基本实验技术和方法PPT课件.ppt

1,小鼠、大鼠的基本实验技术和方法,2,在医学教学、科研和医疗工作中，不论是从事基础医学还是临床医学或预防医学，都需要用实验动物来进行各种实验。通过对动物实验的观察、分析，来研究需要解决的问题，动物实验方法已成为研究工作中必不可少的重要手段。,动物实验,3,动物实验前的准备实验动物的抓取和固定实验动物的编号与标记实验动物的麻醉实验动物给药方法各种检验标本的采集方法实验动物的安乐死及无害化处理,4,动物实验前的准备,动物实验的选择根据实验目的选择合适的实验室及实验室动物实验室要与实验动物同等级别饲养室应符合实验动物的生活习性及国家实验动物设施各项标准,5,6,实验动物的订购和运输,1必须向具有实验动物生产许可证的单位订购符合实验要求的实验动物2实验动物运输过程中，必须符合相应的微生物学等级要求。3实验动物购入后，必须进行健康检查和隔离检疫。小动物隔离检疫期3-7天；大动物14天以上。,7,8,皮毛：有无光泽、出血、干燥；眼：有无眼屎、流泪、白内障、角膜损伤等；耳：有无外伤、耳壳曲折、中耳炎等；四肢：有无弯曲、脱臼、外伤、关节炎；肛门：有无下痢、血便、脱肛等。,动物外观健康检查,9,实验中常用品种及品系,近交系小鼠C57BL、C3H、BALB/c、DBA/2等封闭群小鼠昆明小鼠ICR小鼠NIH小鼠近交系大鼠F344、SHR、ACI封闭群大鼠SDWistar,10,实验要求,操作时按照实习步骤，以严肃认真的态度进行。注意爱护动物和仪器。实习结束时，要整理用具，清洗器械，将实验用具归还原处。动物尸体集中于一盒内，放到焚尸炉处。,11,1、小鼠的抓取与固定,抓取步骤固定方法,12,大鼠的抓取与固定,13,2、雌雄鉴别,根据生殖器和肛门的距离来进行判断；成年雌性动物，小鼠有5对乳腺；大鼠有6对乳腺。,14,3、动物的编号,染色法3%-5%苦味酸涂皮毛法2%的硝酸银溶液（咖啡色）剪趾法耳缘打孔法挂牌法国外最新技术：芯片皮肤埋植法。,15,4、实验动物皮毛的去除方法,为了排除动物被毛对实验操作和观察结果的影响，实验中需要去除或剪短动物的被毛。1剪毛法2拔毛法3剃毛法4脱毛法,16,脱毛剂1)8%Na2SNa2S8g+水至100ml；也可用硫化钠8克、淀粉7克、甘油4克、硼砂1克，用自来水加至100ml。常用于兔及小鼠等小型动物的脱毛。上述配制好的溶液57ml可用于1512cm2皮肤的脱毛。2)10%Na2S硫化钠10克、氧化钙15克，自来水加至100ml。常用于狗、猪等较大动物的皮肤,17,5、给药方法,经口给药自动口服给药该法一般适用于动物疾病的防治、药物的毒性观察等。小鼠强制灌胃给药进针深度3cm灌胃量小鼠30g以上：1.0ml；25-30g：0.8ml；20-24g：0.5ml大鼠强制灌胃给药进针深度4-6cm灌胃量1.0-2.0ml/100g体重；通常1-4ml,18,注射给药,小鼠皮下注射部位：颈背、侧腹。进针深度510ml注射量为0.10.3ml/10g体重用注射器或套管针。大鼠皮下注射小于1ml/100g体重,19,腹腔注射,小鼠进针角度为45度进针3-5mm一次注射量为0.1-0.2ml/10g体重。大鼠：一次注射量1-2ml/100g体重,20,尾静脉注射,一般用4号针头或儿科头皮针选尾静脉下1/3处，呈30度角度注射小鼠一次注射量0.050.1ml/10g体重。大鼠一次注射量0.51.0ml/100g体重。,21,体液的采集方法,采血方法断头采血法X摘眼球采血法X剪尾采血眼眶静脉采血中等血量用毛细玻璃管或镊子刺小鼠：体重20-30g每次采血0.20.3ml大鼠：体重200g左右每次采血23ml,22,尿液的采集,代谢笼法通常用代谢笼装置，收集尿液、粪便和呼出的co2。反射排尿法,23,处死方法,安死术的概念：即安乐死术，是指以人道的方法处死动物的过程。在处死动物的过程中减少动物的惊恐或焦虑，安静地、无痛苦地死亡。原则：应尽量避免因处死不当而造成病理损伤应尽量使动物快速、安静、无痛苦地死亡。颈椎脱臼法,24,污物的无害化处理,污物应分类收集，实验动物废垫料与实验废弃品要分开，不得混放。实验后收集的污物要用污物处理容器，进行盛装。然后汇总于专用污物袋中进行一次性封闭处理。有机垃圾盛装器应密封有盖，防渗漏、防蝇、防鼠、并便于搬运及消毒。,25,污物的无害化处理,一次性口罩、帽子等使用后应装入专用垃圾袋回收焚烧处理。一次性使用的注射器、针头、手套等物品使用后经消毒剂浸泡清洗，毁形后按要求统一进行无害化处理。绝不可自行处理和随意扔掉。进行放射性实验所产生的废弃物，如果属于短半衰期且放射性较低的物品，放置6-10个半衰期后可以焚化处理。其他放射性废弃物，应进行中、长期安全包装后送放射性废物处理站处理。用过的废垫料要装入垃圾袋中或专用的垫料容器内，注意防蝇、防渗漏，并及时焚烧处理。,26,废弃动物及动物尸体无害化处理,实验结束后，受试动物尚未死亡，应采用安死术处理，并将动物尸体装入专用尸体袋中存放冰柜待统一焚烧。如实验过程中怀疑受试动物是因其它疾病死亡，应及时查明原因。动物尸体经消毒处理后装入尸体袋中，冷冻待焚烧处理。较大受试动物尸体需经过适当肢解后再进行焚烧焚烧效果应以污物全部化为灰烬为标准。,27,小鼠解剖步骤,小鼠称重麻醉麻醉药品：戊巴比妥钠、硫喷妥钠、水合胺醛、氯胺酮、乙醚等。常规按75mg/kg体重的戊巴比妥钠（7.5mg/ml）腹腔注射即0.1ml/10g体重大鼠：按40mg/kg体重的腹腔注射3%戊巴比妥钠,28,仰卧固定,29,