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文档简介

.,1,重组腺病毒的构建,.,2,腺病毒Adenovirus最初由人类腺样增殖体组织培养中分离得到的，此病毒名称也由此而来。质粒是直径约70毫微米的正二十面体，各顶点具有突起。结构亚基总数为252个。核酸是双链DNA，分子量2025106。无包膜。在被感染的细胞核中增殖，病毒蛋白在细胞质内合成，再输送到细胞核。腺病毒可见于人、鸡、牛、狗、鼠、猪和猴中，并各自具有严格的寄主特异性，不感染他种动物。对人类可引起感冒症状、呼吸系统不适等。,腺病毒,.,3,腺病毒是一种大分子线性双链无包膜DNA病毒。它通过受体介导的内吞作用进入细胞内，然后腺病毒基因组转移至细胞核内，保持在染色体外，不整合进入宿主细胞基因组中.,.,4,ITRE1a/E1bE2E3E4ITR,腺病毒的基因及其功能,腺病毒基因组编码数十个腺病毒的结构和功能蛋白，分为早期表达和晚期表达。早期表达的蛋白是功能蛋白，晚期表达的有功能蛋白也有结构蛋白，并且早期的功能蛋白能够调控晚期蛋白的表达。早期表达的E1区蛋白（甚至包括E2区蛋白）是腺病毒基因组复制、病毒包装和其他蛋白表达翻译所必须的，但其对细胞毒性也是很强的。E2蛋白涉及AdDNA复制E3蛋白对抗宿主的抗病毒防御系统E4蛋白调节有效的晚期基因转录,.,5,腺病毒分类,第一代腺病毒载体：一般将E1或E3基因缺失的腺病毒载体成为一代载体。此类型载体在未纯化时可引发机体产生较强的炎症反应和免疫反应，纯化后可安全使用，体内表达周期可达4周。（科研、临床应用最广泛，一般常用Ad5型腺病毒）第二代腺病毒载体：一般将E2A或E4基因缺失的腺病毒载体成为二代载体。产生的免疫反应较弱，其安全性和载体容量有所改进，但病毒包装难度和出毒滴度下降厉害，应用局限。第三代腺病毒载体：缺失了全部的（无病毒载体等）或大部分腺病毒基因，仅保留ITR和包装信号序列。这一载体系统需要一个腺病毒突变体作为辅助病毒。,.,6,腺病毒载体大多以5型（Ad5）、2型（Ad2）为基础,重组系统由2种质粒构成：一、包含全部（或右侧大部分）腺病毒基因组DNA的大质粒，即骨架质粒,.,7,二、小的穿梭质粒，其带有目的基因的表达盒以及表达盒两侧的与大质粒上的目的基因拟插入部位同源序列（左右臂）,.,8,.,9,AdEasy腺病毒载体
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