水果和蔬菜中种农药多残留测定方法PPT课件

.,1,水果和蔬菜中101种农药多残留测定方法气相色谱-质谱法,.,2,前言,由于色谱仪仅靠物质的保留时间进行定性分析，并不能得到分子结构的信息；当样品复杂时，许多组份之间的保留时间只差数秒，甚至重合，就很难判定目标化合物了。即使分析者用两根色谱柱进一步确认分析对象，“其分析结果对于确认目标化合物的确认能力也是有限”。,.,3,GC/MS联用技术可以在色谱峰不完全分离的情况下，用质量色谱法和选择离子检测，对其中的化合物分别定量；GC/MS联用技术定量分析的特点是先定性，后定量，因而避免假阳性检出。目前，国际上要求检测的多种农药，其中很大部分可用气质联机检测。,.,4,我中心在查阅国外大量相关文献的基础上，引进国外GC-MS农药多残留快速检测技术，根据我国国情做了相应改进，建立了一套适合我国国情的蔬菜和水果中GC-MS农药多残留快速检测技术。该技术建立了一种使用GC-MS，通过一次提取、两次进样完成蔬菜和水果中101种农药的定性和定量的快速检测方法。,.,5,1适用范围,本方法适用于常见蔬菜和水果中（苹果，西红柿，白菜，油菜，胡萝卜，卷心菜，茄子，菠菜，尖椒和韭菜）101种农药残留量的测定。本方法的最低检出限为0.0010mg/kg-0.3488mg/kg（参见附录A）。,.,6,2原理,试样用丙酮和二氯甲烷（4：3）的混合溶液匀浆提取，无水硫酸钠干燥后，经凝胶色谱和固相萃取柱净化，用丙酮+乙酸乙酯（1：1）洗脱农药，采用气相色谱-质谱联用仪检测。,.,7,3试剂与材料,3.1环己烷，色谱纯；3.2丙酮；3.3二氯甲烷；3.4石油醚；3.5乙酸乙酯，色谱纯；3.6无水NaSO4：450烘4h；3.7NaCl：140烘4h；3.8内标化合物：Chrysene；3.9固相萃取柱：Enxi-Carb活性炭柱，6mL,0.5g或相当柱；3.11农药标准品共101种，纯度96%。,除非另有说明，在分析中仅使用确认的分析纯试剂和GB/T6682中规定的至少三级的水。,.,8,3.12农药标准溶液配制,单一农药标准溶液：准确称取一定量农药标准品，用溶剂(丙酮、正己烷和甲醇）稀释，逐一配制成1000mg/L或2500mg/L的单一农药标准储备液，贮存在-18以下冰箱中。农药混合标准溶液：逐一吸取一定体积的单个农药储备液分别注入同一容量瓶中，用溶剂(正己烷）稀释至刻度配置成同一浓度（10mg/L)的农药混合标准储备液。使用前用溶剂(环己烷)稀释成所需浓度的标准工作液（1mg/L)。,.,9,4仪器,4.1气相色谱质谱联用仪：配有电子轰击源（EI）；HP6890N/5973GC-MS，配有四极杆质量分析器和自动进样器，载气流量或压力控制，工作站及数据处理软件。4.2凝胶色谱仪：色谱柱，17250mm；填料，SX-3，15g；流动相，环己烷/乙酸乙酯（1:1，V/V）；定量环，2mL。4.3天平：Sartorius分析天平（精确度0.0001g）；4.3匀浆机：IKA-WERKE；4.4旋转蒸发仪。,.,10,5试样的制备与保存,5.1试样的制备取不少于1000g蔬菜水果样品，取可食部分，用干净纱布轻轻擦去样品表面的附着物，采用对角线分割法取对角部分，将其切碎，充分混匀后放入食品加工器粉碎，制成待测试样，密封，标明标记。5.2试样的保存将试样冷冻保存。,.,11,6测定步骤,6.1提取6.2净化6.3浓缩6.4测定6.5平行试验6.6空白试验,.,12,7结果计算,（1）由工作站按内标法自动计算；（2）试样中被测农药残留量以质量分数计，数值以毫克每千克（mg/kg）表示，按以下公式计算：,V1AV3=SV2ASm,S标准溶液中农药的含量，mg/L；A试样中被测农药的峰面积；AS农药标准溶液中被测农药的峰面积；V1提取溶剂总体积；V2吸取出用于检测的提取溶液的体积；V3试样定容体积；m试样的质量。,.,13,8精密度,在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不应超过算术平均值的15%。,.,14,9准确度,在添加浓度在0.05mg/kg-0.5mg/kg范围内，大多数化合物的平均回收率70%，相对标准偏差20%，完全满足多残留快速检测的要求。,.,15,大白菜中10种农药的添加回收率,A组,B组,.,16,技术路线,称样,6g氯化钠+140mL丙酮:二氯甲烷,匀浆提取,取70mL上清夜,无水硫酸钠干燥,浓缩,活性炭净化,GC-MS,浓缩,GPC净化,浓缩,.,17,谢谢！,.,18,6.1提取,称取20克试样+氯化钠6克+4：3的丙酮和二氯甲烷140毫升,匀浆提取一分钟,静置后，将上清液倾倒在装有20克无水硫酸纳的锥型瓶中，干燥30分钟（每隔5分钟摇晃一次）,准确量取提取液70，过装有无水硫酸钠的玻璃漏斗,用二氯甲烷淋洗无水硫酸钠近无色，合并淋洗液于圆底烧瓶,将提取液浓缩近干（水浴温度38）,.,19,6.2净化,由于各种蔬菜的性质不同，干扰因素有很大的差别，因此不同的蔬菜要采取不同的净化方法。（1）对于色素含量较低的蔬菜（苹果、西红柿、大白菜等），经活性炭固相萃取柱净化。（2）对于色素含量较高的蔬菜（菠菜、韭菜等），先过凝胶色谱，再用活性炭固相萃取柱净化;,.,20,6.2.1凝胶过滤,将提取液浓缩后用环己烷定容到2.0mL,上样,用1：1的环己烷和乙酸乙酯淋洗,进样6min后开始接收流出液，20min后（接收60mL）停止接收,将流出液浓缩近干，准备过活性炭小柱,流速3.0mL/min,.,21,6.2.2固相萃取,固定相活化Conditioning先用5mL的乙酸乙酯，5mL丙酮和乙酸乙酯混合液（：）分别预淋洗小柱，淋洗液弃去；上样Loadsample用3mL石油醚溶解提取液上样,流出液接收到KD瓶中；洗脱Analyteelution用1：1的丙酮和乙酸乙酯淋洗液35mL洗脱样品，洗脱液接收到KD瓶中。,.,22,6.3浓缩,用旋转蒸发仪将洗脱液浓缩至0.5mL，添加内标（进样浓度1g/）并用环己烷定容到0.5mL（在瓶中），混匀，用于GC-MS测定。,.,23,6.4测定,6.4.1仪器条件6.4.2定性测定6.4.3定量测定,.,24,6.5平行试验,除不称取试样外，均按以上步骤进行。,6.6空白试验,按以上步骤对同一试样进行平行试验测定。,.,25,6.4.1仪器条件,a)色谱柱:HP-5MS柱，30m0.25mm0.25m；b)色谱柱温度程序:60（保持2min）15/min1506/min280（15.33min）；c)载气：氦气，纯度99.999%，流速为1mL/min。,.,26,d)进样口温度：260；e)进样方式：不分流进样，由自动进样器进样；f)进样量：1L；,6.4.1仪器条件,.,27,g)离子源温度:230；h)分析器温度:150；i)GC-MS接口温度:280；j)电子轰击源:70eV;,6.4.1仪器条件,.,28,k)扫描方式：选择离子（SIM）。,6.4.1仪器条件,每种化合物分别选择1个定量离子，2个-3个定性离子。根据保留时间将101种农药分成两组，每组所需检测的离子按照出峰顺序，分时段分别检测。溶剂延迟5min。每组化合物的保留时间、定性离子、定量离子参见附录B；,.,29,6.4.2定性测定,保留时间保留时间误差小于0.02min；选择特征离子所选特征离子的相对丰度变化在规定范围内；质谱定性质谱图库检索匹配应在70%以上。,.,30,101种标样选择离子色谱图,.,31,苹果中101种农药选择离子色谱图,.,32,西红柿中101种农药选择离子色谱图,.,33,大白菜中101种农药选择离子色谱图,.,34,6.4.3定量测定,本方法采用内标法单离子定量测定，利用选择特征离子进行定量分析；内标物为Chrysene；注：标准溶液的浓度应与待测化合物的浓度相近。基质效应强的试样，用空白基质