非小细胞肺癌EGFR基因突变检测ppt课件

.,非小细胞肺癌EGFR基因突变检测,.,主要内容,EGFR检测的背景及意义EGFR检测的标本类型EGFR检测的临床开展及成功关键,.,肺癌精准医学是精确诊断与靶向治疗的结合,精确诊断靶向治疗,LiTH,etal.JClinOncol2013;31:1039-1049.VariS,etal.ExpertOpinDrugDiscov2013;8(11):1381-1397.,.,多部权威指南强调治疗前的EGFR突变检测,ASCO2015指南：考虑用EGFRTKI进行一线治疗的非小细胞肺癌患者应该进行肿瘤EGFR突变检测来确定适合一线使用EGFRTKI还是一线使用化疗药物治疗。,.,EGFR基因突变和EGFR靶向治疗,中国肺腺癌驱动基因突变图谱,NSCLC中药物疗效相关的EGFR突变,八项随机研究奠定了TKI在EGFR基因突变阳性患者中一线治疗的地位,NCCNGuidelinesVersion3.2016Non-SmallCellLungCancerMoketal.,2008;Kimetal.,2008;Hirschetal.,2006,EGFR检测样本来源,组织活检（肿瘤蜡片）,目前检测金标准,细胞学标本（恶性胸水）,样本品质和肿瘤细胞含量可能比组织样本较低,血液标本（ctDNA）,-,当无法获取组织或细胞学样本的晚期转移患者，作为有效补充,DNA片段化/假阴性较多，需要高敏感度技术,+,+,+,-,-,+,-,-,侵入性,每个病人都适用,动态检测,对于组织和胸水都取不到的患者，血液样本是一个很好的补充,PirkerRetal.JThoracOncol2010;5:17061713;SavicSetal.BrJCancer2008;98:154160;RekhtmanNetal.JThoracOncol2011;6:451458;TanakaTetal.CancerSci2007;98:246252;,-,+,+,质量控制,组织/细胞学检测是目前的金标准,FromAZ2015internaldata,组织检测基本流程,组织及细胞学标本的处理-需要临床科室的协助与配合,组织学标本固定要及时，离体后即时处理（15-30分钟内)固定液：10%中性缓冲福尔马林（终浓度4%）；固定液的量一般为组织体积的10-15倍.固定时间：活检标本直接放入固定液，支气管镜活检标本的固定时间为624h，手术切除标本的固定时间为12h-48h.细胞学标本采用95%乙醇固定液，时间不宜少于15min，或采用非妇科液基细胞学固定液，固定时间和方法可按说明书进行操作所有细胞学标本应尽量制作福尔马林固定石蜡包埋（formalin-fixedandparrffin-enbedded,FFPE）细胞学蜡块。将细胞学标本离心沉淀置于包埋盒中，后续操作同组织学标本制作蜡块流程,中国原发性肺癌诊疗规范2016版,病理评估和质控对于基因检测至关重要-,蜡块未染色切片H3:12241235;2.SmouseJetal.CancerCytopathol2009;117:6772;3.VanEjikRetal.PLoSOne2011;6:e177791;4.RekhtmanNetal.JThoracOncol2011;6:451458,.,吉非替尼获得血液ctDNA伴随诊断适应症,欧盟和中国相继批准阿斯利康易瑞沙血液ctDNA伴随诊断非小细胞肺癌患者用药前检测EGFR突变,.,循环血肿瘤细胞(circulatingtumourcell，CTC)即释放到外周血中的肿瘤细胞，目前CTC的捕获比较困难循环肿瘤DNA(circulatingtumorDNA，ctDNA)即循环肿瘤DNA，指由肿瘤细胞释放到血液循环系统中的DNA,血液标本的检测对象,.,总量少500DNA拷贝数/200uL血浆,ctDNA丰度低,血浆ctDNA的特点,片段小集中在170bp左右，检测方法需要能够耐受,In-housedata,Newmanetal.,NatMed(2014),Taniguchietal.,ClinCancerRes(2011),信息丢失-能代表全基因组信息？,TranslationalOncology.2013NatureVolume.2013,.,IPASS日本亚组血液/组织对比EGFR突变状态研究,灵敏性:43%特异性:100%一致性:66%,86对血清和组织样本参与比较,GotoK.etal.JThoracOncol2012;7(1):115-121,.,亚太和俄罗斯晚期NSCLC组织/细胞学和配对的血浆样本(IGNITE),ChunleiShi,etal.2015ESMOAsia,abstract422PD,.,IFUM吉非替尼治疗EGFR突变的高加索NSCLC,652对血液和组织样本参与比较,JThoracOncol.2014Sep;9(9):1345-53.,一致性:94.3%;敏感性:65.7%;特异性:99.8%,MedianPFS,ctDNA作为EGFR检测的有效补充,.,IFUM研究：血液检测阳性可以指导TKI用药,IFUM(易瑞沙后续评估)研究中，血液与配对组织不同EGFR突变状态患者ORR的一致，19外显子缺失患者PFS也一致(10.3月vs9.6月),ctDNA检测EGFR突变阳性可用于指导EGFR-TKI治疗,Douillard,J.-Y.,etal.(2014).JournalofThoracicOncology9(9):1345.,RocheARMS:敏感性:75%,特异性:96%,ADxARMS:敏感性67.5%特异性100%,Liuetal2013.JclinpATHMoketal.2015,CCR,QiagenARMS敏感性65.7%，特异性:99%,1,2,3,ARMS法特异性较好，灵敏度有限，但ADxARMS是目前唯一获得CFDA批准的血液检测方法,一代ARMS：EGFR敏感突变，组织vs血液,.,血液检测的获益人群,Bettegowdaet.al.,SciTranslMed(2014),.,非小细胞肺癌血液EGFR基因突变检测中国专家共识(2015年12月),中国国家食品药品监督管理总局（CFDA）在2015年2月已批准吉非替尼说明书更新，在推荐所有NSCLC患者的肿瘤组织都应进行EGFR基因突变检测基础上，如果肿瘤标本不可评估，则可使用从血液（血浆）标本中获得的ctDNA进行评估。,EGFR基因突变检测流程,.,血液检测实验流程,（肿瘤标本不可评估）,（2h内）,采用EDTA抗凝管，采集10mL全血2小时内将全血充分低温离心两次，分离出不含细胞成分的血浆，放置于-70冻存,.,慎重对待ARMS法的血液检测结果,EMQNExternalQualityAssessmentSchemeforLungCancer(2014).,.,非小细胞肺癌EGFR检测各标本处理方式,.,总结重要讯息回顾,EGFR突变,样本,检测方法,在中国NSCLC患者中，约50%存在EGFR突变准确的驱动基因检测是实现精准治疗的基础与