乳酸脱氢酶测定试剂盒(乳酸底物法)标准化操作规程

乳酸脱氢酶测定试剂盒（乳酸底物法）标准化操作规程1 目的规范实验室操作，保证检验工作顺利有效进行特制定此规程。2 授权操作人 经培训且考核通过的实验室检验人员。3 适用范围 本试剂适用于体外定量检测人血清或血浆中乳酸脱氢酶的活力。4 检验方法本试剂盒采用底物法测定乳酸脱氢酶的活力。5 检验原理样品中的乳酸脱氢酶（LDH）催化L-乳酸氧化成丙酮酸，同时NAD+被还原为NADH，引起340nm处的光吸收值升高，通过监测340nm处光吸收值上升的速率，可以测定乳酸脱氢酶的活力。6 标本要求6.1 样本为血清或血浆。6.2 采血后应及时离心分离，不得使用溶血或被污染的样本。血浆样本采用肝素抗凝。6.3样本在28可稳定7天。请勿冰冻保存（0以下）样本，以免破坏肝同工酶。7 试剂及配套品7.1试剂来源 长春迪瑞医疗科技股份有限公司乳酸脱氢酶试剂盒（底物法）7.2试剂组成试剂盒主要组成成份浓度试剂1(R1)Tris缓冲液100.0mmol/L乳酸锂62.5mmol/L氯化钾190.0mmol/L试剂2(R2)Tris缓冲液100.0mmol/L氧化型辅酶30.0mmol/L含非反应性填充物及稳定剂/7.3试剂的稳定性与贮存：7.3.1 4份试剂1与1份试剂2混合后，可作为单试剂使用。混合后的试剂溶液避光储存于28可稳定5天。7.3.2试剂在28条件下，干燥、避光、密封贮存，有效期为18个月。7.3.3试剂开封后在28条件下可稳定30天。7.4试剂的变质指示：若试剂混浊，或以水为空白在340 nm处吸光度值大于0.500A时，则不能使用。8 实验仪器及性能指标8.1 实验仪器迪瑞CS系列全自动生化分析仪8.2试剂性能指标8.2.1空白吸光度：A0.50。8.2.2空白吸光度变化率：A/min0.002。8.2.3分析灵敏度：测试1U/L被测物时，吸光度变化率（A/min）0.00004。8.2.4 线性范围：25U/L800U/L；线性相关系数0.9900；25,100 U/L区间内，线性绝对偏差应不超过10U/L；（100,800 U/Lqjn ,相对偏差不超过10。8.2.5 准确度：相对偏差应在10%范围内。8.2.6 重复性：CV5.0%。8.2.7 批间差：R6.0%。9 校准程序9.1校准品来源长春迪瑞医疗科技股份有限公司生产的临床化学校准血清9.2校准品的组成：人血清9.3校准品使用9.3.1 小心打开瓶盖，避免内容物的任何损失；9.3.2在20-25的室温下，准确量取5ml蒸馏水复溶1瓶校准血清；9.3.3拧紧瓶盖，避光放置30分钟，使之完全溶解；9.3.4轻轻混匀，确保溶液均一性。勿摇晃小瓶，避免泡沫产生；9.3.5使用时，移取所需的体积后，把校准血清盖紧瓶盖放回冰箱中保存；9.3.6复溶后的校准血清可用于手工测试，也可用于全自动生化分析仪9.4校准品使用注意事项9.4.1 若该复溶血清受细菌污染，将会降低许多成分的稳定性。9.4.2 不同批号的校准血清不能交叉使用，因为批号于批号之间的赋值不同。9.4.3 请勿用嘴直接吸取试剂，避免接触皮肤、眼睛及粘膜，一旦接触，应立即用大量水冲洗。9.5 校准程序建议使用试剂盒配套的校准品，以纯化水和校准品进行2点校准测定。测定后仪器自动拟合成校准曲线。当试剂批号更换或质控失控时，需要重新校准。10 质量控制10.1质控品来源 长春迪瑞医疗科技股份有限公司生产的临床化学质控血清(水平I和水平II)10.2质控品组成：人血清10.3质控品存贮未复溶的校准血清在避光条件下，28可稳定至标签失效期。复溶后校准血清在避光条件下，28可稳定7天；1525可稳定1天；-20可稳定30天。10.4质控品使用注意事项10.4.1若该复溶血清受细菌污染，将会降低许多成分的稳定性。10.4.2请勿用嘴直接吸取试剂，避免接触皮肤、眼睛及粘膜，一旦接触，应立即用大量水冲洗。10.4.3 因批与批之间的质控血清赋值不同，所以不同批号的质控血清不能当做校准血清使用。10.5 质量控制：建议使用迪瑞公司的质控品，进行质量控制。实验室应自行建立质控区间和限值。若质控值失控，每个实验室应采取纠正措施。11操作程序11.1试剂配制试剂1和试剂2均为液体试剂，可直接使用。11.2 项目参数： 测定温度37R1用量240L主波长340nmR2用量60L副波长405nm样本用量5L比色杯光径1.0cm延迟时间30s吸光度范围0A2A反应时间60s测定模式速率法反应方向正反应样本用量:5L试剂R1用量:240L加试剂R2:60L记录吸光度变化A/min温度:37主波长:340nm30s60s300s11.3 样本测试步骤：11.4注意事项11.4.1 本品仅用于体外诊断。11.4.2 避免测试中途添加试剂。11.4.3 试剂和样本用量可根据不同仪器的要求按比例改变。11.4.4 NADH在334nm和365nm处的毫摩尔消光系数分别为6.18和3.40。11.4.5单位换算：U/L16.6710-3=kat/L。12结果判断12.1 如A/min0.10A，样本应稀释后再测试，结果乘以稀释倍数。12.2 血清或血浆中乳酸脱氢酶活力的检测只是临床医师对患者进行诊断的指标之一，临床医师还要根据患者的体症、病史以及其它的诊断项目、诊断手段进行综合判断。13 参考区间109245 U/L（37）引用的参考值范围代表本法的期望值，仅供参考，建议各实验室验证这一参考范围或建立自己的参考值范围。14 临床意义乳酸脱氢酶主要存在于心脏、肾脏、肝脏、肌肉和形体组织中。这些组织受损时会引起血清LDH水平升高，乳酸脱氢酶升高与心肌梗塞、肾脏损害、肝炎、贫血症、肌肉疾病或损伤有关。通过电泳，乳酸脱氢酶至少有5种形式，呈现的主要形式根据组织器官病变而改变，故具有诊断意义。15复检操作程序按仪器使用说明书进行复查操作。16 方法局限性16.1 检验结果的准确性依赖于仪器的校正和测定温度、时间的控制。16.2 当样本中黄疸1368mol/L、血红蛋白10g/L、甘油三脂37mmol/L、抗坏血酸2.8mmol/L时可能会影响检测结果。17 注意事项 17.1样本、废液等有潜在生物传染性，操作者应遵守实验室安全操作规定，并按当地医疗废弃物、感染性废弃物、产业废弃物等规定处理废液。17.2在自动生化分析仪上，线性取决于所用样本量与试剂量的比例和测量的时间。18 个人防护18.1请把标本当作可能感染HIV、HBV、HCV等的危险物质处置。为了避免或减少相关的传染风险，请使用一次性手套。18.2若本试剂误入眼内或口中、或接触到皮肤时，请迅速用水冲洗，必要时请接受医生治疗。19当检测系统不能工作时，所采取的补救措施当仪器发生故障时，迅速联系仪器厂家进行维修。20 参考文献20.1Young DS. Effects of Drugs on Clinical Laboratory Tests. Third Edition. 1990; 3:221-4.20.2 Bergmeyer:Methods of Enzymatic Analysis.Third Edition.Vol.:126132.20.3 Burtis CA, Ashwood ER, editors. Tietz Textbook of Clinical Chemistry, 2nd ed. Philadelphia, PA: WB Saunders; 1994:8138.20.4 US Department of Health and Human Services. Biosafety in Microbiological and Biomedical Laboratories.