qPCR引物设计ppt课件_第1页
qPCR引物设计ppt课件_第2页
qPCR引物设计ppt课件_第3页
qPCR引物设计ppt课件_第4页
qPCR引物设计ppt课件_第5页
已阅读5页，还剩9页未读， 继续免费阅读

下载本文档

版权说明：本文档由用户提供并上传，收益归属内容提供方，若内容存在侵权，请进行举报或认领

文档简介

.,1,荧光定量PCR,.,2,引物要求：（1）设计的时候尽量靠近基因的3端，这样能最大限度地保证扩增效率（2）尽量跨越内含子，这样可以保证检测有无基因组污染（3）两条引物的Tm值不要相差太大（4）产物长度保证在80200bp之间，最长300bp。（5）避开保守区域,荧光定量PCR引物设计（SYBRGreen）,.,3,1.NCBIPrimerblast,NCBI设计引物网址：/tools/primer-blast/,.,4,Primerblast,输入基因号或FASTA序列,定义引物的范围（举例：针对长3k的基因，若扩增1000-1050的范围，则可填入Forward1to1000,Reverse1050to3000,若有已知引物，可填入，以测试特异性,针对sybrqPCR：产物大小填100to200（最大不超过300）,可用默认值（最佳Tm为60度，波动范围57to63度，两条引物Tm差值小于3度）,.,5,Primerblast,引物是否需跨不同Exon选择1-无所谓选择2-必须跨不同Exon选择3-可以不跨Exon,勾选时表示两条引物之间必须包括一个以上的Intron（当以基因组DNA为模板时）,.,6,Primerblast,勾选时表示要检测引物的特异性,填入要比较的物种（可输入通用名，如human/mouse/rat/rabbit当需要同时比较多物种时，点击”Addmoreorganisms”,勾选”showresultsinanewwindow”-点击”GetPrimers”,.,7,Primerblast结果,.,8,专业的定量PCR设计软件：beaconDesigner1搜索引物保守序列（与转录组比较）,2beaconDesigner设计qPCR引物,黄色区域为相对保守序列，设计引物是要尽量避开,.,9,专业的定量PCR设计软件：beaconDesigner2设计引物,2beaconDesigner设计qPCR引物,.,10,.,11,3qPCR引物特异性验证,1、进入网页：/BLAST/2、点击BasicBLAST中的n
人人文库> 全部分类> 应用文书 > 事务文书

温馨提示

  • 1. 本站所有资源如无特殊说明，都需要本地电脑安装OFFICE2007和PDF阅读器。图纸软件为CAD,CAXA,PROE,UG,SolidWorks等.压缩文件请下载最新的WinRAR软件解压。
  • 2. 本站的文档不包含任何第三方提供的附件图纸等，如果需要附件，请联系上传者。文件的所有权益归上传用户所有。
  • 3. 本站RAR压缩包中若带图纸，网页内容里面会有图纸预览，若没有图纸预览就没有图纸。
  • 4. 未经权益所有人同意不得将文件中的内容挪作商业或盈利用途。
  • 5. 人人文库网仅提供信息存储空间，仅对用户上传内容的表现方式做保护处理，对用户上传分享的文档内容本身不做任何修改或编辑，并不能对任何下载内容负责。
  • 6. 下载文件中如有侵权或不适当内容，请与我们联系，我们立即纠正。
  • 7. 本站不保证下载资源的准确性、安全性和完整性, 同时也不承担用户因使用这些下载资源对自己和他人造成任何形式的伤害或损失。

最新文档

评论

0/150

提交评论