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文档简介

.,实验九土壤微生物的分离与计数涂布平板法,.,一、实验目的,1、学习利用平板分离法从土壤分离微生物的基本操作。2、掌握微生物平板计数的方法。,.,二、实验原理,土壤是微生物生活的大本营根据某微生物的生长条件（营养，酸碱度，温度，氧气等）而供给它适宜的培养条件，或加入某种抑制剂造成只利于该菌生长，而抑制其他菌生长；用稀释涂布平板法获得单菌落（并不能绝对保证是纯培养，需要结合观察其菌落特征、个体特征，进一步分离纯化）。,.,样品充分混匀；,同一稀释度三个以上重复，取平均值；,每个平板上的菌落数目合适，便于准确计数。,.,一般用菌落形成单位（colonyformingunits，CFU）来表示原样品中的细胞数。,.,三、实验材料,1、土样：选择某一生境土壤，去表层土，挖520cm深度的土壤数10g，装入已灭菌的牛皮纸袋。2、培养基:牛肉膏蛋白胨培养基：细菌淀粉琼脂培养基（高氏1号）：放线菌每300ml培养基加入1ml3%的重铬酸钾抑制细菌和霉菌生长马丁氏培养基：真菌孟加拉红抑制细菌和放线菌,.,1、倒平板2、土壤菌悬液的制备,四、实验方法,10g土样+90ml无菌水振荡20min,3、梯度稀释取1ml土壤菌悬液移入含9ml无菌水的试管中，吹吸均匀，为稀释10倍的样品，依次进行梯度稀释10-110-6,.,4、涂布：取0.1ml适当浓度的稀释液涂布于相应平板，每个稀释度做3个平行，每种菌需要做9块平板，及时标记，涂布后静置10分钟。,.,5、培养将细菌、真菌、放线菌培养基倒置于30培养箱中培养3-5d。6、计数7、挑菌（纯化）将培养后长出的单菌落数量、形态、培养特征进行观察，分别挑取单菌落于相应平板上划线、分离，培养，检查菌落是否一致、单纯（也可以用显微镜涂片染色镜检是否是单一的微生物），如有杂菌需进一步纯化、分离。,每毫升菌落形成单位同一稀释度的三次重复平均数稀释倍数5,.,平板计数,五、思考题,1、记录利用稀释涂布法对土壤样品进行活菌计数的结果。,每克含菌
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