副溶血性弧菌检验.ppt

GB4789.7-2013副溶血性弧菌检验,一、概述二、生物学特性三、检测方法,副溶血性弧菌Vibrioparahaemolyticus于1950年从日本一次暴发性食物中毒中发现。该菌存在于近海海水、海底沉积物和鱼类、贝壳等海产品中。在37、pH7.7、34%NaCl环境中生长最好。,一、概述,概述,本菌嗜盐畏酸怕冷，在无盐环境不能生长，3%6%盐水繁殖迅速，低于0.5%或高于10%盐水中停止生长。对酸敏感，在2%醋酸或50%食醋中1min即死亡。不耐热，565min可杀死，901min灭活。对高盐浓度抵抗力甚强。5以下容易死亡。,分类：属弧菌科(Vibrio)，弧菌属。分布：主要存在于近海岸的海水、海底沉积物和鱼类、虾类、贝类、牡蛎等海产品中。人多因食用被本菌污染而又未煮熟的海产品和其他食品而引起中毒。,流行病学,季节分布：8-9月为高峰期中毒食品：主要为海产品、其次为水产制品、淹制品、咸菜及污染食品地区分布：沿海地区居多临床症状：主要有腹痛、腹泻、恶心、呕吐、发热潜伏期：10小时左右,致病作用,主要引起胃肠炎，最常见的是食物中毒和感染性腹泻。由于病菌在食品中大量繁殖，侵入肠道后继续繁殖并释放出大量肠毒素，引起剧烈的胃肠炎。,二、生物学特性-菌体形态及染色特征,革兰氏阴性杆菌，无芽孢0.30.726m两端浓染呈多形态（棒状、弧状、球状、卵圆形等）排列不规则液体培养基生长单鞭毛，固体培养基常有周生鞭毛（侧毛）,二、生物学特性-培养特性,需氧兼性厌氧在含NaCl3-4%的培养基中生长良好无盐和NaCl10%的培养基中均不生长最适培养温度为：30-37最适pH范围：pH7.4-pH8.2,在固体培养基上，菌落通常隆起，圆形半透明，表面光滑、湿润、一般不产生色素。在血平板和嗜盐性平板上，菌落生长良好。肉汤、琼脂、生化管都应含有3-4%的NaCl含量。,神奈川现象(Kanagawaphenomenon，KP)-在特定条件下，某些菌株在含高盐(7)的人O型血球或兔血球及以D甘露醇作为碳源的我妻琼脂平板上产生溶血的现象神奈川现象与本菌的致病性密切相关,血清分型,O抗原（耐热的菌体抗原）O1-O13共13种K抗原型（荚膜抗原）K1-K71共65种H抗原（鞭毛抗原），无特异性,三、检测程序,食品安全国家标准副溶血性弧菌检验GB4789.7-2013,GB4789.7-2013,1、样品制备,食品样品鱼类：表面组织、肠、鳃贝类：全部内容物（贝肉和体液）甲壳类：动物的中心部分，包括肠、鳃水产制品如为带壳贝类或甲壳类，应先在自来水中洗刷外壳并甩干表面水分，然后以无菌操作打开外壳，按上述要求取相应部分。,2、增菌-3%氯化钠碱性蛋白胨水,定性-取样品25g（mL），加入3%氯化钠碱性蛋白胨水225mL。定量-选择3个适宜的连续稀释度，每个稀释度接种3支含有9mL3氯化钠碱性蛋白胨水的试管，每管接种1mL。置361恒温箱内，培养8h18h。,3、分离TCBS平板、弧菌显色平板,对所有显示生长的增菌液，用接种环在距离液面以下1cm内沾取一环增菌液，于TCBS平板或弧菌显色培养基平板上划线分离。一支试管划线一块平板。于361培养18h24h。,TCBS平板上典型特征,典型的副溶血性弧菌在TCBS上，呈圆形、半透明、表面光滑的绿色菌落。,TCBS平板上典型特征,科玛嘉弧菌显色平板-紫色菌落,4、纯培养挑取3个或以上的可疑菌落，划线3氯化钠胰蛋白胨大豆琼脂平板，361培养18h24h。5、初步鉴定氧化酶试验涂片镜检3%氯化钠三糖铁嗜盐性试验,底层变黄不变黑，无气泡，斜面颜色不变，有动力,6、确定鉴定,甘露醇发酵试验-含3%氯化钠的培养基赖氨酸脱羧酶试验V-P试验ONPG试验采用3%氯化钠三糖铁琼脂隔夜培养物进行副溶血性弧菌：甘露醇+赖氨酸脱羧酶+V-P-ONPG-,ONPG试验,挑取1满环新鲜培养物接种于0.25mL3%氯化钠溶液，在通风橱中，滴加1滴甲苯，摇匀后置37水浴5min。加0.25mLONPG溶液，36培养观察24h。阳性结果呈黄色。阴性结果则24h不变色。,ONPG-邻硝基酚-D-半乳糖苷,可选择生化鉴定试剂盒或全自动微生物生化鉴定系统。API20E,7、选做试验,血清学分型-11种O抗原血清神奈川试验-我妻氏血琼脂平板,8、结果与报告,根据检出的可疑菌落生化性状，