禽类基础免疫学与疫苗学.ppt

2020/5/5,1,基础免疫学与疫苗学,梁燕明/主任兽医师美国国家禽病兽医学院院士,英特威香港有限公司技术服务部,2020/5/5,2,禽类免疫系统的功能,抵御传染性疾病因子的入侵及其所造成的危害免疫记忆能力在某一特定致病因子再次入侵时产生更快、更为有效的免疫应答,2020/5/5,3,改善环境、强化生物安全措施维持合理饲养密度,保溫,濕度,通風公母比例恰当或分饲環境衛生鸡苗质量营养平衡减少应激控制免疫抑制性疾病正确免疫接种,影响禽类免疫系统的作用的因素,2020/5/5,4,免疫接种的目的,通过接种疫苗，使家禽免疫系统产生主动免疫，以防制某些特定传染性疾病，保障生产效益。通过种鸡接种疫苗，传给下一代，预防介卵及早期感染。,2020/5/5,5,主动免疫被动免疫,母抗能保护的疾病不是全部疾病都可靠母抗防小鸡感染主要靠母抗的传染病为传染性贫血病(CAA）禽脑脊髓炎（AE）传染性法氏囊病（IBD）*传染性呼肠孤病（REO）*注：*种鸡要打油苗,主动免疫,禽类免疫系统,2020/5/5,6,禽类免疫系统,一、体液免疫(又称浆液或全身免疫)产生循环性抗体（IgG/IgM)和分泌性IgA抗体中和或协助中和特定传染性致病因子其他干扰素IgA哈氏腺/肠粘膜表层分泌IgMRPA抗体IgGHI/ELISA抗体抗体通过血液循环全身全身免疫,2020/5/5,7,禽类免疫系统,二、细胞免疫吞噬作用巨细胞对传染性因子的的清除辅助T细胞对免疫应答的调节作用杀伤性T细胞对某些病毒感染细胞的杀灭天然杀伤性细胞对肿瘤细胞的消灭,2020/5/5,8,产生分泌性IgA抗体抵抗病毒从呼吸道感染，免疫持续期短分泌性IgA，在双体上分泌小体或J链，可通过价链与粘膜的半脱氨酸的SH基相互作用，可形成保护层，并易排除潜在的有害抗原IgA能抑制细菌，吸咐到粘膜表层，产生溶菌作用,局部免疫的重要性,禽类免疫系统,2020/5/5,9,免疫器官细胞免疫体液免疫胸腺T细胞+法氏囊B细胞+二次周边淋巴系统脾T+B细胞+哈氏腺T细胞+盲肠扁桃体T细胞+肠淋巴T细胞+血液T+B细胞+,禽类免疫系统,2020/5/5,10,胸腺、法氏囊原细胞转化为T细胞和B细胞的时间法氏囊BursaofFabricii:胚胎孵化12天龄到14天龄的小鸡胸腺Thymus:胚胎孵化12天到28天龄的小鸡,禽类免疫系统,2020/5/5,11,疫苗接种技术,正确的疫苗接种技术确保免疫程序获得一致、成功的保护力确保工作人员的安全操作不当免疫失败，导致灾难性后果,2020/5/5,12,免疫失败的原因,疫苗储存，使用不当，或稀释过度，或疫苗本身质量低劣,所造成的失败家禽已经潜伏感染疫苗所要预防的疾病家禽遗传特性和免疫反应的差异所至的失败母源抗体的干扰家禽已感染免疫抑制疾病,疫苗接种无法刺激鸡群产生相应的抗体或免疫反应,2020/5/5,13,影响滚动反应(RollingReaction)的因素,飼養管理的漏洞非全進全出環境衛生生物安全体系的不全鸡苗质量通風/NH3水/垫料空栏期,母抗应激保溫濕度大腸杆菌及霉形体多發免疫抑制因子免疫接种日龄免疫接种方法,2020/5/5,14,疫苗接种技术,接种疫苗时应遵循的原则接种前对疫苗质量进行检查，若有以下情形之一者，应弃之不用没有标签，无头份和有效期或不清者疫苗瓶破裂或瓶塞松动者生物制品质量与说明书不符，如色泽、沉淀发生变化，瓶内有异物或已发霉者过了有效期者未按产品说明和规定进行保存的疫苗,2020/5/5,15,疫苗接种技术,接种疫苗时应遵循的原则使用前认真阅读产品说明书、注意事项和疫苗生产商所推荐的使用方法疫苗稀释，应按说明所规定或相应稀释液进行稀释，注意水的质量要求，稀释时应反复冲洗以防疫苗损失，并小心操作，避免疫苗漏失,2020/5/5,16,疫苗接种技术,接种疫苗时应遵循的原则器械消毒疫苗接种用注射器、针头、镊子、滴管、稀释用的瓶子要事先清洗，并用沸水煮1530min消毒，切不可用消毒药消毒一个注射器和针头注射一定数量禽只后，一定要换用新的，如果有疫情发生，宜一只禽只用一个针头,2020/5/5,17,疫苗接种技术,接种疫苗时应遵循的原则禽群的健康状况有病或不健康禽群不宜接种在恶劣气候条件下也不应该接种免疫接种前后，加强饲养管理,2020/5/5,18,应按规定妥当保存疫苗,X,2020/5/5,19,疫苗的类型,活苗可用多种方式接种灭活苗只能通过注射途径接种,2020/5/5,20,免疫接种方法,活苗滴鼻(IN)点眼(IO)翅种(WW)皮下(SC)肌注(IM)喷雾(Spray)饮水(DW)蛋内(In-ovo),灭活苗,皮下(SC)肌注(IM),2020/5/5,21,主要活苗及接种方式,2020/5/5,22,点眼/滴鼻免疫,2020/5/5,23,点眼/滴鼻免疫,确保每只鸡都能得到准确的疫苗量达到快速免疫适用于任何年龄的鸡只操作简单,但增加劳动强度,重要性及优点,2020/5/5,24,重要性及优点,-局部免疫：上皮粘膜免疫系统建立第一道免疫屏障-基础免疫-针对性较强,点眼/滴鼻免疫,2020/5/5,25,缺点：,免疫持久性差个体差异大操作要求准确劳动强度高,点眼/滴鼻免疫,2020/5/5,26,接种方法以无菌稀释液溶解所需的疫苗量（通常1000份疫苗使用30毫升稀释液）通常在稀释液中加有着色剂，并附带一种专用滴嘴使用標准滴嘴將1滴溶解好的疫苗溶液,自3厘米的高度滴入鸡的眼睛或鼻孔内免疫时滴嘴不得接触眼球，以免损伤眼睛滴鼻免疫时，用指头封住一侧鼻孔，以确保疫苗能更好地从另一侧鼻孔吸入,点眼/滴鼻免疫,2020/5/5,27,点眼/滴鼻免疫,接种过程中，要始终保持滴嘴绝对垂直，以确保每滴疫苗的接种剂量保持恒定(注意疫苗瓶角度)必须确保每只鸡都接种到正确的疫苗量检查口中着色剂注意接种过程中疫苗溫度,接种方法,2020/5/5,28,点眼/滴鼻免疫,常犯毛病,责任心不强疫苗保存不当操作不当(漏免、剂量不准)(伤眼、过量、甩掉),要培训有很强的责任心正确保存、使用加强操作前培训监督和考核最重要是保证免疫质量免疫前后检测抗体水平变化,如何避免以上毛病,2020/5/5,29,饮水免疫,2020/5/5,30,确保每只鸡都能得到疫苗达到快速免疫适用于任何年龄的鸡只操作简便,重要性及优点,飲水免疫,2020/5/5,31,飲水免疫,缺点：,免疫持久性差缺呼吸道局部免疫个体差异大每只鸡得到的疫苗量?容易造成RollingreactionIB/ILT反應大,2020/5/5,32,饮水器清洗,将饮水器清洗干净48小时前禁用一切消毒剂和洗洁剂饮水器具应放在阴凉处，避开强光线和热在夏天，应选择清早进行,飲水免疫,接种方法,2020/5/5,33,免疫前视天气情况停止饮水2小时，免疫后经1/2小时再正常供水,飲水免疫,接种方法,停水,为确保免疫效果，应在2小时内让所有小鸡饮下足够的疫苗剂量,2020/5/5,34,必须保证饮用水的质量，应使用清洁、不含氯和铁的自来水或雨水。,飲水免疫,水的质量,接种方法,井水可能含有重金属，有机物,地面流入的细菌或汚物，,2020/5/5,35,-3个一条龙企业-每个企业采井水样100个农场-选择最好的25个和最后的25个农场-比较FCR/体重/成活率%/屠体废弃率%水样分析-阳离子:NH3/Ca/Mg/Na/K/Fe/Zn/Mn/Cu-阴离子:P/N/S/HCO3/CO4/Cl/NO3-其他：硬度/溶氧/电导/pH,美国阿肯色洲调查,2020/5/5,36,HiLo差异料肉比FCR2.002.060.06体重(g)1859179168成活率%96.595.70.8屠体废弃率%0.771.120.35硝酸盐3.87.03.2,美国阿肯色洲调查,2020/5/5,37,项目体重料肉比成活率%屠体废弃率%硬度0.11-0.02-0.010.09钙0.10-0.15-0.130.18镁0.18+0.150.030.10钾-0.04-0.01-0.12-0.05硝酸盐-0.14-0.03-0.080.13溶氧0.18+0.100.100.11碳酸氢盐0.11+0.030.020.02,美国阿肯色洲调查,2020/5/5,38,平均标准最大接受标准总菌数0/ml100/ml大肠杆菌0/ml50/ml硝酸盐10mg/l25mg/l亚硝酸盐0.4mg/l4mg/lpH6.8-7.5-硬度60-180-Ca60mg/l-Cl14mg/l250mg/lCu0.002mg/l0.6mg/lFe0.2mg/l0.3mg/lPb0.02mg/lMg14mg/l125mg/lNa32mg/l-S125mg/l250m/lZn1.50mg/l,Ref:PoultryInternationalJune1989,水的质量,2020/5/5,39,重型鸡或天气炎热时,饮水量应取上限,溶解疫苗所需的水量取决于鸡的日龄。大致的标准是：,飲水免疫,水量,接种方法,2020/5/5,40,飲水免疫,准备足够的饮水槽和饮水器,最好选择塑料类饮水器具，不能通过乳头状饮水器供水的饮水系统进行活苗的免疫,钟式饮水器：1个/100只鸡乳头饮水器：1个/15只鸡杯式饮水器：1个/30只鸡6号饮水槽：1个/150只鸡8号饮水槽：1个/200只鸡,肉鸡至少提供:,2020/5/5,41,飲水免疫,疫苗的準备,加于水脱脂牛奶或脱脂奶粉，可提高病毒疫苗的稳定性在水里开启疫苗瓶，以清洁的棒进行搅拌，将疫苗和水充分混匀,2020/5/5,42,飲水免疫,常犯毛病,责任心不强疫苗保存不当操作不当饮水器清洗不干净水的质量停水不当漏免、剂量不准,如何避免以上毛病,要培训有很强的责任心正确保存、使用加强操作前培训监督和考核最重要是保证免疫质量免疫前后检测抗体水平变化,2020/5/5,43,皮下注射肌肉注射,2020/5/5,44,确保每只鸡都能得到准确的疫苗量达到快速免疫适用于任何年龄的鸡只,重要性及优点,皮下/肌肉注射,2020/5/5,45,缺点：,应激大操作要求准确劳动强度高缺呼吸道局部免疫局部反应产蛋鸡的影响,皮下/肌肉注射,2020/5/5,46,注射器,注意事项接种过程中应定时调校连续注射器(calibration)，杜绝连续注射器滴漏现象/气泡出现注射器具严格消毒，剔除钝卷针头，一般用18G(国际单位)针头，针头长短视接种鸡群个体大小而异针头注射一定数量(100-500只)禽只后，一定要换用新的，如果有疫情发生，宜一只禽只用一个针头注射器的维修保养,定期更换易损配件,皮下/肌肉注射,2020/5/5,47,疫苗,注意事项接种前将灭活苗升温至25300C，并充分摇匀接种过程中应不时摇动疫苗疫苗开启后要在24小时内用完灭活苗剂量宁多勿少疫苗分装不可打开瓶盖直接倾倒，以免污染(可用连续注射器抽注),皮下/肌肉注射,2020/5/5,48,多采用颈部皮下注射法本方法适用于活苗/灭活苗屠体废弃率少只处理颈部,较经济,皮下注射,2020/5/5,49,皮下注射,接种方法,接种时，用手轻轻提起鸡的颈部皮肤，将针头从颈背侧中段以下，接种方向宜朝远离头部的方向刺入，使疫苗注入皮下，皮肤与肌肉之间注意勿伤及肌肉，血管，神经和骨头,2020/5/5,50,肌肉注射,腿肌注射法适用于笼养的商品蛋鸡群抓住鸡脚，朝身体方向刺入外侧腿肌应小心避免刺伤腿部血管、神经和骨头,2020/5/5,51,肌肉注射,胸肌注射法如果注射疫苗对胸肌的影响不是至关重要，而注射剂量又要求十分准确时，可采用此法在龙骨外侧胸部1/3处，以18G针头成300倾斜，朝背部方向刺入胸肌切忌垂直刺入胸肌，以免刺穿胸腔,2020/5/5,52,肌肉注射,胸肌注射法同时应避免刺得过深伤及骨膜进针太前易入嗉囊太靠后易伤及内脏在翅膀靠近肩部无毛处的翼下内侧肌肉注射比较确实,2020/5/5,53,肌肉注射,尾部肌肉注射由于肌肉加工的需要，或者由于多次接种的原因，限制使用颈部、胸部、腿部和翅膀注射的方法，可采用尾部肌肉注射将针头朝着头部的方向沿着尾骨的一侧刺入尾部为防止疫苗渗漏，不能过拨出针头,2020/5/5,54,翼翅刺种法,2020/5/5,55,确保每只鸡都能得到准确的疫苗量达到快速免疫免疫力佳适用于任何年龄的鸡只操作简便,但增加劳动强度针对性较强,重要性及优点,翼翅刺种法,2020/5/5,56,缺点：,操作要求准确劳动强度高,翼翅刺种法,2020/5/5,57,翼翅刺种法,多用于鸡痘及AE+POX接种适用于各种年龄的家禽细胞免疫英特威疫苗采用特殊的接头与稀释液混合溶解;及特殊的双针槽的刺种针,2020/5/5,58,翼翅刺种法,将接种针充分插入疫苗溶液中，待针槽充满药液后，将针轻靠小瓶内壁，除去附在针上的多余药滴。轻轻展开鸡翅，将针插入鸡翅翼膜内侧。刺种针勿接触鸡羽,接种方法,2020/5/5,59,翼翅刺种法,刺种时，应小心拨开鸡羽，注意勿伤及肌肉、关节、血管、神经和骨头给2周龄以下小鸡接种时，最好每接种一瓶疫苗(500-1000鸡)换一枚刺种针勿用不合适的针接种疫苗;注意针槽勿向下免疫后7-10天检查结节Checktakes,2020/5/5,60,翼翅刺种法,免疫后7-10天无结节的因素,-免疫接种不当-鸡痘2nd免疫接种-已感染野毒/强毒,2020/5/5,61,翼翅刺种法,注意勿污染疫苗瓶及刺种针:乳酪状渗出物污染LT及鸡痘免疫反應(特别是火鸡)鸡痘眼,2020/5/5,62,喷雾免疫,2020/5/5,63,操作简便达到快速免疫适用于任何年龄的鸡只局部免疫:上皮粘膜免疫系统建立第一道免疫屏障,重要性及优点,噴霧免疫,2020/5/5,64,缺点：,易免疫反應大RollingreactionILT反應大操作要求高,噴霧免疫,2020/5/5,65,喷雾免疫命名,喷雾结膜鼻腔气管上部,气雾鼻腔气管气囊肺脏,噴霧免疫,2020/5/5,66,喷雾免疫,喷雾免疫vs气雾免疫雾滴直径80-120微米-雾滴直径7日龄雏鸡可用,2020/5/5,67,监测的解剖学部位不同接种途径疫苗病毒的分布饮水免疫滴眼免疫泄殖腔免疫喙10000口腔1001000喉头000气管000鼻腔28*1000鼻孔4000眼01000泄殖腔100*100*100法氏囊00100*部分着色*由肾排除而着色0=无着色,噴霧免疫,2020/5/5,68,家禽呼吸系统防御机制,机械性机制免疫学机制纤毛粘膜淋巴组织抗体生成细胞巨噬细胞哈德氏腺-+？泪管-+？鼻腔+气管+-*-支气管+*+-细支气管+肺-+*+,*病毒或MG感染，呈现淋巴细胞侵润*散在性淋巴细胞侵润,所以深部免疫反应比较强,噴霧免疫,2020/5/5,69,Figure1.Anatomyoftherespiratorytractofthechicken,ventralview(Grau,1943),气囊(300毫升),2020/5/5,70,干微粒沉降与直径的关系,雾滴直径(微米)沉降(CM/秒)降落1米所需时间0。12。9X10-541天1。02。9X10-310小时10。02。9X10-16分钟50。07。214秒100。028。83。5秒,(J。VANECK，PHIDOON，1990),噴霧免疫,2020/5/5,71,在21度C下雾滴寿命与其直径的关系和相对湿度的关系,雾滴大小(微米)雾滴寿命(秒)RH*=50%RH*=75%RH*=95%201。81。71050510。462。51002041。7250,(J。VANECK，PHIDOON，1990),噴霧免疫,2020/5/5,72,(J。VANECK，PHIDOON，1990),雾滴的平均沉降和完全挥发前的沉降距离与雾滴大小的关系,雾滴直径(微米)平均沉降(CM/秒)完全挥发前的沉降距离200。61M503。637CM10014。46CM,噴霧免疫,2020/5/5,73,喷雾免疫,1日龄雏鸡的喷雾免疫全自动喷雾免疫最常用的疫苗是ND,IB,和Cox局限在孵化室内使用用来稀释疫苗的水量取决于喷雾器的类型及型号每小时可免疫近万只鸡,2020/5/5,74,喷雾免疫,1日龄雏鸡的喷雾免疫使用可调节喷嘴的人工喷雾器免疫1000D疫苗+200毫升水（200C）水质要非常好，最好用蒸馏水或去离子水，疫苗瓶要在水中开启，以便溶解疫苗喷雾器应绝对清洁，一定不能有消毒剂或洗涤剂残留喷雾时要调节好喷嘴大小，使雾滴大小合适，喷雾中定期检查及调节喷嘴喷雾前，把装有雏鸡的雏鸡盒互相靠在地上排成一行，绝不能放在靠近热源的地方；喷雾过程中，将喷嘴维持离地面约40厘米高度喷雾至雏鸡感到潮湿，但又不能淋湿它们为好免疫后，应让雏鸡在盒内停留1015分钟,2020/5/5,75,喷雾免疫,较大鸡只的喷雾免疫农用喷雾器械等1000D疫苗+500毫升优质水,2020/5/5,76,Figure8.Improvingtheeffectivenessofsprayingbyextendingthesprayinglanceandattachingabranchtotheend.,2020/5/5,77,喷雾免疫,较大鸡只的喷雾免疫气雾法使用时散发一种非常细的薄雾/浓雾雾滴直径20微米采用此技术必须在鸡群处于最理想的健康状态时才可使用，缺乏操作经验的人员不要采用这种技术进行气雾操作的人员必须戴上防护面罩,2020/5/5,78,喷雾免疫,注意事项喷雾免疫应在封闭的鸡舍内进行，有通风设备的鸡舍，要关闭通风设备一段时间后，再进行免疫。开放式鸡舍应该用防风窗帘封闭再喷雾，否则是没用的喷雾时，鸡舍内光线应该暗些，有窗户的鸡舍宜在黄昏进行喷雾免疫免疫后，要彻底清洗接种器械的内外部，最好用热水操作人员最好使用防护面罩，保护口鼻,2020/5/5,79,噴霧免疫,2020/5/5,80,马立克疫苗接种,2020/5/5,81,影响马立克疫苗接种成效的因素疫苗品质解冻稀释及接种过程注射器材的清潔殺菌方式,接种鸡群爆发马立克病的最常见因素为对小鸡注射前的準備工作，疫苗的混合及处理方式不適当,马立克疫苗接种,2020/5/5,82,马立克冷冻疫苗产品的準备,稀释及注射自液态氮中取出疫苗时，每次只能取出即刻要用的一瓶，其他的疫苗都必须全部马上再放回液态氮筒中当疫苗取出后及与稀释液混合的这段期间，如果超过2分半钟则其效价可能完全消失,马立克疫苗接种,2020/5/5,83,当安瓶(疫苗)自液态氮取出时，应立即以温度适当的水来加以解冻水的温度很重要，应当维持在18-25C之间,用来解冻疫苗的水温度对於马立克疫苗效价的影响,水温疫苗效价25C100%40C75%18C80%,马立克疫苗接种,2020/5/5,84,安瓶(疫苗)的解冻以及疫苗与稀释液混合的操作其整个过程应在60秒之内完成,马立克疫苗在水中解冻时搁置时间对疫苗效价的影响,搁置时间疫苗效价在水中30秒(对照)100%5分钟83%10分钟68%15分钟47%,马立克疫苗接种,2020/5/5,85,稀释液应当随时维持在室温(18-25C)来与疫苗混合，稀释液在与疫苗混合时,绝不可先冰冻过,稀释液的温度疫苗效价对照(室温)100%冰冻过的稀释液(4C)78%,马立克疫苗接种,稀释液的温度对马立克疫苗效价的影响,2020/5/5,86,抗生素的添加,有很多种抗生素都对疫苗中的病毒有害,即使是未完全破坏它,马立克疫苗接种,2020/5/5,87,每次都应以全新的塑胶无菌针筒，用18G/1.5”针头,以便将安瓶中的疫苗吸取并注入稀释液中,抽取少量的稀释液到针筒中，用以洗涤安瓶，上述过程应再重覆2-3次洗涤安瓶的措施可回收剩余达14%的疫苗病毒,马立克疫苗接种,2020/5/5,88,疫苗混合及接种完毕，应在30分钟内完成，可保留疫苗之效价免受损失达9%,马立克疫苗接种,吸取疫苗的动作应缓慢温和,混合的过程得温柔地操作，以免内含疫苗病毒的细胞受破坏,2020/5/5,89,马立克疫苗接种,要经常检查连续注射器及自动注射器是否有漏水注射器避免潮湿或骯髒，或与不潔的表面接触自动注射器潴留底板的鈕附近是否会漏水,接种作业