第六章-芳胺类药物分析(一)

药品检验技术,第五章化学原料药物检验技术,第二节胺类药物的检验技术,基本要求,1、掌握胺类药物的鉴别和含量测定的基本原理与方法2、熟悉典型药物中主要特殊杂质的来源及检查方法3、了解典型药物的结构特征和主要理化性质,芳胺类药物分为两类,芳伯氨基未被取代,芳伯氨基被酰化,一、芳胺类药物的检验技术,（一）基础知识,对位有取代,（1）性状描述,1.对氨基苯甲酸酯类,1)白色结晶或结晶性粉末；无臭，味微苦，随后有麻痹感;2)在水中易溶，在乙醇中略溶，在三氯甲烷中微溶，在乙醚中几乎不溶;3)熔点：154157,盐酸普鲁卡因,1)白色结晶或结晶性粉末；无臭，味微苦，有麻舌感;2)在水中易溶，在乙醇中溶解，在乙醚中不溶;3)熔点：147150,盐酸丁卡因,1)白色结晶性粉末；无臭，味微苦，随后有麻痹感；遇光色渐变黄;2)在乙醇、三氯甲烷或乙醚中易溶，在脂肪油中略溶，在水中极微溶解;3)熔点:8891,苯佐卡因,（2）结构特点与化学性质,1.对氨基苯甲酸酯类,盐酸普鲁卡因,芳香第一胺酯键叔胺氮原子共轭结构,盐酸丁卡因,酯键叔胺氮原子共轭结构,苯佐卡因,芳香第一胺酯键共轭结构,2.酰胺类,（1）性状描述,2.酰胺类,（2）结构特点与化学性质,对乙酰氨基酚,盐酸利多卡因,盐酸布比卡因,醋氨苯砜,（二）鉴别,1.重氮化-偶合反应（1）盐酸普鲁卡因、苯佐卡因鉴别分子中都有芳香第一胺结构，在盐酸溶液中，可直接与亚硝酸钠发生重氮化反应，生成重氮盐，再与碱性-萘酚偶合生成有色的偶氮染料。,分子结构中含有芳伯氨基或潜在芳伯氨基的药物，均可发生此反应。,Ar-NH2,HCl,NaNO2,重氮盐,OH-,-萘酚,橙黄猩红色,生成偶氮染料,如盐酸普鲁卡因的鉴别：供试品50mg，加稀盐酸1ml，煮沸，放冷，加0.1mol/L亚硝酸钠溶液数滴，再滴加碱性-萘酚数滴，生成猩红色沉淀。,盐酸普鲁卡因ChP（2015）鉴别（1）本品显芳香第一胺类的鉴别反应取供试品约50mg，加稀盐酸1m1，必要时缓缓煮沸使溶解，放冷，加0.1mo1/L亚硝酸钠溶液数滴，滴加碱性-萘酚试液数滴，视供试品不同，生成由橙黄到猩红色沉淀。,重氮化-偶合反应,（2）对乙酰氨基酚鉴别对乙酰氨基酚具有潜在芳香第一胺结构，在酸性溶液中加热水解生成芳香第一胺结构，也可发生重氮化-偶合反应。,（3）盐酸丁卡因鉴别其结构为芳香仲胺，不能发生重氮化-偶合反应，但可在酸性溶液中与亚硝酸钠反应，生成N-亚硝基化合物的乳白色沉淀，可与芳香第一胺结构的同类药物区别。,盐酸丁卡因虽无芳伯氨基，但分子中的芳香仲胺在酸性溶液中可与NaNO2反应生成N亚硝基化合物的乳白色沉淀。,（二）鉴别,2.水解反应本类药物具有芳酸酯，可在碱性条件下水解，利用其水解产物进行鉴别。,水解反应举例,（白色沉淀）,具体的化学反应：,COOCH2CH2N(C2H5)2,苯佐卡因+NaOH,乙醇,乙醇+I2+NaOH,CHI3（碘仿臭气，黄色沉淀）,水解产物反应,水解反应举例盐酸普鲁卡因遇氢氧化钠试液即生成白色沉淀，加热变成油状物（普鲁卡因）；继续加热则水解，产生二乙氨基乙醇碱性气体，能使湿润的红色石蕊试纸变成蓝色，同时生成可溶于水的对氨基苯甲酸钠，溶液放冷，加盐酸酸化，即生成对氨基苯甲酸的白色沉淀。,3.三氯化铁反应对乙酰氨基酚分子结构中具有酚羟基，可与三氯化铁发生显色反应，而使溶液呈蓝紫色。,4.重金属离子反应盐酸利多卡因分子中具有芳酰胺结构，在碳酸钠试液中，可与硫酸铜反应生成蓝紫色配位化合物，此有色物转溶于三氯甲烷中显黄色。,4.重金属离子反应盐酸普鲁卡因、盐酸丁卡因和苯佐卡因等，在同样条件下不发生此反应。,5.氯化物反应盐酸普鲁卡因、盐酸利多卡因、盐酸丁卡因的水溶液显氯化物的鉴别反应。,6.分光光度法（1）紫外-可见分光光度法（2）红外分光光度法,7.高效液相色谱法中国药典2015年版盐酸普鲁卡因的制剂盐酸普鲁卡因注射液采用高效液相色谱法鉴别。,（三）杂质检查,1.盐酸普鲁卡因的杂质检查,（1）溶液的澄清度（2）酸度（3）对氨基苯甲酸,利用药物与杂质在溶解行为上的差异，检查水中不溶物。,盐酸普鲁卡因注射液中对氨基苯甲酸的检查,杂质来源：水解产生、脱羧、氧化,采用TLC法中的杂质对照品法进行检查。,（三）杂质检查,2.对乙酰氨基酚的杂质检查,（1）乙醇溶液的澄清度与颜色（2）对氨基酚及有关物质（3）对氯苯乙酰胺,（1）乙醇溶液的澄清度与颜色,生产工艺中：Fe粉作还原剂，带入成品中，致使乙醇溶液产生浑浊；中间体对氨基酚的有色氧化产物，在乙醇中显橙红色或棕色。,（2）对氨基酚及有关物质,不同的生产工艺所带入的杂质也有所不同；中间体、副产物及分解产物；,中国药典现行版采用高效液相色谱法检查对氨基酚及有关物质。其限量为对氨基酚不得超过0.005%；杂质总量不得超过0.5%。,中国药典中对乙酰氨基酚的口服制剂及注射液如何控制对氨基酚的限量？,（3）对氯苯乙酰胺,中国药典现行版采用高效液相色谱法检查对氯苯乙酰胺。以对氯苯乙酰胺标准品作为对照品，按外标法以峰面积计算，含对氯苯乙酰胺不得超过0.005%。,（四）含量测定,Ch.P中的苯佐卡因、盐酸普鲁卡因和盐酸普鲁卡因胺及其制剂可直接采用本法。,Ar-NH2;Ar-NHCOR均可采用此法。即：具游离芳伯氨基的药物可用本法直接测定。具潜在芳伯氨基的药物，也可用本法测定。,1.亚硝酸钠滴定法,（1）亚硝酸钠滴定法的原理,（2）测定主要条件：,加KBr增加反应速度,重氮化的反应历程为：,KHCl,重氮化的反应历程为：,控速步骤,KHBr比KHCl大300倍,生成NOBr量大得多加快反应速度,KBr+HCl,重氮化的反应历程为：,加过量HCl加速反应：重氮化速度加快；重氮盐在酸性介质中稳定；防止生成氨基偶氮化合物。Ar-N2+Cl-+H2N-ArAr-N=N-NH-Ar+HCl一般摩尔比为Ar-NH2:HCl=1:2.56。,室温（10-30）条件下滴定:温度高反应速度快；每升高10加快2.5倍,但太高,可使Ar-N2+Cl-+H2O,Ar-OH+N2+HCl,滴定速度及方式：先快后慢滴定管尖端插入液面下滴定,（3）指示终点的方法实验装置见书P171)电位法、永停滴定法、外指示剂法和内指示剂法,VV,验装置见书P171)永停滴定法溶液检流计终点前：无过量HNO2无电流终点时：有过量HNO2有电流（使指针偏离零永停在某一位置）,VV,2.非水溶液滴定法3.酸碱滴定法4.紫外-可见分光光度法,案例分析,小李同学按中国药典2015年版规定的方法测定盐酸普鲁卡因含量，取供试品两份，0.6g，精密称定后分别为0.6089g、0.5918g，按照永停滴定法，在15-25用亚硝酸钠滴定液（0.1013mol/L）滴定。分别消耗亚硝酸钠滴定液21.94ml和21.23ml。中国药典2015年版规定，本品按干燥品计算，含盐酸普鲁卡因不得少于99.0%。已知每1ml亚硝酸钠滴定液（0.1mol/L）相当于27.28mg的盐酸普鲁卡因，通过计算判断该供试品的含量是否符合规定。,此法主要用于盐酸普鲁卡因注射液的测定。因该注射液中常含有降解产物对氨基苯甲酸；可以苯甲酸为内标同时测定两者的含量，该法简单准确。色谱条件：色谱柱为BondapakC18300mm4mm流动相为甲醇1HAc(40:60);UV检测器250nm。,HPLC法,1.采用亚硝酸钠法测定含量的药物有（）A.苯巴比妥B.盐酸丁卡因C.苯佐卡因D.醋氨苯砜E.盐酸去氧肾上腺素,相关练习题,2.下列药物中不能用亚硝酸钠滴定法测定含量者（）A.乙酰水杨酸B.对氨基水杨酸钠C.对乙酰氨基酚D.普鲁卡因E.苯佐卡因,3.亚硝酸钠滴定法中，加KBr的作用是（）A.添加BrB.生成NO+Br，加快反应速度C生成HBrD.生成Br2E.抑制反应进行,95：75中国药典所收载的亚硝酸钠滴定法中指示终点的方法为（）A.电位法B.永停法C.外指示剂法D.内指示剂法E.自身指示剂法,相关练习题,5：127亚硝酸钠滴定法中，可用于指示终点的方法有（）A.自身指示剂法B.内指示剂法C.永停法D.外指示剂法E.电位法,相关练习题,例1.ChP（2000）亚硝酸钠滴定法测定对氨基水杨酸钠的含量时，指示滴定终点的方法为（）A.自身指示终点法B.电位法指示终点C.永停滴定法D.氧化还原指示剂法E.酸碱指示剂法,相关练习题,例2.以下那种药物中应检查对氨基苯甲酸（）A.盐酸普鲁卡因B.盐酸普鲁卡因胺C.注