微生物标本采集要求

临床微生物标本采集要求,“超级病菌”变种袭击英国医院,2006年12月18 据英国媒体 报道，俗称“超级病菌”MRSA的一个变种今年袭击了英国一家医院，已造成8人感染，其中2人死亡2004年受感染死亡的英国士兵坎贝，18岁，感染后48h死亡,CA-MRSA,阿什顿邦兹，07年10月4日感到身体一侧疼痛，就到当地一家医院就诊。 10月17日死亡。,美国弗吉尼亚州贝德福德一名17岁高中生就因感染MRSA而死亡，21所学校停课 。,Zeller JL, et al. JAMA patient page. MRSA infections JAMA. 2007 Oct 17;298(15):1826.,世界人口死因（1998年）感染性疾病：25(1330万/5390万）,抗生素时代，感染仍是人类健康的主要“杀手”,“君子慎始，差之毫厘，谬以千里” 礼记,微生物检验结果是临床医师在诊疗感染症过程中所需要的重要信息，临床医师可以根据这些检验结果及病人的临床情况来区分疾病的不同阶段，观察疾病的变化，判断预后或观察疗效。所以分析前阶段样本的质量保证是直接关系到检验结果能否真实客观地反应患者当前病情的一个重要环节。,正确的采取、处理与运送本是临床微生物检验成功与直接关系检验结果的基本关键。,如果标本采集不当，即使有经验的实验室工作者及最好的仪器设备也难以弥补在采集标本时引入的误差和错误。标本采取与处理的规范化是准确、及时地向临床提供重要的临床感染信息的基础；而标本采取与处理不符合要求，则微生物培养的结果毫无意义。故病人准备和标本采集是检验质量保证的重要环节之一。,正确的采取、处理与运送本是临床微生物检验成功与直接关系检验结果的基本关键。,由于病人受到各种内在和外界的影响，可使检验结果产生或大或小的误差，为此检验前病人须作适当准备，可减少随机分析误差。如标本采取或处理失当，造成污染，甚至使检验结果给临床以误导，延误对患者的正确治疗造成严重后果。标本保存和运送是检验质量保证的重要环节之一。由于采集的标本受各种因素的影响，可能使检验结果受或大或小的误差，因此必须正确掌握标本保存和运送。,“正确的微生物学检验始自正确的标本采取。临床医师、护师及检验技师都必须通晓其要领。”,著名的临床微生物检验专著Manual of Clinical Microbiology 的主编Patrick Murray,标本采集和运送是细菌培养成功的最最重要的关键,但由于标本的采集和运送常有护士或医生或病人自己完成，所以也是最不容易做好的事情，而且不知道问题所在之处，造成的后果是:临床医生最不能接受的问题:阳性率低,我们应该追求：“准确的病原学诊断”“针对性病原学治疗” 正确的微生物标本采集和运送，是准确的病原学诊断的前提！,微生物让人类步步为营，,微生物样本采样基本原则,1.及时采集微生物标本作病原学检查2.在抗菌药物使用前采集标本3.采样时严格执行无菌操作4.采样后立即送检，甚至床旁接种尤其是厌氧培养5.棉拭子标本宜用运送培养基6.混有正常菌群污染标本，不可置肉汤培养7.标本容器须灭菌处理，但不得使用消毒剂。8.送检标本应注明来源和检验目的,我们可能每天都面临以下问题的挑战,同时做需氧血培养和厌氧血培养时血液先注入需氧瓶或厌氧瓶？脓标本有时涂片见到细菌为什么培养阴性？非上班时间需要做厌氧培养怎么办？明显细菌性脑膜炎为什么培养阴性？痰标本分离出4种细菌做哪一种细菌的药敏试验？数量很多的凝固酶阴性葡萄球菌在痰里分离出来是否要做药敏?,临床标本的分类,带菌体液 无菌体液 痰 血液 咽拭子 脑脊液 尿液 关节腔积液 粪便 胸腹水 其他类别 其他类别,一、血培养操作规范,临床常见的采血指征,发热（38C）或低温（36C） 寒战 白细胞增多（计数大于10，000109/L，特别有“核左移” 未成熟的或杆状核的白细胞） 粒细胞减少（成熟的多核白细胞25 25 2 10-25 25 1 25 分类中1 3类不做培养，要求重新留取标本：4、5类为合格标本：6类为气管穿刺液，如未见到白细胞，而扁平上皮细胞10/低倍镜视野，亦应重新留取标本。,痰培养的送检次数,对于普通细菌性肺炎，痰标本送检每天1次，连续2 3天。不建议24h内多次采集，除非痰液外观性状出现改变；怀疑分枝杆菌感染者，应连续收集3天清晨痰液送检；怀疑军团菌或深部真菌感染，痰标本理想的送检次数尚无定论。,痰培养的运送和保存,所有病人的下呼吸道标本应在采集后立即送至微生物室，并于1小时内接种如不能及时送达，应将标本暂存于4，但放置时间不可超过24h。运输时勿置于冰块中厌氧培养标本的最佳运送时间取决于标本量。被口咽部菌群污染的标本如咳痰等不可用于厌氧菌培养。室温下放置1h会降低肺炎链球菌、流感嗜血杆菌的分离率而定植于上呼吸道的非致病菌则会过度生长,痰培养拒收标准,光学显微镜细胞学检查发现口咽分泌物污染明显。没有标签或贴错标签。运送容器选择不当或有渗漏。标本采集不符合要求。同一天同一试验重复送检2次。延时送至实验室的标本。,四、大便培养标本采集规范,大便培养标本采集规范,1.采集时间：腹泻患者应在用药前、急性期采集；沙门菌感染、肠热症应在2周内采；厌氧菌出现症状即采集。2.采集方法：自然排便者可用小木棒挑取有脓血和黏液的部位的粪便2-3克，如液状粪便取絮状物盛于无菌的、密封的、不吸水的、容器内或直接盛于增菌液或保存液中；对不易获得粪便患者及幼儿，可用直肠拭子采集后置保存液或输送培养基中送检。,大便培养标本采集规范,3. 注意事项：虽然粪便标本本身含很多细菌但也要用无菌容器。在患者病情许可的条件下应在用药前采集标本。应床边接种或置输送培养基送检。厌氧细菌（难辩梭菌）培养的标本应尽量减少与空气接触。,您知道吗？,住院超过3d或入院诊断不是胃肠炎的患者不做常规粪便培养。除婴儿和有活动性腹泻症状的患者外不推荐用拭子做常规病原检测。有腹部痉挛的患者在发病6h内采集到的血便或液状便的效果最好。对于弧菌的培养需要提出特别申请。,五、脑脊液标本采集,脑脊液培养标本的采集,采集时间：怀疑脑膜炎时应立即采集脑脊液，最是在应用抗生素之前采集脑脊液。采集方法：无菌腰穿采集脑脊液35ml，分装到3个无菌小瓶中（各1 2ml）。 第一管用于细菌培养! 用于细菌和病毒检测时脑脊液量不少于1ml；用于真菌和抗酸杆菌检测脑脊液量不少于2ml。,脑脊液培养标本的采集,标本采集后注入无菌管/小瓶中送检也可将抽取液直接注入血培养瓶,用血培养仪培养。脑膜炎奈瑟菌离体后会迅速自溶,肺炎链球菌和流感嗜血杆菌也很容易死亡,因此,标本应立即送检,并注意保温、防干燥。切不可置冰箱保存,否则会影响检出率。,脑脊液标本的运送,常温立即送检，实验室收到标本后应立即接种。脑脊液标本送检的理想时间为15分钟内，半小时送检是可接受的，如果送检时间超过1小时，则会影响结果，在结果报告时，在备注处注明此情况。如不能及时送检，可使用血培养瓶（怀疑脑膜炎奈瑟菌和淋病奈瑟菌感染时，请勿使用血培养瓶）,六、穿刺液标本的采集,穿刺液类标本的采集,穿刺液培养标本包括胸水、腹水、心包液、关节液、鞘膜液等穿刺液培养标本。采集时间：一般在用抗生素等抗菌药物治疗之前，或在停止使用抗菌药物之后2 3d采集标本。,穿刺液类标本的采集,采集方法：无菌操作穿刺抽取标本或外科手术采集标本；标本采集量应1ml。 胸腔积液、腹水可抽取10 ml, 心包液、关节液等可抽取2 5 ml 。标本采集后注入无菌小瓶或无菌试管中送检也可将抽取液直接注入血培养瓶,用血培养仪培养。,七、胃液及胆汁培养标本,胃液及胆汁培养标本,抽取空腹胃液5ml，置无菌管内送检；胆汁的采集方法有三种：十二指肠引流法（以“B”管来自胆囊，做细菌培养意义较大）、胆囊穿刺法及手术采取法，由临床医生 采集胆汁量为5ml，放入无菌密封容器立即送检。,八、分泌物采集规范,分泌物样本,标本的选择更大程度上依赖于感染的程度和性质而不是可疑的病原体。对大多数开放伤口，采集前应先去除表面菌群。除非有渗出物，干燥、结痂伤口一般不做培养。闭合脓肿应取渗出物和脓肿壁标本。开放脓肿处理同开放伤口。烧伤伤口应在广泛清洗和清创术后采集培养。建议取活检标本，伤口表面定量培养不一定有意义。代表性的标本应采自病灶活动区域或基底部有而不仅仅是脓液。,棉 花 纤 维 + 竹 / 木 条,抑 菌 区 是 因 为 ： 植 物 分 泌 出 来 的 ： 脂 肪 酸 ； 树 脂 ； 福 尔 马 林,氯 气 ， 重 金 属 与 胶 水 的 影 响,分泌物采集规范,1、对开放性病灶的采集：如眼结膜脓性分泌物、扁桃体、外耳道、手术后切口、导管治疗感染、瘘管内脓液、生殖道分泌物等均属于开放性病灶。应先用灭菌生理盐水冲洗表面污染菌，去除旧的分泌物，用灭菌拭子采集病灶深部或边缘的标本分泌物，也可取感染部位下的组织送检。也可对渗出液作厌氧培养。开放病灶不能做厌氧培养。,分泌物采集规范,2、闭锁性脓肿：如淋巴脓肿、肺脓肿、肝脓肿、腹腔脓肿、盆腔脓肿等，对封闭的脓肿常采用穿刺或引流的的方法采样，应在用药前采集，应注意脓液的气味、性状、颜色注意厌氧菌存在的可能。不能及时送检应应用输送培养基。,分泌物采集规范,3、烧伤伤口：清创，出现渗出液后以拭子用力采集，仅作需氧培养。也可送检活检组织标本。4、脓疱或水疱：酒精消毒使之干燥，对于患儿用23号针头挑破脓疱，拭子采集脓疱液和基底部标本。5、标记：不要只写“分泌物”标记标本，应有专门的描述和解剖来源。注明渗出液来自开放伤口还是闭合伤口。,九、生殖道标本采集规范,生殖道标本的采集方法,推荐使用男性或女性专用拭子。男性前列腺：用肥皂和水清洗阴茎头，通过直肠按摩前列腺，用无菌拭子收集液体或使液体进入无菌管内。男性尿道：用泌尿生殖道拭子插入尿道腔2 4cm，旋转拭子，至少停留20s，而使之容易吸收。,生殖道标本的采集方法,女性阴道：擦除过多的分泌物和排出液，用2支无菌拭子从阴道穹隆部黏膜处获取分泌物。 1支需要涂片,1支拭子做培养。女性尿道：患者排尿1h后采集，拭去尿道口的渗出物，用拭子通过阴道，靠着耻骨联合，按摩尿道，采集尿液。宫颈：用无润滑剂的扩阴器使宫颈可见，用拭子从宫颈上拭去黏液和分泌物，丢掉拭子，用新的无菌拭子紧帖宫颈内道轻轻采样。后穹窿：送抽吸液。,十、其他无菌体液的采集运送规范,其他无菌体液的采集运送规范,1无菌采集是培养成功的首要因素2采集的标本应立即送至临床细菌室，脑膜炎球菌有自溶酶，离体后回迅速自溶。肺炎链球菌和流感嗜血杆菌离体后极易死亡。3延迟送检时一定不能放冰箱，肺炎链球菌和流感嗜血杆菌等对温度敏感的细菌在冰箱会很快死亡。,十一、厌培养标本采集规范,厌培养标本采集规范,1.痰标本的厌氧培养标本采集：必须用气管穿刺法获得痰液，从口腔吐出的痰标本不能用于厌氧培养。2.尿标本的厌氧培养标本采集：耻骨上膀胱穿刺获得尿标本可用于厌氧菌培养 3大便标本厌氧培养标本采集： 可用排出的便做厌氧培养但也应少与空气接触。,厌氧培养,在正常上班时间：申请厌氧培养的科室应邀请实验室，由临床医生或护士采集，细菌室行床边接种。自然排出的尿标本、用棉拭子采集的分泌物、自然咳出的痰标本均为不合格的厌氧培养的标本，应于退检。没有条件或不能及时送检的情况下均应用输送培养基放置标本 。,培养结果结合涂片判断定植菌或致病菌,尿培养分离出3种以上的细菌，或分离出凝固酶阴性葡萄球菌、革兰阳性棒状杆菌等非定义为致病菌的细菌，涂片未见到，应在报告中提示可能是污染细菌建议结合临床表现考虑结果的参考价值。眼结膜拭子分离出凝固酶阴性葡萄球菌，涂片未见到，可能是污染细菌，应建议重送标本。,培养结果结合涂片判断定植菌或致病菌,前列腺液标本分离出凝固酶阴性葡萄球菌或革兰阳性小杆菌，涂片未见到，可能是污染细菌，应建议重送标本。当涂片中见到的细菌，并有细菌吞嗜现象存在，在培养时分离出该细菌可推测为致病菌。,培养结果结合涂片判断定植菌或致病菌,（5）涂片报告的日期