药物分析第十五章甾体激素类药物分析

第十章甾体激素类药物的分析Analysisofsteroidhormones,激素（Hormone，荷尔蒙）是人体内各种内分泌腺所分泌的一种生物活性物质。激素作用于特定的称为靶器官的组织、细胞上而发挥作用。如果激素分泌出现平衡失调，可使人体发生病变，如甲亢、糖尿病等。,概述,甾体激素类药物均具有环戊烷骈多氢菲母核。,第一节基本结构与性质,按照C10,C13,C17取代基不同分类,按药理作用分类,第一节基本结构与性质,43酮基（紫外吸收）,天然皮质激素：氢化可的松,孕甾烷母核有21个碳原子,C17醇酮基（还原性）,孕甾烷母核,第一节基本结构与性质,3,11,17,20,21,氢化可的松(hydrocortisone),醋酸地塞米松(dexamethasoneacetate),16-甲基,21-酯化,17-羟基,9-氟,3-酮,1,2-双键,11-羟基,20-酮,第一节基本结构与性质,第一节基本结构与性质,A环4-3-酮基,为共轭体系,在波长240nm附近有紫外吸收,部分药物在C1-C2之间有双键,也有紫外吸收,肾上腺皮质激素类药物结构特征,第一节基本结构与性质,C17位上为-醇酮基,具有还原性.多数药物有C17-羟基,部分药物-醇羟基与酸成酯.,第一节基本结构与性质,部分药物的C6或C9位由卤素取代,呈相应的卤化物反应,第一节基本结构与性质,部分药物C11位上有羟基或酮基取代,第一节基本结构与性质,甲睾酮(methyltestosterone),丙酸睾酮(testosteronepropionate),苯丙酸诺龙(nandrolonephenylpropionate),17-羟基,第一节基本结构与性质,甲睾酮(methyltestosterone),A环4-3-酮基,C17位上为羟基,部分药物的羟基被酯化,雄性激素上的母核为19个碳原子,蛋白同化激素在C10位上一般无角甲基,母核只有18个碳原子,第一节基本结构与性质,A环4-3-酮基,C17位上有甲酮基或乙炔基.,孕甾烷母核有21个碳原子,口服被迅速破坏失效，只能肌注,43酮基,第一节基本结构与性质,黄体酮(progesterone),醋酸甲地孕酮(megestrolacetate),米非司酮(mifepristone),第一节基本结构与性质,天然的雌性激素：雌二醇,雌甾烷母核有18个碳原子,A环为苯环，C3位上有酚羟基，C17位上有羟基,结构不稳定，口服无效,第一节基本结构与性质,结构修饰,炔雌醇,戊酸雌二醇,苯甲酸雌二醇,乙炔基引入，使仲醇变叔醇，增加空间位阻，阻碍酶对药物的氧化代谢，可口服,17位羟基酯化，酯在体内缓慢水解，延效,3位羟基酯化，酯在体内缓慢水解，延效,可口服高效长效,人工合成代用品：非甾体化合物,己烯雌二酚,高效、长效,第一节基本结构与性质,特殊官能团与分析方法,第二节理化性质与鉴别试验,白色至微黄色粉末或结晶性粉末。三氯甲烷中微溶至易溶；甲醇或乙醇中微溶乙醚或植物油极微溶水中不溶,1.性状与溶解度,第二节理化性质与鉴别试验,2、熔点一具有鉴定的意义；二则可以反映药物的纯度。炔诺酮：熔点2022083.比旋度甾体激素多具有手型碳原子，具有旋光性。4.吸收系数,第二节鉴别试验,（一）强酸的呈色反应,强酸：H2SO4、H3PO4、HClO4、HCl,原理：酮基先质子化，形成正碳离子，再与HSO4-作用呈色。,与硫酸显色反应,1.C17-醇酮基还原性,2.C3酮基和C20酮基,成腙反应中,C20酮基受C18甲基的空间位阻影响，反应较慢，需加热或较长时间放置，才完成反应。,C3酮基空间位阻最小，最易起反应，室温下生成单腙。,3.甲酮基或活泼亚甲基,适用：具有甲酮基或活泼亚甲基的甾体激素类药物。,能与亚硝基铁氰化钠、间二硝基酚、芳香醛反应呈色。,黄体酮专属性反应。,黄体酮,其他甾体,亚硝基铁氰化钠,蓝紫色,淡橙色或不显色,又称为碱性硝普钠反应。,碱性,甲酮基：,有机氟,F,有机破坏,有机氯,4、卤元素的呈色反应,茜素氟蓝硝酸亚铈,硝酸硝酸银,呈蓝紫色,Cl,AgCl,氯原子结合在母核环上,适用：雌激素类药物。,5.酚羟基的呈色反应,能与重氮苯磺酸发生偶合反应，生成红色偶氮染料。,JP利用此反应鉴别苯甲酸雌二醇,6.乙炔基,含炔基的甾体激素，炔诺酮，炔雌醇等,原理：一些甾体激素类药物具有醋酸酯、戊酸酯及已酸酯的结构，可先行水解，根据水解产物来鉴别。,7、酯的水解产物的反应,适用：本类药物C3、C17或C21位上羟基的酯,结果：醋酸酯水解后生成的醋酸可与乙醇反应，生成有香气醋酸乙酯。,戊酸或己酸酯类水解后可生成有特臭的戊酸或己酸，进行鉴别。,-3-酮,240nm左右,280nm左右,苯环,其他共轭结构,200-760nm有特征吸收。,可规定最大吸收波长、A、吸收系数、A大/A小。,原理,方法,示例,结构特征：酚羟基C17OHC17乙炔基,例:炔雌醇,1505cm-1,3505cm-1,3300cm-1,1590cm-1,3610cm-1,酚羟基,醇羟基,1615cm-1,苯环的骨架振动,eg2：黄体酮,结构特征：-3-酮C17-酮基,1700cm-1,C=O,20位酮基,1665cm-1,3位酮基,1615cm-1,870cm-1,C-H,双键,第三节特殊杂质检查,杂质来源：原料、中间体、异构体、降解产物以及试剂和溶剂。其他甾体：有些杂质与该甾体激素药物结构类似，也具有一定的药理作用而又互不相同，因此在甾体激素类药物的质量控制中，“其他甾体”的限度检查显得很重要。,检查方法：,判定方法：规定杂质斑点数目规定杂质斑点颜色,1、TLC法（自身对照法）,eg：氢化可的松中其他甾体的检查供试液：本品+氯仿-甲醇（9：1）浓度：3.0mg/ml对照液：供试液（3.0mg/ml）+氯仿-甲醇（9：1）60g/ml层析：供试液对照液点样、展开、斑点检出。判断：供试液如显杂质斑点，不得多于3个，其颜色与对照液的主斑点比较，不得更深。,氢化可的松中其他甾体检查,图A中峰1面积的四分之三,判定方法：规定杂质峰数目规定杂质峰面积,2、HPLC法（自身对照法）,杂质来源：地塞米松、氟轻松和曲安奈得等甾体激素类药物，在生产中使用二氧化硒(SeO2)脱氢工艺，药物可能引入杂质硒。,方法：,结果判断：供试品溶液的吸光度不得大于硒对照溶液的吸光度（0.0050.01）。,eg：地塞米松磷酸钠,方法：GC色谱法,杂质来源：地塞米松磷酸钠生产中，使用大量甲醇和丙酮。,结果判断：不得出现甲醇峰，甲醇含量0.3丙酮规定不得过5.0%,方法：对照品（KH2PO4），磷钼酸比色法,杂质来源：地塞米松磷酸钠生产过程中，由磷酸酯化时残存的过量磷酸盐。,结果判断：供试品溶液的吸光度不得大于对照溶液的吸光度。,740nm,原理：供试液+钼酸铵+1-氨基-2-萘酚-4-磺酸钼蓝,第四节含量测定,（一）四氮唑盐比色法,（1）原理：肾上腺皮质激素类C17-醇酮基强还原性。,三苯甲瓒深红,（2）方法：对照品法,（3）影响因素,A.基团对反应速度的影响,C11=OC17OH,C21OH未酯化C21-OH酯化,B、溶剂和水分的影响,以无水无醛的乙醇为溶剂，水含量大时，呈色减慢，不超过5对结果没有影响。,C、O2与光线的影响,避光、隔绝空气、快速、充N2除去O2,D、碱的种类及加入顺序,以氢氧化四甲基铵的结果最佳,加入顺序：皮质激素溶液,四氮唑盐,碱试液,皮质激素与碱接触会部分分解,E.温度与时间,室温（25）反应4045min,F.干扰物的影响,选择性的测定C17位未被氧化和降解的药物氧化物和水解产物不发生反应,1.原理,异烟腙（黄）,HCl,420nm,（二）异烟肼比色法,C3-酮基+异烟肼,H2O,肾上腺皮质激素雄性激素蛋白同化激素孕激素,2.方法：对照品法,3.影响因素,A.反应速度（反应专属性）,C3=OC17=O、C20=OC11=O不反应,B.溶剂的选择,异烟肼盐酸盐受溶解度的影响,无水甲醇无水乙醇,甲醇对试剂的稳定性好甲醇呈色强度较无水乙醇中高乙醇对植物油的溶解度小,C.水分、温度、O2与光线的影响,含水量腙水解A%,O2与光线对反应的影响不大,t,D.酸的种类和浓度及异烟肼的浓度,酸:异烟肼=2:1吸光度最大,4-3-酮基的甾体激素在室温不到1h即可定量地与酸性异烟肼反应；其他长时间放置或加热后方可反应完全，因此在反应条件下，本法对4-3-酮基甾体具有一定的专属性。,E:反应的专属性,原理,max=515,又称为铁-酚试剂法,（三）Kober反应比色法：,雌二醇-3-甲醚,max=465,max=515,要求：专属性强、灵敏度高；甾体激素给药量少；血药浓度在ng/mL；-灵敏性生物体内有内源性甾体激素，甾体激素药物在体内有多种代谢产物；-专属性,本章小结,1.结构：三种母核（雄甾烷，雌甾烷，孕甾烷）各类激素的结构特点2.性质和鉴别与强酸呈色；官能团反应（C17-醇酮基；C3-，C20-酮基；C17-甲酮