第五次普通微生物学实验.ppt

二、实验原理,1.培养基的概念是根据微生物满足生长的营养需求，人工配制的混合营养基质。必需的养分适合的环境不同类的微生物因生理类型不同而表现出不同的营养需求所以不同类的微生物一般采用不同的培养基。牛肉膏蛋白胨培养基细菌专用马铃薯蔗糖培养基真菌专用高氏一号培养基放线菌专用,2.培养基的分类,（1）按存在的物理状态分液体培养基（不含凝固剂）半固体培养基（凝固剂琼脂含0.2-0.5%）固体培养基（凝固剂琼脂含1.5-2.0%）。（2）按照培养基的用途差异分基础培养基加富培养基选择培养基鉴别培养基,（3）按组成成分分天然培养基合成培养基半合成培养基琼脂的特性：成分是多缩半乳糖，绝大多数微生物不能分解利用。96溶解，45凝固对微生物生长没有毒害作用培养基的作用：微生物分离、培养、增殖、保藏及鉴定。,3.培养基配制原则,选择适宜的营养物质营养物质浓度及配比合适控制pH条件控制氧化还原电位原料来源的选择根据培养目的不同调配灭菌处理,4.配制培养基的步骤,原料的预处理计算用量称量溶解调pH过滤分装：试管：固体：1/5试管；液体：1/4-1/5。三角瓶：1/3-1/2包扎灭菌：一般培养基，1210C,15-30min；含糖培养基：1120C,15-30min；易产生沉淀的物质：分别灭菌后再混合摆斜面（固体，试管）无菌检查,四、作业,2人1组配制阿须贝培养基2000ml（全班），每组用250ml三角瓶装120ml；装蒸馏水3支，每支4.5ml,注意事项,1、称取药品时严防药品混杂，一把牛角匙称一种药品；2、蛋白胨极易吸湿，称取时动作要迅速；3、配制固体培养基时，先将其他药品加热溶解到快沸时，再将称好的琼脂加入，继续加热至琼脂完全熔化，此过程要不断搅拌，以免琼脂糊底，并控制火力，防止沸腾外溢；4、分装量根据试管大小和实际需要而定，固体培养基装量约为管高的1/5，液体培养基的装量约为管高的1/4，三角瓶的装量不超过瓶体的1/2；5、分装过程中注意不要将培养基沾在管（瓶）口上，以免沾污棉塞而引起污染。,实验12灭菌和消毒,一、实验目的学习微生物实验的一些准备方法（灭菌培养皿的准备、灭菌吸管的准备、无菌水的准备、培养基平板和斜面的准备等），为后续实验做准备。了解消毒与灭菌应用范围及基本原理，学习并掌握实验室常用消毒与灭菌的方法,二、实验原理灭菌是应用理化方法杀灭物体上所有微生物消毒是应用理化方法杀灭物体上部分微生物（主要是病原微生物）。,三、灭菌的常用方法物理法：高温灭菌、紫外线灭菌、过滤除菌化学法：化学药剂杀菌,高温灭菌干热灭菌(dryheatsterilization),1.火焰灭菌：酒精灯、接种环2.干燥热空气箱灭菌：干燥热空气箱160-170,2小时（利用热空气灭菌)适用范围：金属器皿、玻璃器皿,湿热灭菌(moistheatsterilization),利用饱和热蒸汽灭菌。高压蒸汽灭菌锅采用高压蒸汽灭菌法是湿热灭菌的一种。利用水的沸点随水蒸气压力的增加而上升以达到高温灭菌目的的方法a方法：一般121（1kg/cm2或15磅/英寸2）20-30min。b适用：耐高温物品如培养基，无菌水，培养皿。c注意事项：灭菌开始排净冷空气；灭菌终了，自然缓慢降压回零；灭菌结束，趁热取出物品。,高压蒸汽灭菌锅原理：利用饱和热蒸汽灭菌。利用水的沸点随水蒸气压力的增加而上升以达到高温灭菌的目的。方法：一般121（1kg/cm2或15磅/英寸2）20-30min。适用：耐高温物品如培养基，无菌水，培养皿。注意事项：灭菌开始，外筒加水，桶盖对称拧紧，排净冷空气；灭菌终了，自然缓慢降压回零；灭菌结束，趁热取出物品。,四、高压蒸汽灭菌操作步骤,(1)灭菌前的准备：将高压蒸汽灭菌锅的内桶取出，向外锅内加入适量的水，将内桶放入。(2)装放待灭菌物品：将已包扎好的物品放入内桶。盖上锅盖，以两两对称方式同时旋紧螺栓，勿使漏气。(3)加热排气：接通电源，同时打开排气阀，待见有大量水汽排出时，维持3-5min，锅内空气排尽，关上排气阀。(4)升温保压：压力为1.05kg/cm2,121.3,2030min(5)出锅；隔断热源，自然降温，待压力表指针回到零，打开排气阀，稍等一些时间，再开盖取物。,实验13微生物的纯系分离,1了解土壤微生物的分离纯化及测数的基本原理。2学习并掌握微生物分离纯化技术方法。3学习并掌握微生物平板菌落计数的技术方法。,二、基本原理,土壤是微生物生活的大本营，其中含有大量不同类型的微生物，可按照一定的方法将各类微生物通过分离进行纯培养，并能对特定类群进行数量测定。基本原理是通过稀释使菌体细胞充分分散，单细胞得以生长发育形成菌落，可使用稀释法或平板划线法进一步纯化，还可通过平板菌落计数，推算单位重量土壤样品含有微生物的数量。,图14-1从土壤中分离微生物操作过程,三、实验步骤,土壤样品采集在待测田块上，若田块面积小于50平方米则按对角线三点采样；若田块面积大于50平方米按对角线五点采样。采样一般定点于耕作层0-20cm，先除去表土1-2cm，以无菌铲采土足量充分混匀后用无菌塑料袋分装。,固氮菌的分离纯化及测数,1.制备土样稀释液2.培养基的准备3.倾注法接种4.保温培养5.分区划线法纯化6.计数,1制备土样稀释液,吹吸三次混匀，无菌操作,2培养基的准备融化阿须贝培养基，融化后保温在48。并取3个无菌培养皿，分别在皿底贴好标签，注明10-2、10-3、10-4。3倾注法接种先按10-4、10-3、10-2的顺序将不同稀释度菌悬液接入对应平皿中（每个平皿接入1ml），再向每个平皿倾注约15ml的阿须贝培养基（50）待冷