报导，对本方法进行储粮真菌危害早期检测，提出一个初步的判定方法。详见表 3。  表 3 储粮真菌危害检测判定方法  级别  危害真菌孢子数 /个 /g 安全性评价  主要危害真菌    未检出  安全  未出现危害真菌生长    105 105 临界  （关键控 制区）  以灰绿曲霉为主，后期，会出现少量白曲霉等的生长。    106 106 危害  灰绿曲霉生长优势逐渐被白曲霉替代，并会出现少量其它真菌的生长。     107 严重危害  以白曲霉为主，后期会出现一些黄曲霉、青霉等危害真菌的生长。  在本判定方法中，初步将储粮真菌的危害划分为级，级为安全储藏，危害真菌孢子计数为未检出（检出限为 105个 /g）。级为危害真菌生长初期，主要生长的真菌为灰绿曲霉，后期会出现少量的白曲霉等其它真菌。在这时期真菌对储粮品质危害较小，用常规测 温设备一般不会检出粮堆中发热现象。但它将预示着在未来一段时间内粮堆有可能出现发热、发霉现象。级危害真菌的生长进入了中期，灰绿曲霉生长优势逐渐被白曲霉所替代，还有一些其它真菌也开始生长，在这时期对储粮的品质会造成一定的影响，粮堆中有可能会出现小范围的发热和发霉现象。级主要以一些发热真菌生长为主，这时粮堆中会出现较大范围的发热、发霉现象。会对储粮造成严重的危害，后期还有可能产生真菌毒素。上述所描述的是储粮危害真菌生长的一般规律，不同粮种危害真菌生长变化存在着一定的差异。在储粮过程中这些真菌危害的程度和发展进 程主要 7 / 7 取决于粮堆中粮食的水分和环境温度的变化。采用本方法，通过定期检测粮堆中危害真菌的生长变化，可进行储粮真菌危害的预测。  4 技术经济论证结论，预期的经济效益  本标准从真菌孢子的角度对粮食的真菌危害进行分析，填补了我国储粮危害真菌早期检测技术的空白，为深化粮食质量安全的研究奠定基础条件。项目的研究成果为全社会共享，将用于我国储备粮的质量监控，有助于实现粮食质量的快