高中生物选修1PPT课件-DNA的粗提取与鉴定

专题5,DNA和蛋白质技术,课题1,DNA的粗提取与鉴定,1、DNA的溶解性DNA和蛋白质等其他成分在不同浓度的NaCl溶液中溶解度不同，利用这一特点，选择适当的盐浓度就能使DNA充分溶解，而使杂质沉淀，或者相反，以达到分离目的。,根据DNA在NaCl溶液中的溶解度曲线图，思考在什么浓度下，DNA的溶解度最小？DNA在NaCl溶液中的溶解度是如何变化的？,如何通过控制NaCl溶液的浓度使DNA在盐溶液中溶解或析出？,2、DNA在酒精溶液中的溶解性DNA不溶于酒精溶液，但是细胞中的某些蛋白质则可以溶于酒精。利用这一原理，可以将DNA与蛋白质进一步分离,3、DNA对酶、高温和洗涤剂的耐受性,蛋白酶能水解蛋白质，但是对DNA没有影响大多数蛋白质不能忍受6080的高温，而DNA在80以上才会变性洗涤剂可以溶解细胞的细胞膜，去除脂质和蛋白质,但对DNA没有影响,4.DNA的鉴定DNA与二苯胺（沸水浴）会染成蓝色,（一）实验材料的选取,实验设计,（二）破碎细胞，获取含DNA的滤液,1、动物细胞动物细胞的破碎较易，例如，在鸡血细胞液中加入一定量的蒸馏水，同时用玻璃棒搅拌，过滤后收集滤液即可,思考：为什么加入蒸馏水能使鸡血细胞破裂？,2、植物细胞植物细胞需要先用一定的洗涤剂和食盐，进行充分的搅拌和研磨。,讨论：加入洗涤剂和食盐的作用分别是什么？,答：洗涤剂是一些离子去污剂，能溶解细胞膜，有利于DNA的释放；食盐的主要成分是NaCl，有利于DNA的溶解,讨论：如果研磨不充分，会对实验结果产生怎样的影响？,答：研磨不充分会使细胞核内的DNA释放不完全，提取的DNA量变少，影响实验结果，导致看不到丝状沉淀物、用二苯胺鉴定不显示蓝色等,（三）去除滤液中的杂质,为了纯化提取的DNA，需要将滤液作进一步处理,讨论：此步骤获得的滤液中可能含有哪些细胞成分？,答：可能含有核蛋白、多糖和RNA等杂质,答：用高盐浓度的溶液溶解DNA，能除去在高盐中不能溶解的杂质；用低盐浓度使DNA析出，能除去溶解在低盐溶液中的杂质。因此，通过反复溶解与析出DNA，就能够除去与DNA溶解度不同的多种杂质,方案一利用DNA在不同浓度的NaCl溶液中溶解度的不同，通过控制NaCl溶液的浓度去除杂质。具体做法是：在滤液中加入NaCl，使NaCl溶液物质的量浓度为2mol/L，过滤除去不溶的杂质，再调节NaCl溶液物质的量浓度为0.14mol/L，析出DNA，过滤去除溶液中的杂质，再用物质的量浓度为2mol/L的NaCl溶液溶解DNA,答：方案二是利用蛋白酶分解杂质蛋白，从而使提取的DNA与蛋白质分开；方案三利用的是DNA和蛋白质对高温耐受性的不同，从而使蛋白质变性，与DNA分离,方案二直接在滤液中加入嫩肉粉，反应1015分钟，嫩肉粉中的木瓜蛋白酶能够分解蛋白质。方案三将滤液放在6075的恒温水浴箱中保温1015分钟，注意严格控制温度范围。,（四）DNA的析出与鉴定,1、DNA的析出DNA的析出用的是与滤液体积相等的冷却的酒精溶液（体积分数为95），静置23min，溶液中会出现白色丝状物，这就是粗提取DNA。用玻璃棒沿一个方向搅拌，卷起丝状物，并用滤纸吸取上面的水,2、DNA的鉴定鉴定DNA时在试管中先加入物质的量的浓度为2mol/L的NaCl溶液5ml于两只试管中，其中一只加入DNA丝状物，各加入二苯胺4ml试剂。混合均匀后，将试管置于沸水中加热5min,