土壤中分解尿素的细菌的分离和计数(第二课时)

复习：1.如何分离土壤中分解尿素的细菌？2.如何对土壤中分解尿素细菌的数目进行计数？,土壤中分解尿素的细菌的分离和计数（第二课时）,课题2微生物的培养与应用,自主学习，发现问题,阅读课本P23-P26，根据导学案的提示，完成以下问题。,1.实验设计包括哪些内容？,2.实验设计的流程是什么？,3.每一步是如何操作的？注意事项是什么？,4.如何进行结果分析与评价？,小组讨论，启发思维,小组互对答案，对有疑问的问题相互讨论，并确定发言人，按导学案上的要求完成本组的问题展示。,实验设计包括对、和，以及等的综合考虑和安排。,实验方案,所需仪器,材料,用具,药品,具体的实施步骤,时间安排,学生展示，老师点拨，突破难点,一、实验设计流程,土壤取样,制备培养基,样品稀释,取样涂布,微生物的培养与观察,细菌计数,注意事项：取土样用的小铁铲和盛土样的的信封在使用前都要灭菌。,二.实验的具体操作及注意实项,土壤取样,从肥沃、湿润、酸碱度接近中性的土壤中取样。先铲去表层土3cm左右，再在距离地表3cm-8cm处取样，将样品装入事先准备好的信封中。,制备培养基,制备以尿素为唯一氮源的选择培养基和牛肉膏蛋白胨培养基。,注意事项：倒平板时要冷却到50，且要在酒精灯火焰旁进行。,注意事项：,（三）样品的稀释,应在火焰旁称取土壤10g。在稀释土壤溶液的过程中，每一步都要在火焰旁进行分离不同的微生物采用不同的稀释度,测定土壤中细菌的数量，一般选用104，105，106测定放线菌的数量，一般选用103，104，105测定真菌的数量，一般选用102，103，104,为什么分离不同的微生物要采用不同的稀释度？,原因：不同微生物在土壤中含量不同.例如在干旱土壤中的上层样本中：好氧及兼性厌氧细菌数约为2185万，放线菌数约为477万，霉菌数约为23.1万。,取样涂布,注意事项：实验时要对培养皿作好标记。注明培养基类型、培养时间、稀释度、培养物等。,注意事项：涂布器和移液管要保持无菌。如果得到了2个或2个以上菌落数目在30300的平板，则说明稀释操作比较成功，并能够进行菌落的计数，如果同一稀释倍数的三个重复的菌落数相差较大，表明试验不精确，需要重新实验。,微生物的培养与观察,培养：不同微生物往往需要不同培养温度。细菌：3037培养12d放线菌：2528培养57d霉菌：2528的温度下培养34d。,观察：在相同的培养条件下，同种微生物表现出稳定的菌落特征。包括：形状、大小、隆起程度和颜色。,微生物的培养与观察,（六）细菌计数,在菌落计数时，每隔24h统计一次菌落数目。选取菌落数目稳定时的记录作为结果，以防止因培养时间不足而导致遗漏菌落的数目。,三、操作提示,无菌操作,做好标记,规划时间,四.结果分析与评价,培养基未被杂菌污染,被杂菌污染,被杂菌污染或混入其他氮源,牛肉膏培养基上的菌落数目大于选择培养基上的数目,得到三个或三个以上菌落数目在30300的平板,接近,五.课外延伸,在以尿素为唯一氮源的培养基中加入酚红指示剂。培养某种细菌后，如果PH升高，指示剂将变红，说明该细菌能够分解尿素。,3.在以尿素为唯一氮源的培养基中加入酚红指示剂的目的是()A.筛选出能分解尿素的细菌B.对分离的菌种作进一步鉴定C.作细菌的营养成分D.如指示剂变蓝就能准确地认定该菌能分解尿素,当堂检测,1.能够测定样品活菌数的方法是()A.稀释涂布平板法B.直接计数法C.重量法D.比浊法,2.下列操作步骤顺序正确的是()土壤取样称取10g土样，加入盛有90mL无菌水的锥形瓶中吸取0.1mL土壤溶液进行平板涂布依次稀释至101、102、103、104、105、106、107稀释度A.B.C.D.,A,C,B,4.(2016四川，10)图甲是从土壤中筛选产脲酶细菌的过程,请据图回答下列问题：(1)图中选择培养基应以_为唯一氮源,鉴别培养基还需添加_作指示剂，产脲酶细菌在该培养基上生长一段时间后，其菌落周围的指示剂将变成_色。(2)在5个细菌培养基平板上，均接种稀释倍数为105的土壤样品溶液0.1mL，培养一段时间后，平板上长出的细菌菌落数分别为163、156、262、178和191。该过程采取的接种方法是_，每克土壤样品中的细菌数量为_108个；与血细胞计数板相比，此计数方法测得的细菌数目较_。,尿素,酚红,红,稀释涂布平板法,1.9,少,5.(2015浙江自选模块，17节选)某工厂为了生产耐高温植酸酶饲料添加剂，对该酶菌株进行筛选，其流程如下图所示。请回答下列问题：(1)土壤悬液首先经80处理15分钟，其目的是筛选出_。(2)在无菌条件下，将经过处理的土壤悬液进行_，然后涂布于含有植酸钠的固体培养基上。培养后观察到_(3)筛选获得的菌株经鉴定后，将优良菌株进行液体扩大培养。培养时需要振荡，其主要目的是_。液体培养基与固体培养基相比，不含有的成分是_。,土样中的菌种筛选菌株鉴定优良菌株扩大